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  • 發布時間:2020-08-17 16:54 原文鏈接: 糖的硅膠G薄層層析實驗

    實驗方法原理 硅膠 G 是一種添加了粘合劑的硅膠粉,約含12 %-13 %的石膏,它可以把一些物質從溶液中吸附于自身的表面上,利用它對各種物質的吸附能力不同,再用適當的溶劑系統展層,使不同的物質得以分開,使用顯色劑顯色,得到不同的 Rf 值。糖在硅膠 G 薄層上的移動速度與糖的分子量和羥基數有關,經過適當的溶劑展開后,糖在薄層上的移動速度是戊糖>己糖>雙糖>三糖。


    實驗材料 糖標準溶液 乙酸乙酯 乙酸 氯仿 甲醇 硫酸 二苯胺 苯胺 磷酸 丙酮


    試劑、試劑盒 多糖


    儀器、耗材 層析缸 硅膠 G 板 毛細管 烘箱 電吹風機 試管 試管架


    實驗步驟


    溶液配制:


    1 . 糖標準溶液: 木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖10 mg/ml 水溶。

     

    2 . 樣品液:多糖的水解液。

     

    3 . 展開劑: ①乙酸乙酯∶乙酸∶水=2∶1∶1;②氯仿∶甲醇=60∶40(V/V)。

     

    4 . 顯色劑: ①25%~50%硫酸;②二苯胺1 g,苯胺1 ml和 85%磷酸5 ml 溶于50 ml 丙酮中。


    操作步驟:

     

    1.將硅膠 G 板于100 ℃烘箱活化后冷卻至室溫,用毛細管點樣,點樣位置為從硅膠板下端1.5 cm,兩側2~3 cm,每個樣品點相距1~1.5 cm,斑點直徑2 mm。點一次吹干一次。

     

    2.將展層劑于層析缸中平衡。數分鐘后,將硅膠板放入。

     

    3.當展層劑移至距上端2~3 cm時,取出硅膠板吹干,均勻噴上顯色劑,于100 ℃顯色。

     

    4.15~30 min后從烘箱取出,測量 Rf 值。


    其他


    1.薄層層析與其他層析法比較有哪些優點?


    2.選用展層劑的依據是什么?


    3.糖的顯色劑還有哪些?


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