79、細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎？
不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0 ， 溫度 37℃其作用能力最強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反復沖洗細胞培養瓶，以便于將含血清的培養基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液濃度為：
（1）0.05%胰蛋白酶+0.02% EDTA；
（2）0.25%胰蛋白酶+0.03% EDTA；
（3）0.25% 胰蛋白酶
溶液pH8.0-9.0；使用D-Hank液配制。
多數細胞傳代消化可使用0.05%胰蛋白酶+0.02% EDTA這種消化液。
80、培養基在使用過程中應注意的問題
（1）培養基在使用前需37℃預熱或在室溫平衡后再使用。
（2）細胞培養過程中，吸取過培養液的吸管不能再用火焰燒灼，防止殘留在吸管內的培養基焦化，將有害物質帶入培養液中。
（3）盡量縮短各種液體、細胞的暴露時間。
（4）避免液體間、細胞間的交叉污染。
（5）配制完全培養基時，配制的量最好在2周內用完為好。
81、血清的有關問題
新生牛血清：新出生牛5天內取血制成
小牛血清：小牛出生16周以內采血制成。
胎牛血清：（進口血清）要求剖腹取胎制成。
國內廠家往往不能做到，經常把出生2天以內采血稱為胎牛血清。
根據血清的生產工藝及血紅蛋白、內毒素含量又分為：
（1）.特級胎牛血清：40納米過濾，內毒素含量≤10 EU，血紅蛋白含量≤10 mg/dl。
（2）.優等胎牛血清：經過3次100納米過濾，
內毒素含量≤25 EU/ml，血紅蛋白含量≤25 mg/ml。
（3）.標準胎牛血清：3次100納米過濾，低內毒素，
低血紅蛋白含量。
（4）.活性碳/葡聚糖處理血清：激素含量大大降低。
（5）.透析型胎牛血清：次黃嘌呤和胸腺核苷含量大大降低。
82、其他細胞培養用液：除培養基、血清、谷氨酰胺外，其他幾種液體也屬必須，不可省略。
（1）雙抗：200倍，（1 ml/支）其終濃度為青霉素100 U/ml；鏈霉素100 ug/ml，-24 ℃保存。
（2）L-谷氨酰胺：100倍，（1 ml/支）， 終濃度2 mM，-24 ℃保存。
（3）丙酮酸鈉：配制濃度50 mM，4 ml/支，終濃度為1 mM/ml，-24 ℃保存。
（4）Hepes液：配制濃度1 M（5 ml/支），一支Hepes加入到200 ml完全培養基中，終濃度為25 mM/ml，常溫保存。
83、支原體污染及檢測
（1）.支原體污染在細胞培養中最常見、不易被查覺，但支原體污染可顯著影響細胞功能干擾實驗結果。支原體是介于細菌和病毒之間的目前所知能獨立生活的最小微生物，它無細胞壁，形態呈高度多形性，最小直徑0.2 um，可通過濾器。
目前中心通過對國內100余株/系細胞的檢測，形勢不容樂觀。污染率達30% ~ 60% 。課題組從國外引進細胞株/系也經常出現支原體的污染。支原體在污染細胞后，它通過影響細胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培養基中的氨基酸來抑制細胞的生長，并能降低細胞的融合率。因此，在運用各種細胞系進行實驗研究時，首先要證明所用細胞有無支原體的污染。
（2）.支原體污染后，培養基可不發生渾濁，細胞病變輕微或不明顯，因此難以發現。目前，支原體檢測的方法有以下幾種。
（a）.相差顯微鏡觀察；
（b）.低張處理地衣紅染色法；
（c）.熒光染色法；
（d）.酶標法；
優點：靈敏度高，檢測耗時短，樣品量小
（只需50ul細胞培養用液上清）。
缺點：引物及制劑費用較高。
84、培養液pH 值變化太快
可能原因
（1）CO2 張力不對。
（2）培養瓶蓋擰得太緊。
（3）NaHCO3 緩沖系統緩沖力不足。
（4）培養液中鹽濃度不正確。
（5）細菌、酵母或真菌污染。
建議解決方法
（1）按培養液中NaHCO3 濃度增加或減少培養箱內CO2 濃度，2.0 g/L 到3.7 g/L 濃度NaHCO3 對應CO2 濃度為5％ 到10％。
（2）松開瓶蓋1/4 圈。
（3）改用不依賴CO2 培養液。加HEPES 緩沖液至10 到25 mM 終濃度。
（4）在CO2 培養環境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks 鹽配制的培養液。
（5）丟棄培養物，或用抗生素除菌。