細胞雜交瘤技術

細胞雜交瘤技術

雜交瘤技術

雜交瘤技術是1975年Kohler和Milstein用于制備單克隆抗體而創建的一項重要技術，被譽為“免疫學上的一次革命”。此技術被廣泛用于各種單克隆抗體的制備。抗體是由B淋巴細胞分泌的，一個B淋巴細胞只能分泌一種抗體。把B淋巴細胞和骨髓細胞融合，即可形成在體外長期存活并分泌的雜交瘤細胞，如果把單個雜交瘤細胞克隆化，擴增傳代，其分泌的抗體即為高度純一的單克隆抗體。單克隆抗體具有高度專一性，一種單克隆抗體只能結合一種特定的抗原決定簇。正是由于其這種高度專一性，因此被廣泛用于疾病的論斷和治療，生物大分子的鑒定、定位和分離純化，以及一些細胞器，特定細胞或病毒的鑒定、定位和分離等方面, 具有極其遠大的應用前景, 因此，用于制備單克隆抗體的雜交瘤技術也變得越來越重要，應用范圍越來越廣。

實 驗 目 的

1. 掌握雜交瘤技術的基本原理和基本操作方法

2. 能運用雜交瘤技術來制備自己需要的單克隆抗體

實 驗 原 理

雜交瘤技術的建立基于以下三種關鍵技術。

 細胞雜交瘤技術一、動物免疫

動物體內的B淋巴細胞在特定外來抗原的刺激下，可以大量增殖變成漿細胞以分泌針對于該抗原的抗體。脾內不同的B淋巴細胞克隆可分泌針對不同抗原的抗體。當受到特定外來抗原刺激時，相應的B淋巴細胞克隆便大量增殖以分泌相應的特異性抗體。動物免疫的作用就是用特定外來抗原對動物進行一次或多次免疫，以刺激能分泌針對于該抗原抗體的B淋巴細胞大量增殖，從而得到大量產生專一的B淋巴細胞。

二、細胞融合

B淋巴細胞受外來抗原刺激后可以分泌抗體，但它在體外存活很短時間（zui多兩周）后即死亡；而骨髓瘤細胞不分泌任何免疫球蛋白，卻能在體外長期存活。如果能將這兩種細胞的特性結合起來，我們就能得到既能分泌抗體又能在體外長期存活的細胞。

脾臟是動物體內B淋巴細胞集中的zui大免疫器官, 取出脾細胞（B淋巴細胞）和骨髓瘤細胞融合后，能產生五種細胞類型；未融合的脾細胞和骨髓瘤細胞, 自身融合的脾細胞和骨髓瘤細胞，以及脾細胞和骨髓瘤細胞融合形成的雜交瘤細胞。其中雜交瘤才是我們需要的，因此就要設法將此雜交瘤細胞從上述細胞混合液中挑選出來。