細胞消化經驗總結！

一、酶消化法

1、胰酶。這是用得多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據細胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。

0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細胞間。配制時不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活性。保存于-20度。

2、膠原酶。這種方法比較少，一般是用原代培養時，從組織消化下細胞。這種方法作用溫和，對細胞損傷較小，但是，價格也較貴。中止同樣是用血清。

二、離子螯合劑

不破壞細胞表面分子，僅與CAMs螯合，因此，如果檢測細胞表面分子的話，盡量，甚至是一定不要用酶消化法。

1、EDTA。用得也是非常多。一般濃度在0.02%左右。作用于細胞與間質，對細胞間也有一定作用。注意，它能顯著影響pH值，而且在弱堿性條件下才易溶。因此，配制時應調節好酸堿度。它不能被終和。因此，消化下來的細胞要洗一遍。

2、商品化的無酶消化液。個人的使用經常覺得對細胞的損傷比較大，但是分離成單細胞懸液的能力確實比較強。

三、物理法

直接吹打或用細胞刮子將細胞刮下來。

四、冷凍法

此方法僅能用于細胞傳代時。無法使組織上的細胞脫落下來。本方法的原理，我想是因細胞冷凍后收縮，從而從培養瓶上脫落下來。優點是：對細胞損傷小，不需要中止或洗細胞，方便，不需要另外配制消化液。

特別適用那些貼壁不是特別緊，又特別嬌氣的細胞。不足是細胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導致大量細胞死亡操作的間充質干細胞、DC細胞的培養，效果非常滿意。

具體過程是：

1、用較多的4度的PBS洗滌一遍細胞(以6孔板為例，加1.5ml/孔)，

2、再加0.5ml 4度的PBS，靜置操作臺上，很快細胞就小片脫落，

3、輕輕吹打，細胞即完全脫落，

4、按一定比例傳代。