胡蘿卜根離體培養實驗

實驗概要

學習胡蘿卜離體根培養的基本方法；掌握誘導愈傷組織的基本技術。

主要試劑

1. MS 培養基   10 mg/L 2,4-D   2 mg/L 6-BA

2. 70% 乙醇

3. 0.1% 升

主要設備

1. 超凈工作臺

2. 滅菌鍋

3. 顯微鏡

4. 接種器械

5. 不銹鋼打孔器

6. 燒杯（ 500ml ）

7. 培養皿（ 225px ）

8. 移液管

實驗材料

市售大而新鮮的胡蘿卜

實驗步驟

1. 將胡蘿卜用自來水沖洗干凈，用刮皮刀除去表皮 1-2mm ，橫切成大約 10-40mm 厚的切片。以下步驟全部無菌操作。
2. 胡蘿卜片經 70% 乙醇處理 30-60 秒后，無菌水沖洗一遍，再用 0.1% 升汞或飽和漂白粉溶液浸泡 10 分鐘，無菌水沖洗 3-5 次。
3.   將胡蘿卜片平放于培養皿中，一手用鑷子固定胡蘿卜片，一手用打孔器按平行于組織片垂直軸方向打孔。每個孔應打在靠近維管形成層的區域，務必打穿組織。然后從組織片中抽出打孔器，用玻棒輕輕將圓柱體從打孔器中推出，放到無菌水的培養皿中。重復打孔步驟，直至制備足夠數量的組織圓柱體。  
4. 用鑷子取出 1-2 條胡蘿卜圓柱體，放入另一含無菌水的培養皿中，用刀片切除圓柱體兩端各 2mm 長的組織。將剩下的組織切成厚約 2mm 的小圓片。在整個切割操作中要多次火焰消毒鑷子和解剖刀，冷卻后再使用。
5. 用鑷子將圓片轉到滅菌的濾紙上（每次一片），將圓片兩面的水分吸干，并立即接種到培養基表面。每瓶接種 6-8 片。
注意：接種時使三角瓶呈一定的傾斜度，用手拿鑷子、灼燒等整個接種過程不要直接在培養基上方完成，以減少污染機會。
6. 將培養物置于 25℃溫箱中培養。可將一部分放在光下培養，一部分放在暗中培養，比較光下和暗處對誘導愈傷組織的反應。