脾臟單個核細胞懸液如何制備

(1)大鼠斷頸處死后，無菌取脾置于消毒平皿中稱重;(2)超凈工作臺上置10cm直徑無菌平皿，加入5～10ml D-hanks平衡液 ，置一80目的不銹鋼篩于平皿中，脾臟置于篩網中，用剪刀剪碎脾，用5ml玻璃注射器針芯輕輕捻磨脾臟，使分散的細胞濾過金屬網進入平皿的液體中， D-hanks沖洗一次；(3)用吸管吸取沖洗液，200目的鋼篩過濾一次后收集至離心管中；(4)1000rpm，離心5～10min，棄上清；(5)加入約1ml雙蒸水，吸管打勻后20s后加入等量的1.8%的NaCl溶液，然后加入大量D-hanks調節滲透平衡，以***紅細胞，但對 白細胞沒有影響；用D-hanks液洗滌細胞2～3次，用含有1mM/L的谷氨酸胺、100IU/ml青霉素G、100g/ml鏈霉素、10%的胎牛血 清的RPMI－1640重懸細胞，調節細胞濃度為5106/ml，臺盼蘭染色檢測細胞存活率大于95％；(7)接種至培養板或培養瓶中。