色譜柱再生——污染填料后對色譜柱的處理過程

1、故障現象

用戶反映YWG C18 10μ（4.6mmX150mm）色譜柱使用20天左右后，柱壓升高約1Mpa左右，分離效果變差，用蒸餾水清洗色譜柱沒有明顯改善。

色譜柱分離度不好，柱效不高，可能是用戶分析發酵液，簡單的過濾后進樣分析，其中的蛋白質等可能沒有去除完全，致使過多的蛋白質沉淀在色譜柱中，加之對沉淀的蛋白質沒有及時沖洗，長時間后，破壞C18官能團，而且客戶使用純水長時間沖洗色譜柱，官能團坍塌的可能性也很大。色譜柱壓力增加，可能是柱頭篩板被樣品雜質堵塞，或者填料被污染或被流動相破壞，導致柱床層堵塞。

2、檢測

用10%乙腈水，1.0ml/min的流量沖洗色譜柱，沖洗大約30分鐘，將色譜柱中可能存在的磷酸緩沖鹽置換掉。然后用85%甲醇流動相，尿嘧啶、硝基苯、萘、芴反相樣品評價色譜柱：

可見色譜峰形非常差，可能是柱頭污染，色譜柱中部分填料已經被污染便性，柱頭打開，發現柱頭部分色填料已經變，部分填料板結在篩板和四氟墊圈的周圍，屬于典型的由于樣品雜質引起色譜柱填料污染導致的色譜柱性能下降。

3、修補與再生

將柱頭污染填料挖出，用同樣規格的新填料進行修補并更換新篩板，然后用85%的甲醇流動相。在相同條件下進行評價，結果如下圖所示，可見雖然色譜柱性能有所改善，但是還需要進行再生處理。

對于C18或相應的反相色譜固定相，一般采用洗脫能力比較強的有機溶劑進行再生，圖3是用異丙醇溶劑，0.5ml/min流速下，沖洗色譜柱4小時后，換用85%甲醇評價譜圖，可見色譜柱性能有比較明顯的改善。

圖4是采用二氯甲烷溶劑，在0.5ml/min流速下又沖洗色譜柱30分鐘，然后換用異丙醇沖洗色譜柱2個小時后，換用85%甲醇流動相評價結果，與圖3比較可以看出，色譜柱性能又有進一步改善。雖然與新色譜柱出廠指標有一定差距，但是較再生之前有極大差別。

4、結果分析

色譜柱的問題類型非常多，其中許多問題在使用中注意完全能夠避免，從而盡可能延長色譜柱使用壽命，保證良好的分離分析結果。

使用中一定要注意經常沖洗色譜柱，使用一定時間后需要對色譜柱進行再生。

在上述用戶使用磷酸鹽緩沖溶液分離發酵液的情況，可以周期性使用10%的乙腈水在20～300℃之間的溫度下沖洗色譜柱，流量建議使用0.5ml/min，沖洗時，應該將色譜柱反接HPLC泵，并且不要接檢測池，以免污染系統。建議用戶不要反向使用色譜柱，這樣色譜柱的兩端都有可能污染，出現問題處理起來比較繁瑣。