色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環)、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70 kg/cm2 時,也可采用厚壁玻璃或石英管,管內壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應,不銹鋼柱內壁多經過拋光。也有人在不銹鋼柱內壁涂敷氟塑料以提高內壁的光潔度,其效果與拋光相同。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細管柱。色譜柱兩端的柱接頭內裝有篩板,是燒結不銹鋼或鈦合金,孔徑0.2~20μm(5~10&μm),取決于填料粒度,目的是防止填料漏出。
色譜柱是由柱管和固定相組成,按照拄管的粗細和固定相的填充方式分為(1)填充柱;(2)毛細管柱。
色譜柱的平衡
反向色譜柱在經過出廠測試后是保存在甲醇(或乙腈)/水中的。請一定確保您所使用的活動相和甲醇(或乙腈)/水互溶,由于色譜柱在運輸過程中可能會干掉,因此在用活動相分析樣品之前,應使用分10-20倍的體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱。
假如您所使用的活動相中含有緩沖鹽,應留意用含水量很高(約95%)的活動相過渡,樣品分析完后,沖洗柱子是亦然。過往傳統的方法使用純水沖洗,對于非極性柱,如C8或C18,由于純水不能浸潤填料表面而沖倒碳鏈,造成柱效下降。
另外,分析樣品時,由于純水在填料表面不能浸潤形成水膜,出現樣品不保存而分不開,重現性差,所以對于一般的C18或C8,有機溶劑不能低于5%。硅膠柱或極性色譜柱在經過出廠測試后是保存在正庚烷中的。假如該色譜柱需要使用含水或甲醇或乙腈的活動相,請在使用活動相之前用乙醇或異丙醇平衡。
色譜柱在平衡過程中,將流速緩慢地進步用活動相平衡色譜柱直到獲得穩定的基線(緩沖鹽或離子對試劑濃度假如較低,則需要較長的時間平衡)。
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