色譜柱的活化沖洗日常保養技巧

新的色譜柱柱活化沖洗技巧

　　方法/步驟

　　 新的色譜柱活化：采用100%甲醇1ml/min沖洗60min，再換成流動相進行平衡；如果流動相中含有緩沖鹽，在換成流動相前，請使用過渡流動相過渡后再換流動相平衡；

　　 日常維護

　　 1、建議檢測前樣品和流動相進行過濾；

　　 2、建議每天做完樣品后及時進行清洗；

　　 3、常規檢測

　　 測試完后，直接把色譜柱反向連接采用90%有機相沖洗45min，最后保存在純甲醇或純乙腈中；

　　 4、使用緩沖鹽條件：

　　 1）等度條件：使用緩沖鹽之前和之后都用過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min；

　　 2）梯度條件：使用緩沖鹽之前與初始流動相組成相同的過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min；

　　 注意：過渡流動相是指有機相和水相比例與分析流動相相同比例，只是不含有緩沖鹽；

　　 3）緩沖鹽沖洗干凈后，采用90%有機相反向沖洗60min，最后保存在純有機溶劑中；

　　 注意：如果使用緩沖液不能存留色譜柱中過夜；

色譜柱的保存

　　 1. 短時間內色譜柱的保存

　　 如果使用時間間隔不超過四天，則色譜柱無需特別的維護，只需根據最后一次測試使用的流動相或樣品的性質，在使用后用純甲醇、純水或甲醇與水的混合溶液進行淋洗，直至基線走平約半小時即可。

　　 2. 長時間色譜柱的保存

　　 如色譜柱長時間不用，則最好將其從HPLC儀中取下保存，取下前用合適的溶劑淋洗，洗去不適與保存色譜柱的洗脫液，如C18反相柱可以用純甲醇或乙腈作為保存的介質，然后用塑料塞頭將其塞緊，以免色譜柱內完全干燥。

注意事項

　　 色譜柱使用pH范圍在1.5～10.0，通常建議使用范圍pH為2.0～8.0比較合適，流動相超出pH范圍將會導 致硅膠基質流失和鍵合相斷裂使柱效下降，使用壽命變短，所以要嚴格控制pH范圍