色譜柱的維護

1. 色譜柱的平衡　　

反相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應先使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。 每天用足夠的時間以流動相來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得最大的"補償"，而且您的色譜柱的壽命也會變得更長！操作步驟：　　a. 平衡開始時將流速緩慢地提高，用流動相平衡色譜柱直到獲得穩定的基線(緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低，則需要較長的時間來平衡)　　b. 如果使用的流動相中含有緩沖鹽，應注意用純水"過渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡； 分析結束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護柱子。

2． 色譜柱的再生　　

長期使用的色譜柱，往往柱效會下降(柱子的理論塔板數減低)。可以對色譜柱進行再生，在有條件的實驗室應使用一個廉價的泵進行柱子的再生。　　　　

建議用來沖洗柱子的溶劑體積：　

　色譜柱尺寸   柱體積   所用溶劑的體積 　　

125-4mm    　 1.6mL    　 30mL　　

250-4 mm    　 3.2mL   　 60mL　　

250-10mm   　 20mL   　   400mL 　　

選擇再生方法：　　極性固定相(如Si，NH2* ，DIOL基色譜填料)的再生：　　正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**　　非極性固定相(如反相色譜填料RP－18，RP－8，CN等)的再生：　　 水→乙腈→氯仿(或異丙醇)→乙腈→水注意：　　a. 在對-NH2改性的色譜柱進行再生時，由于-NH2可能以銨根離子的形式存在，因此應該在水洗后用0.1mol/L的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。 　　b. 0.05mol/L稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱，如果簡單的用有機溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質，在水洗后加用0.05mol/L稀硫酸沖洗非常有效。

3. 色譜柱的維護 　　

a．使用預柱保護分析柱(硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度)　　

b．大多數反相色譜柱的pH穩定范圍是2－7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍　　

c．避免流動相組成及極性的劇烈變化　　

d．流動相使用前必須經脫氣和過濾處理　　

e．如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應在實驗完畢柱子沖洗干凈，并保存于甲醇或乙腈中　　

f．氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕。