苯酚法測定可溶性糖

 【原理】

植物體內的可溶性糖主要指能溶于水及乙醇的單糖和寡聚糖。苯酚法測定可溶性糖的原理是：糖在濃硫酸作用下，脫水生成的糠醛或羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10～100μg范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，基本不受蛋白質存在的影響，并且產生的顏色穩定160min以上。

【儀器 與用具】

分光光度計；電爐；鋁鍋；20ml刻度試管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；記號筆；吸水紙適量。

【試劑 】

1．90%苯酚溶液 稱取90g苯酚（AR），加蒸餾水10ml溶解，在室溫下可保存數月；

2．9%苯酚溶液 取3ml 90%苯酚溶液，加蒸餾水至30ml，現配現用；

3．濃硫酸（比重1.84）；

4．1%蔗糖標準液 將分析純蔗糖在80℃下烘至恒重，精確稱取1.000g。加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml濃硫酸，用蒸餾水定容至刻度；

5．100μg/ml蔗糖標準液 精確吸取1%蔗糖標準液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。

【方法】

1．標準曲線的制作

取20ml刻度試管 11支，從0～10分別編號，按表24-1加入溶液和水。

表24-1 各試管 加溶液和水的量

然后按順序向試管內加入1ml 9%苯酚溶液，搖勻，再從管液正面快速加入5ml濃硫酸，搖勻。比色液總體積為8ml，在恒溫下放置30min，顯色。然后以空白為參比，在485nm波長下比色測定，以糖含量為橫坐標，光密為縱坐標，繪制標準曲線，求出標準直線方程。

2．可溶性糖的提取

取新鮮植物葉片，擦凈表面污物，剪碎混勻，稱取0.10～0.30g，共3份，或干材料。分別放入3支刻度試管中，加入5～10ml蒸餾 水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液過濾入25ml容量瓶中，反復沖洗試管及殘渣，定容至刻度。

3．測定 吸取0.5ml樣品液于試管中（重復2次），加蒸餾 水1.5ml，同制作標準曲線的步驟，按順序分別加入苯酚，濃硫酸溶液，顯色并測定光密度。由標準線性方程求出糖的量，按下式計算測試樣品中糖含量。

可溶性糖含量(mg/g)= [C×(V/a)×n]/(W×103 )

式中 C－標準方程求得糖量(μg)；

a－吸取樣品液體積(ml)；

V－提取液量(ml)；

n －稀釋倍數；

W－組織重量（g）。