赤霉素對α淀粉酶的誘導形成

一、原理

淀粉性種子在萌動過程中，胚釋放出來的赤霉素能誘導糊粉層細胞中α-淀粉酶基因的表達，引起α-淀粉酶生物合成，并分泌到胚乳中催化淀粉水解為糖。通過碘試法比色測定淀粉在酶催化反應過程中的消耗量，可以定量分析α-淀粉酶的活力。

二、材料、儀器設備及試劑

（一）材料：大麥、小麥種子

（二）儀器設備：1. 分光光度計；2. 恒溫箱；3. 水浴鍋；4. 移液管；5. 燒杯；6. 試管；7. 青霉素小瓶；8. 鑷子；9. 刀片。

（三）試劑：1. 1%次氯酸鈉溶液；2. 0.1%淀粉溶液；3. 2×10–5mol/L、2×10–6mol/L、2×10–7mol/L、2×10–8mol/L 赤霉素溶液；4. 10–3mol/L 醋酸緩沖液；5. I2-KI溶液。

三、實驗步驟

1. 選取大小一致、健康的大麥種子50粒，用刀片將每粒種子橫切成兩半，使成無胚的半粒和有胚的半粒，分別置于新配制的1％次氯酸鈉溶液中，消毒15min，取出用無菌水沖洗數次，備用。

2. 取小瓶6只編好號碼，按表（詳教材）加入各種溶液和材料，于25℃下培養24小時（最好進行振蕩培養，如無條件，則必須經常搖動小瓶）。

3. 淀粉酶活性分析：從每個小瓶中吸取培養液0.1mL，分別置于事先盛有1.9mL淀粉磷酸鹽的溶液中，搖勻，在30℃溫箱或水浴中精確保溫10min，然后加I2-KI溶液2mL，蒸餾水5mL，充分搖勻，于波長580nm下測定吸光度，以蒸餾水為空白校正儀器零點。讀數，從標準曲線查得淀粉含量，以被分解的淀粉量作為淀粉酶的活性。

4. 以不同淀粉濃度（0～7μg/L）或淀粉量（0～100μg）及其吸光度繪制標準曲線。

四、結果計算

1. 第1瓶為淀粉的原始量（X）。

2. 第2～6瓶分別為反應后淀粉的剩余量（Y）。

3. 淀粉水解量=[（X—Y）/X]×100%。