酵母總RNA的制備

AE 緩沖液。   苯酚 10%SDS  酚  氯仿   無水乙醇 乙醇.  3mol L 乙酸鈉  無 RNase 的水

髙速離心機

一 材料與設備

1)AE 緩沖液：50 mmol/L 乙酸鈉 (PH5.3)，lOmmol/LEDTA。

2) 苯酚 (用 AE 緩沖液預先平衡）。

3)10%SDS

4) 酚：氯仿（1:1)。

5) 氯仿

6) 無水乙醇及 80% 乙醇.

7)3mol/L 乙酸鈉

8) 無 RNase 的水

9) 髙速離心機。


二 操作方法

1) 離心收集 l0 ml 酵母細胞培養物，用 40ulAE 緩沖液重懸。轉移到 1.5 ml 離心管中。

2) 加入 40ul10%SDS，混勻，再加入等體積 (440u1) 苯酚，渦旋混勻。

3)65°C 溫育 4mim, 干冰/乙醇浴迅速冷卻直至出現苯酚結晶，最大轉速離心 2 min,. 上清轉移到一新管中。

4）加入等體積酚：氯仿抽提，離心 5 min, 上清轉移到新管中，加入 0.1 倍體積的 3mol/L 乙酸鈉（pH5.3) 及倍體積無水乙醇，一 20℃ 沉淀 30 min。

5) 以 12000 g，于 4℃ 離心 lOmin, 冉以 lml80% 乙醇漂洗沉淀。干燥后，RNA 溶于 20ul 無 RNase 的水中, 于-70℃ 保存。

用 PH 8. 0 的 Tris-Cl 平衡的苯酚代替 AE 平衡酚也可取得良好的效果。