相關專題制備RNA探針在RNA的雜交檢測實驗中,應用標記的RNA 探針將獲得高靈敏度的雜交檢測結果,與DNA 探針相比,檢測靈敏度提高10-100倍。因為對于不同的雜交體類型來說,RNA-RNA雜交體的結合強度高于RNA-DNA和DNA-DNA雜交體。對于通過Northern blots檢測低濃度mRNA,以及原位雜交的核酸定位檢測等應用,RNA探針是一種理想選擇。RNA探針同樣也適用于Southern blots,文庫篩選,斑點雜交等應用。但是,在RNA探針制備過程和整個雜交實驗過程中,必須注意RNAse的防污染操作。制備RNA探針的常用方法是構建含探針標記模板的重組質粒,將克隆子的轉錄區下游進行限制性酶切線性化后,進行體外轉錄的探針合成反應。當然,采用的質粒上必須含有SP6,T3或T7 RNA聚合酶的啟動子序列。體外轉錄法合成的探針量很大,通常情況下,1μg的DNA模板進行反應,將得到20μg的標記RNA探針。另一......閱讀全文
一、雜交通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
隨著現代科學技術的不斷發展,特別是免疫學、生物化學、分子生物學的不斷發展,新的細菌診斷技術和方法已廣泛用于食品微生物的鑒別。傳統的細菌分離、培養及生化反應,已遠遠不能滿足對各種病原微生物的診斷以及流行病學的研究。近年來國內外學者不斷努力,已創建不少快速、簡便、特異、敏感、低耗且適用的細菌學診斷方法
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
隨著現代科學技術的不斷發展,特別是免疫學、生物化學、分子生物學的不斷發展,新的細菌診斷技術和方法已廣泛用于食品微生物的鑒別。傳統的細菌分離、培養及生化反應,已遠遠不能滿足對各種病原微生物的診斷以及流行病學的研究。近年來國內外學者不斷努力,已創建不少快速、簡便、特異、敏感、低耗且適用的細菌學診斷方法,
這是最早用于性病診斷的重組DNA技術。基本原理是具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下(適宜的溫度及離子強度等)可按堿基互補原則形成雙鏈,此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。待測核酸序列為性病病原體基因組或質粒DNA。探針以放射核素或非放射性核素標記,以利于雜交信號的檢測。 所謂
5.核酸探針雜交技術原理 根據完成雜交反應所處介質的不同,分成固相雜交反應和液相雜交反應。固相雜交反應是在固相支持物上完成的雜交反應,如常見的印跡法和菌落雜交法。事先破碎細胞使之釋放DNA/RNA然后把裂解獲得的DNA/RNA固定在硝基纖維素薄膜上,再加標記探針雜交,依顏色變化確定結果,該法是
環狀RNA(circular RNA,circRNA)是一種新興的內源性非編碼RNA(noncoding RNA,ncRNA),是繼microRNA (miRNA)以及long noncoding RNA (IncRNA)后非編碼RNA家族中極具研究潛力的新成員。越來越多的研究表明,環狀RNA具
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
RT-PCR實驗有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求:1.做RT前必需測RNA濃度,逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不會出太大問題。 3. PCR,按常規。但如需擴長片段,則對前兩步要求較高,需要有完整的cDNA存在,不是單
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
RNA酶保護法是近十年發展起來的一種全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是將標記的特異RNA探針(32P或生物素)與待測的RNA樣品液相雜交,標記的特異RNA探針按堿基互補的原則與目的基因特異性結合,形成雙鏈RNA;未結合的單鏈RNA經RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸,而待測目的基因與特
生物谷: RT-PCR實驗有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求:1.做RT前必需測RNA濃度,逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不會出太大問題。 3. PCR,按常規。但如需擴長片段,則對前兩步要求較高,需要有完整的cDNA存
基因芯片 技術的誕生為生物技術工作人員打開了一道科研的便利之門,曾被評為1998年年度十大科技進展之一。本文對基因芯片的實驗原理、技術基礎、分類、用途、操作主要環節等內容做詳細的介紹。 1.基本原理和技術基礎 基因芯片以DNA雜交 為基本原理,基于A和T、G和C的
熒光定量PCR實驗指南一、基本步驟:1、目的基因(DNA和mRNA)的查找和比對;2、引物、探針的設計;3、引物探針的合成;4、反應體系的配制;5、反應條件的設定;6、反應體系和條件的優化;7、熒光曲線和數據分析;8、標準品的制備;二、技術關鍵:1、 目的基因(DNA和mRNA)的查找和比
2018年10月20日,第二十屆全國分子光譜學學術會議暨2018年光譜年會開幕式暨40周年慶典在青島舉辦(相關報道:慶祝中國光譜40年 構建中國光譜新時代)。在第一天的大會報告之后(相關報道:古人學問無遺力 今有分子光譜百家鳴),組委會也安排了精彩分會報告。分析測試百科網作為合作媒體為您帶來拉曼
分析測試百科網訊 2017年5月7日,由國際純粹與應用化學聯合會(IUPAC)和中國化學會(CCS)主辦的2017 年國際分析科學大會(ICAS 2017)光譜分析分會場的報告繼續進行。分析測試百科網注意到,本屆光譜分析分會場的報告從數量上來說,主體為拉曼及相關技術。光譜分析分會場主持人,韓國漢
一、核酸探針標記 核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下(適宜的溫度及離子強度等)可按堿基互補原則形成雙鏈,此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。 核酸探針根據核酸的性質,可分為DNA和RNA探針;根據標記物不同,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大
實驗材料:小麥 試劑、試劑盒:β-巰基乙醇 &nb
一、核酸探針標記核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下(適宜的溫度及離子強度等)可按堿基互補原則形成雙鏈,此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。核酸探針根據核酸的性質,可分為DNA和RNA探針;根據標記物不同,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大類;根據是否
PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非這性聚丙烯酰胺凝膠上,短的單鏈DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同構象,一個堿基的改變將影響其構象而導致其在凝膠上的移動速度改變。其基本原理為單鏈DNA在中性條件下會形成二級結構,這種二級結構依賴于其堿基組成,即使一個堿基的不同,也會形成不同的二
測序技術的引入促使miRNA研究領域進入快速發展階段,然而qPCR仍是驗證測序數據的重要標準。本文將為您介紹使用qPCR進行miRNA分析的基本要點,希望能幫助新人快速入門。什么是miRNA?miRNA是一類小的非編碼RNA,能夠與RNA誘導沉默復合物(RISC)結合,通過作用于mRNA,進而介導轉
分析測試百科網訊 2017年8月24日,第三屆全國樣品制備學術報告會在昆明召開(相關報道:第三屆全國樣品制備會在春城開幕 樣品處理再現新技術)。在第一天的大會報告后(相關報道:第三屆全國樣品制備會大會報告一 新方法層出不窮),8月25日,大會還邀請到湖南大學化學化工學院院士譚蔚泓做大會特邀報告,
DNA重組技術(或基因工程)是20世紀生物學的偉大成就,并已滲透到生命科學包括醫學 各個領域,為腫瘤的實驗研究和臨床診斷及治療提供了嶄新的技術和有用的工具。本附錄扼要介紹在分子腫瘤學領域中常用的分子生物學基本技術及其在腫瘤研究中的應用,著重介紹它們的原理和應用。至于具體的技術方法和操作步驟可參閱《分
利用實時定量PCR和2-△△CT法分析基因相對表達量 METHODS 25, 402–408 (2001)Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2-△△CT M
表達譜基因芯片可應用于:(1)疾病診斷;(2)新藥開發;(3)環境保護。實驗方法原理按照預定位置固定在固相載體上很小面積內的千萬個核酸分子所組成的微點陣陣列。在一定條件下,載體上的核酸分子可以與來自樣品的序列互補的核酸片段雜交。如果把樣品中的核酸片段進行標記,在專用的芯片閱讀儀上就可以檢測到雜交信號
實驗方法原理 RNA 足跡和修飾干擾分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用來研究 RNA 與蛋
實驗方法原理 RNA 足跡和修飾干擾分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用來研究 RNA 與蛋白質相互作用的技術。RNA 測序及其結構分析的原理是 RNA 足跡試驗的理論基礎,它們都是建立在變性、半變性或
RNA 足跡和修飾干擾分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用來研究 RNA 與蛋白質相互作用的技術。RNA 測序及其結構分析的原理是 RNA 足跡試驗的理論基礎,它們都是建立在變性、半變性或自然條件下采用堿基特異性
3.9 芯片數據介紹對簡單的實質等同性實驗來說,一個比較轉基因系與對照之間基因表達的散點圖就已足夠了。文獻 [ 5 ] 中參與兩個實驗的樣品都標注在圖15. 2中。結果用 GeneSpring 軟件包顯示,繪制了每組比較小麥系之間每個基因成對的平均強度,并突出顯示少數感興趣的基因(統計上顯著差異表達