桿狀病毒系統蛋白質表達實驗
實驗方法原理 分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料 草地夜蛾（Sf9）細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒 PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材 含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱（濕度可選）15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7 水平轉子的 4℃ Beckman GPR 離心機 沸水浴／100℃加熱板 超聲儀實驗步驟 1. 如果目的蛋白為分泌性蛋白1.1 用 3 ml TNM-FH/10%FBS 培養基將 2.5 × 106 Sf9 細胞接種到 60 mm 組織培養皿中。27℃ 培養 1 h，使細胞牢固貼壁。每份需要檢測的病毒儲液制備一個培養皿，另一個培養皿作為無感染對照。1.2 用新鮮的 3 ml TNM-FH/10% FBS 培養基更換培養基，接種 0.1 ml 高滴度的病毒儲液到培養皿中，MOI 為 1～10。27℃ 培養 3 天。1.3 收獲培養皿中......閱讀全文
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗
基本方案 小規模表達 輔助方案1 蛋白質生產高峰期的確定 輔助方案2重組蛋白的代謝標記 基本方案2 重組蛋白大規模生產 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗
實驗方法原理 分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料 草地夜蛾（Sf9）細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒 PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材 含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱（濕度可選）15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——小規模表達
實驗方法原理分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料草地夜蛾（Sf9）細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱（濕度可選）15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7 水平轉
桿狀病毒表達系統的影響蛋白質表達的因素
在桿狀病毒系統中，要獲得蛋白質的有效表達，首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型，選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素：①該目的基因應不含內含子；②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列；③翻譯啟始密碼子AUG應處于適當的序列之間（如Kozak 序列）
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——重組蛋白的代謝標記
實驗方法原理由于重組蛋白表達的時候，宿主蛋白質的合成基本終止，因此體內代謝標記是檢測重組蛋白的敏感方法。所有的標記氨基酸都摻入到晚期病毒特異的蛋白質（包括目的蛋白）的合成。35S 標記的甲硫氨酸和半胱氨酸是常用的放射標記的氨基酸。為了獲得更好的結果，在標記之前細胞內的這兩種氨基酸應當被清除：將細胞在
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——重組蛋白大規模生產
實驗材料草地夜蛾細胞（Sf 9）高滴度重組病毒儀器、耗材無血清昆蟲細胞培養基1～10 L 旋轉培養瓶10.16 cm 管索張力器多旋轉瓶攬拌臺27℃ 培養箱供氣泵實驗步驟1. 在懸浮培養液中培養 Sf 9 細胞，并使之適應無血清培養液（基本方案 1）。2. 準備旋轉培養瓶，用于按比例擴增 Sf 9
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——蛋白質生產高峰期的確定
實驗方法原理因為重組蛋白的表達受多角體啟動子的調節，而多角體啟動子在病毒裂解循環的晚期才被激活，所以重組蛋白在感染后期才表達。重組蛋白通常在感染后 15～24 h之間即可檢測到，并可積累至感染后 40 h 左右，然后積累水平下降。由于不同的蛋白質在昆蟲細胞中有不同的穩定性，推薦用這個系統測定蛋白質積
桿狀病毒表達系統的應用
用桿狀病毒做載體，可高效表達外源基因，到目前為止已有幾百個包括動植物、病毒、細菌、真菌的基因在昆蟲細胞或幼蟲體內得到高效表達。這個表達體系的主要特點是可以獲得大量抗原性、免疫原性較好的，與天然蛋白功能相似的可溶性重組蛋白。這一特點優于細菌、酵母和哺乳動物細胞表達體系。重組桿狀病毒感染昆蟲細胞后，可以
桿狀病毒表達系統的應用
桿狀病毒是近年來被廣泛用于高效表達外源蛋白的載體系統，本文就桿狀病毒表達系統的生物學特性、轉染載體、重組病毒的篩選、基因表達調控及其發展應用等方面作一概述。
桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統
實驗步驟一、桿狀病毒表達載體最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成，其位于病毒基因組多角體座位，替代了非必需的野生型多角體基因。在實驗室中