透化細胞和退化細胞器蛋白質磷酸化—懸浮培養細胞透化
實驗材料懸浮培養物試劑、試劑盒胞外緩沖液ATP 儲存液實驗步驟1. 約在實驗開始前 1 小時，用 50 ml 滅菌試管以 1000 g 離心懸浮培養物 5 分鐘，用 40 ml 左右胞外緩沖液清洗細胞兩次。用預熱至 37℃ 的胞外緩沖液重懸細胞至 107 細胞/ml。于 37℃ 輕輕搖動 15~30 分鐘，讓細胞達到平衡。2. 1000 g 離心 5 分鐘，吸去緩沖液。往新鮮透化緩沖液中加鏈球菌溶血素 O 至每毫升 0.6 單位，該溶液已先加了冷 ATP 至100 μmol/L 進行預平衡。將這透化溶液加入細胞中，輕輕地混勻。3. 于 37℃ 溫育 1~5 分鐘。4. 加 [γ-32P] ATP 儲存液至終濃度 50~500 μCi/ml。5. 加入要研究的實驗試劑，如藥理試劑、多肽、Fab' 片段，放置一段時間讓它們發揮作用。6. 加入所需的受體激動劑。7. 制備免疫沉淀樣品或者 PAGE 樣品。(1) 加入......閱讀全文
透化細胞和退化細胞器蛋白質磷酸化—懸浮培養細胞透化
實驗材料懸浮培養物試劑、試劑盒胞外緩沖液ATP 儲存液實驗步驟1. 約在實驗開始前 1 小時，用 50 ml 滅菌試管以 1000 g 離心懸浮培養物 5 分鐘，用 40 ml 左右胞外緩沖液清洗細胞兩次。用預熱至 37℃ 的胞外緩沖液重懸細胞至 107?細胞/ml。于 37℃ 輕輕搖動 15~30
透化細胞和退化細胞器蛋白質磷酸化—單層培養細胞透化
實驗材料細胞培養物試劑、試劑盒HEPES儀器、耗材培養基實驗步驟1. 約在實驗開始前 1 小時，將細胞培養物換上含有預熱（37℃）的 20 mmol/L HEPES（pH 7.2）的培養基，繼續培養。讓細胞在實驗前與新培養基達成平衡。2. 將所需數量的有細胞的培養基放在一個絲網托盤上，放入 37℃
透化細胞和退化細胞器中蛋白質的磷酸化實驗
試劑的制備單層培養細胞的透化懸浮培養細胞的透化用分離的亞細胞組分分析蛋白質的磷酸化用分離的亞細胞組分進行激酶分析試劑、試劑盒胞外緩沖液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?胞內緩沖液 ? ? ? ? ? ?
透化細胞和退化細胞器中蛋白質的磷酸化實驗
試劑的制備 單層培養細胞的透化 懸浮培養細胞的透化 用分離的亞細胞組分分析蛋白質的磷酸化 用分離的亞細胞組分進行激酶分析 ? ? ? ? ? ?
透化細胞和退化細胞器中蛋白質的磷酸化實驗—試劑制備
試劑、試劑盒胞外緩沖液胞內緩沖液透化緩沖液標準裂解緩沖液裂解緩沖液SDS-PAGE 加樣緩沖液雙向-PAGE 裂解緩沖液實驗步驟這些試劑在后面許多地方要用到，應在進行下述實驗前配好。1. 胞外緩沖液（pH 7.2，37℃）110 mmol/L NaCl10 mmol/L KCI1 mmol/L Mg
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗
1.從標記細胞提取ATP1)? 備下列材料：本實驗用到的所有溶液必須用Mlli - Q純化的水或它的等價物配制。冰冷的4%高氣酺（v/v)三-n-辛胺1,1,2-三氮三m乙烷32p標記的細胞帶螺帽的聚丙烯離心管測量范圍PH4~8的PH試紙小心：高氣酸■ 三-n -辛胺； U? 1，2-三氯三氟乙燒；
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗
從標記的細胞或者細胞裂解物中提取ATP 用發光分析定量測定ATP 用高效液相層析定量測定ATP 測定[γ-32P]ATP的比活性 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗
從標記的細胞或者細胞裂解物中提取ATP用發光分析定量測定ATP用高效液相層析定量測定ATP測定[γ-32P]ATP的比活性實驗步驟1.從標記細胞提取ATP1)? 備下列材料：本實驗用到的所有溶液必須用Mlli - Q純化的水或它的等價物配制。冰冷的4%高氣酺（v/v)三-n-辛胺1,1,2-三氮三m
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗1
從標記的細胞或者細胞裂解物中提取ATP實驗步驟1.從標記細胞提取ATP1)? 備下列材料：本實驗用到的所有溶液必須用Mlli - Q純化的水或它的等價物配制。冰冷的4%高氣酺（v/v)三-n-辛胺1,1,2-三氮三m乙烷32p標記的細胞帶螺帽的聚丙烯離心管測量范圍PH4~8的PH試紙小心：高氣酸■
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗2
用發光分析定量測定ATP實驗步驟Sigma公司提供了 -種測定MP濃度的非常簡單，靈敏&又方便的方法。其原理是用熒光素酶從熒光素和ATP中產生光。在熒光素/榮光素酶濃度恒定的情況下，可以繪制一條不同ATP濃度時產光量變化的標準曲線，因此可以很容易地對來自細胞裂解物的未知樣品進行定量。然而，如果要測定
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗3
用高效液相層析定量測定ATP實驗步驟1)準備下列材料：Whatman Partisphere SAX高效液相層析柱和保護柱線性梯度洗脫液設定在254nm的紫外線監測儀裝配好的0.2;mi Whatman濾膜和濾器0.2^?過濾的Milli-Q水0.2/im S@_0,:5m〇l/LNH4H2ro4
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗4
測定[γ-32P]ATP的比活性實驗步驟準備下列材料：含有未知濃度mp] ATP的細胞裂解物樣品10mg/ml激酶底物肽漸夜（Calbiochem)0.5mraol/L cAMP 溶液 I、Calbiochem)cA-PrK (Calbiochem)cA-PrK分析緩沖液lmol/L DTT儲存液（
轉運反應成分的制備實驗——細胞通透化
實驗材料細胞試劑、試劑盒毛地黃皂苷轉運緩沖液實驗步驟1. 制備用于同透化的細胞(1) 對于在蓋玻片上生長的細胞① 將在標準條件下培養的細胞或從組織采集的原代細胞鋪在置于 6 孔培養板中的 18x18 mmol/L 的蓋玻片上，生長過夜。② 實驗前 2~4 小時，換新培養液，重新放回培養箱中。③ 吸出
細胞組分和細胞器——細胞器分離
Labeling Microtubules?(Molecular Dynamics Inc.??)Microtubules are involved in many aspects of cell motion including propulsion, mitosis, growth, and o
植物細胞懸浮培養
一、目的要求 了解植物 ?細胞懸浮培養的基本原理，通過實驗掌握植物細胞懸浮培養的方法和技術。并通過實驗練習和鞏固無菌操作技術。 二、基本原理 利用固體瓊脂 ?培養基對植物的離體組織進行培養的方法在植物遺傳實驗中已經得到廣泛的應用。但這種方法在某些方面還存在一些缺點，比如在培養過程中，植物的愈傷組織
植物細胞懸浮培養
一、目的要求了解植物細胞懸浮培養的基本原理，通過實驗掌握植物細胞懸浮培養的方法和技術。并通過實驗練習和鞏固無菌操作技術。二、基本原理利用固體瓊脂培養基對植物的離體組織進行培養的方法在植物遺傳實驗中已經得到廣泛的應用。但這種方法在某些方面還存在一些缺點，比如在培養過程中，植物的愈傷組織在生長過程中的營
用分離的亞細胞組分分析蛋白質的磷酸化
實驗材料樣品試劑、試劑盒胞內緩沖液透化緩沖液儀器、耗材離心管實驗步驟1. 分離細胞器。2. 于 4℃ 用胞內緩沖液清洗細胞器樣品 3 次，將相當于 1 mg 蛋白質的樣品轉至帶螺帽的小離心管，放入冰盒。3. 離心，吸去上清，加 200 μl 預熱至 37℃ 的透化緩沖液，輕輕混勻，放入 37℃ 水浴
細胞培養實驗——懸浮細胞培養
實驗材料凍存 HeLa S3 細胞試劑、試劑盒70% 乙醇完全 MEM-10胰酶／EDTA儀器、耗材旋轉瓶完全培養基-525 cm2 組織培養瓶C02 培養箱Sorvall H-6000A 轉子100 ml 或 200 ml 通氣旋轉瓶和帶濾膜的瓶蓋實驗步驟1. 將含有凍存 HeLa S3 細胞的安
懸浮細胞培養經驗
6 細胞培養基的選擇 6.1根據細胞特點、蛋白表達及病毒特點和培養方式選擇細胞培養基 商售工業用細胞培養基主要是干粉培養基，常用的培養基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等系列，根據細胞的特性及工業化的生產需求，開發或生產的同一系列的細胞培養基在成份上也有
懸浮細胞的培養經驗
取點在倒置顯微鏡下看細胞密度，還有培養基顏色。密度較大了就取出離心，我做的一般是800r/min離心4分鐘就可以了，時間太長細胞缺氧缺養分，會影響狀態。然后用培養基重懸，一定要吹勻，至于留的密度要看你是不是每天都要傳代了，還有不同的細胞要求密度也不同。等你多傳兩次根據經驗就好了。
單細胞培養培養方法介紹細胞懸浮培養法
用液體培養基對保持良好的分散狀態的單個細胞或小的細胞聚集體于搖床上進行培養的方法，稱為細胞懸浮培養法(cell suspension culture)。依據培養目的不同，可分為淺層培養和深層培養。淺層培養是指使培養材料的一部分裸露于液體培養基表面，采用靜止培養的方式，適用于各種器官和組織的培養。深層
懸浮培養法細胞的篩選馴化和保藏
實現懸浮培養首先需要選擇合適的宿主細胞，細胞系的特征直接影響放大的可能性以及放大技術的選擇。同一種細胞在懸浮培養和貼罐培養時對同一病毒的敏感性不同；同一株細胞不同的克隆對營養條件有不同的需求，對病毒敏感性亦可能不同。 常根據毒株特性，綜合考慮所用毒株能在何種細胞上增殖、表達，懸浮或貼壁細胞屬性足否適
細胞培育懸浮培養方法介紹
懸浮培養指的是一種在受到不斷攪動或搖動的液體培養基里，培養單細胞及小細胞團的組織培養系統，是非貼壁依賴性細胞的一種培養方式。某些貼壁依賴性細胞經過適應和選擇也可用此方法培養。增加懸浮培養規模相對比較簡單，只要增加體積就可以了。深度超過5mm，需要攪動培養基，超過10cm，還需要深層通入CO2和空氣，
懸浮細胞培養系統概述
懸浮細胞培養系統是一種用于水產學領域的分析儀器，于2018年11月30日啟用。 1技術指標 1、主體材質采用高硼硅酸鹽玻璃材質。2、頂蓋開口包含16個開口以上。3、可實現數據的傳輸，導出，打印，數據儲存，曲線比較，跟蹤。4、溶氧控制采用自適應PID控制模式。 2、主要功能 主要用于水產動
植物細胞懸浮培養操作步驟
操作步驟1．配制培養基(1) 用于誘導水稻愈傷組織的培養基(N6)。(2) 用于水稻懸浮培養的液體培養基。按照培養基配方取各種藥品，zui后用蒸餾水定容到所需體積。所配制的培養基經高壓蒸汽滅菌后備用，固體瓊脂培養基分裝在250mL 的錐形瓶內，每瓶約分裝30mL。2．水稻種子的消毒（1）將種子置于無
懸浮細胞系培養指南
在5月30日尚恩生物直播課程中，劉老師通過專業的講解，讓大家詳細了解了懸浮細胞系通用培養指南相關內容。直播課件請點擊尚恩公眾號—回復關鍵詞“直播課件”領取。直播過程中不僅收獲了大家的滿滿熱情～也收到大家不少的提問，對于大家的疑問小尚這邊都有認真整理，讓劉老師做了詳細解答，如果大家還有其他疑問的也可以
植物細胞的懸浮培養技術
將游離的植物細胞或小的細胞團置于液體培養其中進行培養和生長的一種技術，稱為植物細胞懸浮培養。它是從愈傷組織的液體培養基礎上發展起來的一種新的培養技術。從50年代起，米爾（Muir）等便對單 細胞培養 進行了探討和研究，得到了萬壽菊，煙草單細胞和細胞團的懸浮液。1958年斯圖
細胞組分和細胞器——細胞膜
Isoelectric Focussing of Membrane Protein by Slab Gel Method?(Hancock Lab)??Isolation of Outer Membrane Protein from P.Aeruginosa with Octyl-Poe?(Hanc
細胞組分和細胞器——細胞骨架
Fixation and Immunofluorescence of the Cytoskeleton?(Mitchison Lab)??Recycling Tubulin?(Mitchison Lab)??Labeling Tubulin and Quantifying Labeling Stoi
特殊細胞培養實驗_懸浮培養法
實驗方法原理懸浮培養是使貼附性細胞呈懸浮狀態生長。如所培養的細胞本身屬懸浮生長類型，則無須做任何處理，在傳代時先做離心處理去除舊培養液，添加新培養液即可。但在培養貼附型細胞時，因其有貼附性，必須進行干擾使細胞不能貼附，才能形成懸浮狀態生長的細胞。實驗材料細胞儀器、耗材培養瓶攪拌器實驗步驟1. ?用大