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上世紀60、70年代是色譜/層析技術快速發展的時代，首先是層析介質有了飛速的發展，各種人工合成的介質出現，如硅膠、聚苯乙烯二乙烯基樹脂、瓊脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等樹脂或凝膠的出現，極大地拓展了層析技術的應用領域和范圍，基于不同介質的層析方法也如雨后春筍般不斷涌現。如Bio-Rad公司于上世紀50年初推出的分析級離子交換樹脂AG系列，廣泛用于各種分子物質的分離純化，包括無機離子、有機酸、核酸以及糖類等。值得一提的是，上世紀4、50年代正是DNA、RNA研究如火如 荼的時期，而Bio-Rad推出的AG系列樹脂在核酸純化方面具有極其出色表現，受到眾多研究人員的歡迎與好評。 Bio-Rad AG系列樹脂 此外，因為馬丁（Martin）和辛格（Synge）的鉆研與暢想，他們的預言分別在1952年及20世紀60年代被人們所應證。而馬丁（Martin）和辛格（Synge）兩人也于1952年被授予諾貝爾化學獎。 ......閱讀全文
羥基磷灰石 (hydroxyapatite,HA) 是一種以磷酸鈣為原料的羥基化物, 其大量地用于蛋白質的層析分離主要是在 1991?2009 年，并且最初只是用于重組蛋白的純化。HA 的使用方法參照 Tiselius 等（1956) 的論述和 Gorbunoff(1985) 的綜述。實驗步驟一、機
實驗步驟 一、機制 從 1971 年（Bernardi，1971;Gorbunoff，1990) 就已經幵始定期發表關于 HA 對蛋白質吸附與解吸附的綜述。最近的一篇文獻 (Kandorietal.，2004) 引用了較早闡述的
5. 正相色譜與反相色譜 正相色譜是指固定相的極性高于流動相的極性，因此，在這種層析過程中非極性分子或極性小的分子比極性大的分子移動的速度快，先從柱中流出來。 反相色譜是指固定相的極性低于流動相的極性，在這種層析過程中，極性大的分子比極性小的分子移動的速度快而先從柱中流出。&
隨著生物制藥的快速發展及監管部門對生物藥的要求越來越高，使得生物制藥的分離純化難度越來越大。層析技術由于具有極高的分離純化效率且應用條件溫和，在分離純化過程中容易保持目標分子的生物活性，因此層析技術已成為生物制藥最重要的純化工具。層析介質制備技術難度大、門檻高，目前主要由美國GE、日本Tosoh
分辨率： 由上式可見，Rs值越大，兩種組分分離的越好。當Rs = 1時，兩組分具有教好的分離，互相沾染約2%，即每種組分的純度約為98%。當Rs=1.5時，兩組分基本完全分開，每種組分的純度可達到99.8%。如果兩種組分的濃度相差較大時，尤其要求較高的分辨率。 為了提高分辨率Rs 的值，可采用以下方
3)采用適當的流速，也可使理論塔板的高度降低，增大理論塔板數。太高或太低的流速都是不可取的。對于一個層析柱，它有一個最佳的流速。特別是對于氣相色譜，流速影響相當大。②改變容量因子D(固定相與流動相中溶質量的分布比)。一般是加大D，但D 的數值通常不超過10，再大對提高Rs 不明顯，反而使洗脫的時
沉淀法沉淀法也稱溶解度法。其純化生命大分子物質的基本原理是根據各種物質的結構差異性來改變溶液的某些性質，進而導致有效成分的溶解度發生變化。1、鹽析法鹽析法的根據是蛋白質在稀鹽溶液中，溶解度會隨鹽濃度的增高而上升，但當鹽濃度增高到一定數值時，使水活度降低，進而導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐
蛋白質純化的層析技術中，凝膠過濾比較獨特,它是基于蛋白質分子質量的相對大小而分離。與傳統的過濾相反，通過凝膠過濾柱后,并沒有任何蛋白質留存于其中。凝膠過濾優缺點明顯;優點在于，脆性蛋白質與層析固定相結合并不會破壞其功能;缺點在于,和凝膠不結合則限制層析的分辨率。作者： 伯吉斯等,主譯：陳薇，本實驗來
離子交換劑的總交換容量通常以每毫克或每毫升交換劑含有可解離基團的毫克當量數（meq / mg或meq / ml）來表示。通常可以由滴定法測定。陽離子交換劑首先用HCl處理，使其平衡離子為H?。再用水洗至中性，對于強酸型離子交換劑，用NaCl充分置換出H?，再用標準濃度的NaOH滴定生成的HCl，
一、層析柜 層析柜是專為生化層析實驗而研制的特殊用途低溫柜，也可用于其他需要低溫環境的實驗，或用于物品冷藏。經過科學設計，冷柜總高度一般不超過2米，便于進出房間和電梯。二、層析柜用途主要用在生命科學研究的高校學科和科研院所，主要用來進行各種酶類，肽類，大分子，核酸等物質的生化層析分析試驗
凝膠過濾層析是一項重要的蛋白質純化技術，又稱為大小排阻、凝膠排阻、分子篩或凝膠過濾層析這種方法利用分級分離，而不需要蛋白質的化學結合，這就明顯降低了因不可逆結合所致的蛋白質損失和失活。另外，可利用此法更換蛋白質的緩沖液或降低緩沖液的離子強度。在蛋白質純化操作中何時使用凝膠過濾，還不能一概而論，有時純
操作采用分子篩層析獲得的洗脫圖譜如圖 23.1 A 所 75。零 洗 脫 體 積 (zero elution volu m e ) 是指上樣于層析固定相的樣品體積。無法進入介質的分子的洗脫體積定義為無效體 積 V 。，它表示顆粒外部的體積。可以進人介質的分子的體積定義為總體積％, 它表示
實驗步驟 操作 采用分子篩層析獲得的洗脫圖譜如圖 23.1 A 所 75。零 洗 脫 體 積 (zero elution volu m e ) 是指上樣于層析固定相的樣品體積。無法進入介質的分子的洗脫體積定義為無效體 積 V
1、側流免疫層析檢測技術 側流免疫層析檢測技術(LFIA) 也稱橫向流動免疫檢測技術，是出現于20世紀60年代初期的一種獨特的免疫分析方式，以條狀纖維層析材料為固相，借助毛細管的吸附作用使樣品在層析材料上移動，其中樣品
1、側流免疫層析檢測技術 側流免疫層析檢測技術(LFIA) 也稱橫向流動免疫檢測技術，是出現于20世紀60年代初期的一種獨特的免疫分析方式，以條狀纖維層析材料為固相，借助毛細管的吸附作用使樣品在層析材料上移動，其中樣品中的待測物與層析材料上一定區域的抗
在分離分析特別是蛋白質分離分析中，層析是相當重要、且相當常見的一種技術，其原理較為復雜，對人員的要求相對較高，這里只能做一個相對簡單的介紹。 一、吸附層析 1、吸附柱層析 吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機溶劑或緩沖液為流動相構成柱的一種層析方法。 2、薄層層析 薄層
在分離分析特別是蛋白質分離分析中，層析是相當重要、且相當常見的一種技術，其原理較為復雜，對人員的要求相對較高，這里只能做一個相對簡單的介紹。 一、 吸附層析 1、 吸附柱層析 吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機溶劑或緩沖液為流動相構成柱的一種層析方法。 2、 薄層層析
在分離分析特別是蛋白質分離分析中，層析是相當重要、且相當常見的一種技術，其原理較為復雜，對人員的要求相對較高，這里只能做一個相對簡單的介紹。 一、 吸附層析 1、 吸附柱層析 吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機溶劑或緩沖液為流動相構
凝膠過濾層析法 實驗方法原理 凝膠過濾層析是根據蛋白質分子大小不同而達到分離效果的，凝膠過濾填料中
實驗方法原理 凝膠過濾層析是根據蛋白質分子大小不同而達到分離效果的，凝膠過濾填料中含有大量微孔，只允許緩沖液及小分子量蛋白質通過，而大分子蛋白質及一些蛋白復合物則被阻擋在外。因此，高分子量的蛋白質在填料顆粒間隙中流動，比低分于量蛋白更早地被洗脫下來。最大的蛋白質分子最早流出柱子，因為它們在到達柱底前
五、生產規模層析柱的填裝對于填充良好的大規模層析柱, 從其頂端到底端，其中的填料是連續均勻分布的，并表現為最佳的層析效能。CHT 的填裝方法有數種，如何選擇取決于所用的層析柱類型及設備。在填裝層析柱前, 應參閱層析柱、介質轉移設備和介質填裝設備的相關指導手冊。開放性層析柱的最大填充床高度不能高于介質
一、原理1.葡聚糖凝膠Sephadex G-200凝膠柱層析 利用大分子不能進入凝膠顆粒內部 最先流出柱外，而小分子物質進入凝膠顆粒內部，流速慢而最后流出柱外，凝膠層析法能將不同分子大小的物質分離開。（G-200能分離800-80000D分子量的蛋白質）2.利用離子交換法，選取DEAE-陰離子纖維素
一、原理1.葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析利用大分子不能進入凝膠顆粒內部最先流出柱外，而小分子物質進入凝膠顆粒內部，流速慢而最后流出柱外，凝膠層析法能將不同分子大小的物質分離開。（G-200能分離800-80000D分子量的蛋白質）2.利用離子交換法，選取DEAE-陰離子纖維素DE5
生物分子下游純化的對象一般包括蛋白、酶、重組蛋白、單抗、抗體及抗原、肽類、病毒、核酸等。純化前首先需要測定生物分子的各物理和化學特性，然后通過實驗選擇出最有效的純化流程。 1.測定------分子量、PI &nbs
一、紙層析紙層析創立于1944年，和薄層層析一樣，紙層析不僅可以用來分離、檢識、測定中藥中復雜的有效成分，而且可以于少量成分的提取精制。它是一種以濾紙上吸附的水為固定相，濾紙作為支持劑的分配層析法。紙層析應用較廣，其主要用途是為分配薄層及分配柱層析摸索條件。雖然紙層析比較費時，易產生拖尾、不耐腐蝕性
離子交換層析在純化蛋白質的層析手段中使用最為廣泛。它對蛋白質的分辨率高，操作簡易，重復性好，成本低。按照離子交換原理，蛋白質可從大量緩沖性溶液中被分離，所以此方法尤適于蛋白質粗提物的初始純化。在分離蛋白質時，速度往往是很重要的。 如蛋白酶的初始分離和不穩定蛋白質的純化。離子交換層析提供了很多加速分離
三． 薄層板上原位化學反應 本法使直接在薄層板上進行的化學反應，又稱原位反應薄層。先將樣品滴加在薄層板上，然后滴上適當的溶劑展開反應物。有時先在試官內進行反應，而后在薄層板上進行層析檢識。根據原化合物的Rf值再聯系產物的層析行為，Rf值，可供鑒別一個化合物或者提供鑒定一個化合
實驗概要本實驗利用葡聚糖凝膠柱層析對PPO粗酶液進行了純化。實驗原理1. 葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析利用大分子不能進入凝膠顆粒內部最先流出柱外，而小分子物質進入凝膠顆粒內部，流速慢而最后流出柱外，凝膠層析法能將不同分子大小的物質分離開。(G-200能分離800-80000D分子量
選擇合適的緩沖液可以有助于保持目標蛋白質的完整性，同時利于其吸附于 HA。這一步驟在平衡時最好已經完成，平衡時應該沒有任何的磷酸鹽，然后加載緩沖液。但是在經過幾個循環后，填充柱便失效了。研究表明，低至 2rmnol/L 的磷酸鹽可以延長層析柱的壽命，同時又兼顧目標蛋白質的純度。磷酸鹽與 ME
詳細闡述利用親和層析分離蛋白質的過程，進行蛋白質分析時，需將此規模縮小至微量離心管中進行免疫沉淀過程，對于單一的蛋白質或由相同亞基組成的蛋白質，經單向凝膠電泳后檢測到單一的 蛋 白 質 條 帶對熒光染色法進行了闡述，它主要用于磷蛋白和糖蛋白的檢測。為了確定蛋白質是否是特異性抗原，可采用相對應的抗體進