PCR實驗對照原則
每一次試驗都需要設置嚴格的對照。陽性模板作為陽性對照；陰性模板或不加模板作為陰性對照。......閱讀全文
PCR實驗對照原則
每一次試驗都需要設置嚴格的對照。陽性模板作為陽性對照；陰性模板或不加模板作為陰性對照。
熒光定量PCR實驗中的陽性對照和陰性對照
陽性對照和陰性對照是指在相同的處理條件下，比如一份已知的感染樣品和一份已知的未感染樣品，都進行了提取和擴增最終獲得了陽性結果和陰性結果。陰陽性對照強調處理過程與樣品一致，并且有明確的預期結果。
怎樣設定原位PCR對照實驗
設立陽性對照，即用已知陽性細胞或組織切片做陽性標志，實驗結果應呈陽性，表明實驗方法準確可靠。同時要設立陰性對照，即用已知陰性細胞或組織切片作陰性對照，實驗結果應呈陰性，表示實驗方法無假陽性結果；也可以用實驗細胞或組織切片，不加標記的dUTP（直接法），PCR結果顯示陰性，或不加引物或不加TaqD
熒光定量PCR實驗中的擴增對照
通常說的陽性對照和陰性對照指的是擴增試劑盒中附帶的不需要提取的陽性對照和陰性對照，更準確的定義應該是擴增陽性對照和擴增陰性對照。擴增陽性對照含有陽性擴增模板，擴增陰性對照應含有陰性擴增模板（基質核酸）。擴增對照只能監控每次擴增過程中的擴增系統是否正常，不能監控采樣、提取和每份樣品的操作過程。如果是檢
PCR實驗室建設原則
1-隨機原理即利用“隨機數表”實現隨機化，就是利用計算機產生的：“偽隨機數”來實現的。盡量利用統計學知識設計自己的實驗，減少外界因素和人為因素的干擾。2-比較原則空白對照組的建立—只有通過對照組的建立才能清楚的看到實驗室因素在其中的作用。3-重復原則在許多獨立的重復實驗需要在相同的實驗條件下進行，一
熒光定量PCR實驗中的核酸提取對照
可以使用內參基因，假病毒混合基質，滅活病毒混合基質來監控提取到擴增的流程。
熒光定量PCR實驗中的反轉錄對照
可以使用提取好的RNA內參基因，RNA假病毒混合基質，滅活RNA病毒混合基質來監控反轉錄到擴增的流程。無反轉錄對照（no-RT control）含有除反轉錄酶以外的所有成分。
熒光定量PCR實驗中的空白對照
無模板空白對照NTC是指不含有模板（陽性模板或者陰性模板）的對照。目前的試劑盒的NC一般都是水或陰性緩沖液，所以NC等同于NTC。其實兩者有不同的作用。儀器空白對照NTC是含有引物探針和反應液主要監控引物探針，反應體系有沒有被污染。這里的儀器空白對照我通常使用的是空反應管來監控儀器有無非特異性的熒光
標準PCR實驗室設計原則
（一）標準PCR實驗室的工作區（1）試劑準備區設置有實驗桌、柜子、冰箱、可移動紫外燈、與標本制備區連通的傳遞窗和椅子，在實驗桌上可放置實驗儀器設備（包括離心機、震蕩器、移液器、離心管、廢液缸和垃圾筒等）。（2）標本制備區設置有實驗桌、冰箱、生物安全柜、可移動紫外燈、水槽和椅子，在實驗桌上和生物安全柜
關于克隆PCR產物的對照實驗相關介紹
A）涂布未轉化的感受態細胞。 如有菌落，表明氨芐失效，或污染上帶有氨芐抗型的質粒，或產生氨芐抗型的菌落。 B）轉化完整質粒，計算菌落生長數，測定轉化效率。 例如，將1ug/ul質粒1:100稀釋，1ul用于100ul感受態細胞轉化。用SOC稀釋到1000ul后，用100ul鋪板。培養過夜，
PCR引物設計原則
實驗步驟首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物不能在模板的非目的位點引發DNA 聚合反應(即錯配) ，再次引物與引物之間避免形成穩定的二聚體或發夾結構。引物設計應注意如下要點：1．引物的長度一般為15-30 bp，常用的是18-27 bp。2．引物序列在模板內應當沒有相似性較高，尤其是3’端相似性
PCR引物設計原則
實驗概要PCR是目前研究DNA、RNA等核酸的非常有效和最主要的方法之一。本Protocol對于PCR引物設計中的一些基本原則給予闡述，希望能對廣大研究人員的研究工作帶來方便。實驗步驟首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物不能在模板的非目的位點引發DNA 聚合反應(即錯配) ，再次引物與引物之間避
PCR引物設計原則
? PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構，就要避開它。如這一段不能形成二級結構，那就可
PCR引物設計原則
PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構，就要避開它。如這一段不能形成二級結構，那就可以在
PCR引物設計原則
PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。? 要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構，就要避開它。如這一段不能形成二級結構，那
PCR陰性對照始終有條帶
個原因：就是你的PCR體系中任一一個試劑被模板污染了，把把PCR的試劑全部換新
pcr陽性對照不出條帶的原因
陽性對照不出的原因很多，主要考慮試劑系統。包括Taq酶活性、引物設計、Mg離子含量、dNTP濃度。還可考慮模板DNA的提取方法，甚至你的引物是否正確稀釋。
PCR陰性對照總是跑出陽性條帶
實驗室體系或者環境有污染，把所有的物料都換了，同時換一個房間重做，試試吧
熒光定量pcr陰性對照的定義
NC的作用在于消除試劑污染的因素～如果NC（無模板）也有擴增曲線那么說明試劑污染較為嚴重～所謂的陰性就是一定實驗后是沒有結果的～
標準物質中藥品對照品的使用原則
對照品（標準品）是執行藥品質量標準的實物對照，是量值傳遞的重要載體，是用來檢查藥品質量的一種特殊的專用量具、測量藥品質量的基準、確定藥品真偽優劣的物質對照，也是作為校正測試儀器與方法的物質標準。對國家藥品標準而言，它是國家頒發的一種藥品計量、定性的標準物質。藥品標準物質必須具備材料均勻、性能穩定、量
PCR儀的分類原則
簡單的說，PCR儀就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。目前常用的技術，可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準，可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實時
PCR儀的分類原則
簡單的說，PCR儀就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。目前常用的技術，可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準，可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實時
PCR引物設計原則
1.引物最好在模板cDNA的保守區內設計。DNA序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（比如DNAman）比對（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區。2.引物長度一般在15~30堿基之間。引物長度（primer leng
PCR儀引物設計原則
引物長度要滿足特異性需要,一般可在18~25個堿基之間；擴增長片段時最好在24~30個堿基之間； · 當引入克隆位點時,引物末端應額外增加3個以上堿基； · (G+C)%含量應盡量控制在40~60%,兩條引物的(G+C)%含量應盡量接近； · 引物中GC堿基分布均勻； · 盡量避免相同堿
PCR引物設計原則
PCR-引物設計原則 ? 1.引物最好在模板cDNA的保守區內設計。 DNA序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（比如DNAman）比對（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區。 2.引物長度一般在15~30堿基之間。
PCR引物設計原則簡介
實驗步驟首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物不能在模板的非目的位點引發DNA 聚合反應(即錯配) ，再次引物與引物之間避免形成穩定的二聚體或發夾結構。引物設計應注意如下要點：1．引物的長度一般為15-30 bp，常用的是18-27 bp。2．引物序列在模板內應當沒有相似性較高，尤其是3’端相似性
實驗室儀器PCR擴增儀的維護保養原則
1)PCR基因擴增儀需要定期檢測,一般半年至少一次。2)PCR反應的要求溫度與實際分布的反應溫度是不一致的,當檢測發現各孔平均溫度差偏離設置溫度大于1～2℃時,可以運用溫度修正法糾正PCR實際反應溫度差。3)PCR反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控制,要求越短越好,當PCR儀的降溫過程超過60s,
PCR反應如果沒有回收到目的片段需要作什么對照實驗？
A)涂布未轉化的感受態細胞。如有菌落,表明氨芐失效,或污染上帶有氨芐抗型的質粒,或產生氨芐抗型的菌落。B)轉化完整質粒,計算菌落生長數,測定轉化效率。例如,將1ug/ul質粒1:100稀釋,1ul用于100ul感受態細胞轉化。用SOC稀釋到1000ul后,用100ul鋪板。培養過夜,產生1000個菌
實驗陰性對照的概念
中文名稱陰性對照英文名稱negative control定 義在實驗研究中，人為設置的具有陰性結果的對照實驗。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），總論（二級學科）
PCR技術要素引物設計原則
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。④避免引物內