關于活體電穿孔法的基本介紹
活體電穿孔法(in vivo electroporation) 是將外源基因通過電場作用，導入動物目標組織或器官。由于這種方法能有效導入外源基因，可在多種組織器官上應用,并且效率較高。活體電穿孔法的原理很簡單,在直流電場作用的瞬間,細胞膜表面產生疏水或親水的微小通道105～115μm ,這種通道能維持幾毫秒到幾秒,然后自行恢復。在此期間生物大分子如DNA 可通過這種微小的通道進入細胞。......閱讀全文
關于活體電穿孔法的基本介紹
活體電穿孔法(in vivo electroporation) 是將外源基因通過電場作用，導入動物目標組織或器官。由于這種方法能有效導入外源基因，可在多種組織器官上應用,并且效率較高。活體電穿孔法的原理很簡單,在直流電場作用的瞬間,細胞膜表面產生疏水或親水的微小通道105～115μm ,這種通道
活體電穿孔法介紹
1、什么是活體電穿孔 活體電穿孔法（in vivo electroporation）是將外源基因通過電場作用，導入動物目標組織或器官。由于這種方法能有效導入外源基因，可在多種組織器官上應用，并且效率較高。活體電穿孔法的原理很簡單，在直流電場作用的瞬間，細胞膜表面產生疏水或親水的微小通道105～115
活體電穿孔法介紹
1、什么是活體電穿孔活體電穿孔法(in vivo electroporation) 是將外源基因通過電場作用，導入動物目標組織或器官。由于這種方法能有效導入外源基因，可在多種組織器官上應用,并且效率較高。活體電穿孔法的原理很簡單,在直流電場作用的瞬間,細胞膜表面產生疏水或親水的微小通道105～115
活體電穿孔法介紹
1、什么是活體電穿孔 活體電穿孔法(in vivo electroporation) 是將外源基因通過電場作用，導入動物目標組織或器官。由于這種方法能有效導入外源基因，可在多種組織器官上應用，并且效率較高。活體電穿孔法的原理很簡單，在直流電場作用的瞬間，細胞膜表面產生疏水或親水的微小通
活體電穿孔法的基本信息介紹
近年來活體電穿孔法用于轉基因研究的報道不斷增多,在基因治療方面的優勢也日趨顯著,是一種很好的活體基因導入方法。 活體電穿孔法可用于檢測瞬時表達系統中載體的表達狀況。大量的研究表明活體電穿孔法在基因治療方面有非常好的應用前景。因此目國內外對活體電穿孔法介導外源基因轉移的研究越來越多。
活體電穿孔法介紹3
肝 臟由于肝臟的生理代謝十分旺盛，因此外源基因在肝臟中的表達時間往往很短暫，而且表達產物的水平也較低。為減少出血，可從小靜脈注入，然后在肝臟上施加電場，能顯著增強基因的表達。睪 丸相對于其他的轉基因方法，活體電穿孔法可使外源基因在睪丸中產生大量和持久的表達。此外，很多研究人員希望利用活體電穿孔法將外
活體電穿孔法介紹1
1、什么是活體電穿孔活體電穿孔法(in vivo electroporation) 是將外源基因通過電場作用，導入動物目標組織或器官。由于這種方法能有效導入外源基因，可在多種組織器官上應用，并且效率較高。活體電穿孔法的原理很簡單，在直流電場作用的瞬間，細胞膜表面產生疏水或親水的微小通道105～1
活體電穿孔法介紹2
電 壓電穿孔時在能量導入一定的情況下設計施加電壓的值。電壓過低或過高都會影響外源基因的表達。電壓過低時，無法造成細胞膜表面狀態的改變，因而外源D 不能進入細胞內。電壓過高時，局部組織積聚過多熱量，造成細胞的死亡或組織失去功能，即使外源基因導入細胞，也無法進行正常的表達。哺乳動物常用的活體電壓大多
活體電穿孔法介紹（二）
電 壓電穿孔時在能量導入一定的情況下設計施加電壓的值。電壓過低或過高都會影響外源基因的表達。電壓過低時,無法造成細胞膜表面狀態的改變,因而外源D不能進入細胞內。電壓過高時,局部組織積聚過多熱量,造成細胞的死亡或組織失去功能,即使外源基因導入細胞,也無法進行正常的表達。哺乳動物常用的活體電壓大多為20
活體電穿孔法介紹（一）
1、什么是活體電穿孔活體電穿孔法(in vivo electroporation) 是將外源基因通過電場作用，導入動物目標組織或器官。由于這種方法能有效導入外源基因，可在多種組織器官上應用,并且效率較高。活體電穿孔法的原理很簡單,在直流電場作用的瞬間,細胞膜表面產生疏水或親水的微小通道105～1
概述活體電穿孔的法的特點
活體電穿孔法基因導入和表達效率較高,它的特點主要在以下幾個方面: 1、首先,靶器官的選擇面廣 理論上任何組織和器官都可以作為活體電穿孔的靶器官。 在用于基因治療方面，要考慮到靶器官組織生理特性。如果所選擇的局部組織細胞不能把所轉移基因的表達產物分泌到外周血液循環中,則在某種意義上說已失去了
活體電穿孔法與其他活體基因導入方法的比較
到目前為止,非病毒載體的活體基因導入方法有直接注射法、脂質體法、基因槍法、電穿孔法等。每一種方法都有其各自的特殊性,因此很難將這幾種方法進行簡單的比較。 1、直接注射法 可將外源基因直接注射到靶位點或血管中,但此種方法不適合以肌肉作為靶器官,它的外源基因表達效率極低,僅為電穿孔法的百分之一。
知識課堂之活體電穿孔法其他活體基因導入方法的比較
活體電穿孔法(in vivo electroporation) 是將外源基因通過電場作用，導入動物目標組織或器官。由于這種方法能有效導入外源基因，可在多種組織器官上應用,并且效率較高。活體電穿孔法的原理很簡單,在直流電場作用的瞬間,細胞膜表面產生疏水或親水的微小通道105～115μm ,這種通道
活體電穿孔法在基因治療方面的應用
活體電穿孔法(in vivo electroporation) 是將外源基因通過電場作用，導入動物目標組織或器官。這種方法能有效導入外源基因，可在多種組織器官上應用,并且效率較高。活體電穿孔法的原理很簡單,在直流電場作用的瞬間,細胞膜表面產生疏水或親水的微小通道105～115μm ,這種
概述活體電穿孔法在基因治療方面的應用
原來在基因治療中利用活體電穿孔法將抗體或化療藥物導入腫瘤中,促進抗體和化療藥物的運送來進行治療,現在則以特異的外源基因替代了抗體的應用,簡化操作步驟同時降低了費用。 首先,在皮膚瘤和腦瘤的治療中,電穿孔法可有效地將藥物基因導入治療部位。電穿孔法導入人單核細胞趨化物蛋白基因到大鼠腦瘤后,該蛋白在
概述活體電穿孔法在不同組織上的應用
肌肉組織 在肌肉組織中最初進行外源基因活體導入是采用電穿孔法。選擇肌肉組織作為靶組織是因為肌肉組織在體內所占比例很大,約占40 % ,而且外源基因可在肌肉中長期表達、分泌,在基因治療中經常會用到。此外,外源基因也不會因肌細胞的分裂而丟失。 皮膚 皮膚組織相對于其他組織較難進行電穿孔法的基因
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗_電穿孔轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒PEG3350儀器、耗材YPAD 液體培養基渦旋振蕩器實驗步驟1. 將菌株接種 100 ml 的 YPAD 液體培養基，30℃ 振蕩培養過夜，使細胞滴度達到每毫升 1X108?到 2X108?個細胞。2. 3000 g 離心 5 分鐘沉淀細胞，用 100 ml 滅菌水洗兩遍，
電穿孔法穩定轉染
? ? ? ? ? ? 實驗材料 L8057-Y10細胞 D-PBSA 儀器、耗材 培養瓶 培養板
電穿孔法穩定轉染
方案27.12 脂質體介導的瞬時轉染 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 L8057-Y10細胞 D-PBSA
電穿孔法穩定轉染
實驗材料L8057-Y10細胞D-PBSA儀器、耗材培養瓶培養板F12 FB培養基G418(Invitrogen)選擇性培養基電穿孔電穿孔專用杯電穿孔儀II電穿孔儀-II配套的效能擴增器-Plus實驗步驟表達載體與 DNA 制備：pSVTKGH，線性化 [ Selden et al.，1986]此載
細胞轉染電穿孔轉染法
電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內，這種方法就是電穿孔。當遇到某些脂質體轉染效率很低或幾乎無法轉入時建議用電穿孔法轉染。一般情況下，高電場強度會殺死50%-70% 的細胞。現在針對細胞死亡開發出了一種電轉保護劑，可以大大的降低細胞的死亡率，同時提高電穿孔轉染效率
關于DNA印跡法的基本介紹
Southern印跡法(Southern Blot)是將基因組 DNA經限制性內切酶酶解、瓊脂糖凝膠電泳分離，使DNA片段按分子量大小排列在瓊脂糖凝膠上。經堿處理凝膠使DNA變性（使雙鏈DNA變成單鏈），通過具有一定鹽離子濃度溶液的毛細管作用，將凝膠中變性的單鏈DNA片段原位地吸印到硝酸纖維素濾
關于氣化重量法的基本介紹
氣化重量法是用適當的方法使待測組分從試樣中揮發逸出后。再根據試樣質量的減少值或吸收待測組分的吸收劑質量的增加值來計算該組分含量的方法。例如，測定某純凈化合物結晶水的含量，可以加熱烘干試樣至恒重，使結晶水全部氣化逸出，試樣所減少的質量就等于所含結晶水的質量。又如．測定某試樣中CO2的含量，可以設法
關于物理轉染法的基本介紹
①顯微注射 ②電穿孔 ③基因槍 顯微注射雖然費力，但是非常有效的將核酸導入細胞或細胞核的方法。這種方法常用來制備轉基因動物，但卻不適用于需要大量轉染細胞的研究。電穿孔法常用來轉染如植物原生質體這樣的常規方法不容易轉染的細胞。電穿孔靠脈沖電流在細胞膜上打孔而將核酸導入細胞內。導入的效率與脈沖
關于紙層析法的基本介紹
紙層析法又稱紙色譜法，是用紙作為載體的一種色譜法，其應用的原理是相似相溶原理，是通過分裂系的在同一介質中分散速度不同來分析的。 通常可用于葉綠素的色素成分檢驗，氨基酸的鑒定及測定，橘皮精油成分檢驗及一些特定細胞篩查等實驗。
關于沉淀重量法的基本介紹
沉淀法是重量分析法中應用最廣泛的一種方法，這種方法是以沉淀反應為基礎，將被測組分轉化成難溶化合物沉淀下來，再將沉淀過濾、洗滌、烘干或灼燒，最后稱量沉淀的重量。根據沉淀的重量算出待測組分的含量。氣化法是通過加熱或在試樣中加入一種適當的試劑與試樣反應，使待測組分轉化成揮發性產物，以氣體形式排出，然后
關于吸附層析法的基本介紹
吸附層析法是運用較多的一種層析方法，是化學實驗中常用的分離方法。特別適用于很多中等分子量的樣品（分子量小于1，000的低揮發性樣品）的分離，尤其是脂溶性成分一一般不適用于高分子量樣品如蛋白質、多糖或離子型親水住化合物等的分離。吸附層析的分離效果，決定于吸附劑、溶劑和被分離化合物的性質這三個因素。
關于電解重量法的基本介紹
電解法又稱電重量法。重量分析法的全部數據都是由分析天平稱量獲得的，不需要基準物質或標準溶液進行比較。由于稱量誤差一般很小，如果分析方法可靠，操作細心，對常量組分的測定，通常能得到準確的分析結果，測定的相對誤差一般不大于0.1%。但重量法操作繁瑣，分析周期長，且不適用于微量分析和痕量組分的測定，因
關于過濾法的基本介紹
過濾，實質上是使廢水通過具有微細孔道的過濾介質，在過濾介質的兩側壓強不同，此壓差即為過濾的推動力。廢水在推動力作用下通過微細孔道，而微粒物質及膠狀物質則被介質阻截而不能通過。介質截留的顆粒物質本身同樣起過濾介質的作用，將此稱為濾層或濾餅。隨著過程進行，濾層逐漸增厚，水流的阻力也將增加，使水流量下
關于溶膠凝膠法的基本介紹
1846年，法國化學家J.J.Ebelmen發現正硅酸酯在空氣中水解時會形成凝膠，從而開創了溶膠-凝膠（Sol-Gel）化學的新紀元。所謂溶膠-凝膠法是以金屬烷氧化物為先驅體，通過這種先驅體的水解與縮醇化反應形成溶膠，最后通過縮聚反應形成凝膠制品的一種方法。這是一種制備金屬氧化物材料的濕化學方法