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  • 什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗?

    凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的DNA或RNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復合物和非結合的探針。DNA復合物或RNA復合物比非結合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研究的結合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。當檢測如轉錄調控因子一類的DNA結合蛋白,可用純化蛋白,部分純化蛋白,或核細胞抽提液。在檢測RNA結合蛋白時,依據目的RNA結合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,也可用核或胞質細胞抽提液。競爭實驗中采用含蛋白結合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特異),和其它非相關的片段(非特異),來確定DNA或RNA結合蛋白的特異性。在競爭的特異和非特異片段的存在下,依據復合物的特點和......閱讀全文

    凝膠遷移或電泳遷移率實驗

    凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)可以:(1)研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。凝膠遷移或電泳遷移率實驗凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA-electrophoretic mobili

    凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)

    凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 其基本原理是蛋白質可以與末端標記的核酸探針

    凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA-)

    實驗概要凝膠遷移或電泳遷移率實驗是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。通常將純化的蛋白或細胞粗提液和標記的DNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復合物和非結合的探針。DNA-復合物比非結合的探針移動得慢。標記的探針依研究的結合蛋白的不同,

    什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗?

    凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的DNA或RNA探針一同保溫,在非變性

    凝膠遷移實驗(EMSA)——凝膠遷移

    凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)可以:(1)研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。實驗方法原理一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初

    凝膠遷移實驗(EMSA)

    實驗方法原理 凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列

    凝膠遷移實驗(EMSA)

    ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的D

    電泳遷移率

    帶電粒子在單位時間內移動的距離稱為電泳遷移率。溶液中帶電粒子在電場?(E)中向著與它相異電荷的電極移動,它的移動速度(V)是電場(E)和粒子的有效遷移率(m)的乘積,即:V=mE離子的有效遷移率是一個由許多因素(包括離子半徑、溶劑化作用、介電常數、溶劑粘度、離子形狀和電荷、pH、解離度和溫度等)決定

    凝膠遷移實驗(EMSA)實驗方法

    凝膠遷移實驗有稱凝膠阻滯實驗或電泳遷移率實驗(EMSA,electrophoretic mobility shift assay),是一種用于蛋白與核算相互作用的技術。最初是用于轉錄因子與啟動子相互作用的驗證性實驗,也可應用與蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。 一、實驗原理 EMSA主要基于蛋白

    由非變性凝膠電泳遷移率法評估均一性實驗

    試劑、試劑盒 核心 RNA 聚合酶核心 RNA 聚合酶-σ32 復合物σ32 非變性膠樣品緩沖液儲存緩沖液考馬斯亮藍(CBB) 染色液脫色液儀器、耗材 非變性凝膠電泳裝置實驗步驟 材料與設備核心 RNA 聚合酶核心 RNA 聚合酶-σ32 復合物,由免疫親和柱洗脫所得σ32,由 POROS 50S

    由非變性凝膠電泳遷移率法評估均一性實驗

    ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 核心 RNA 聚合酶 核心 RNA 聚合酶-σ32 復合物 σ32 非變性膠樣品緩沖液 儲存緩沖液 考馬斯亮藍(CBB) 染色

    由非變性凝膠電泳遷移率法評估均一性實驗

    當蛋白質在保持其天然構型不變的條件下進行電泳時,其遷移率可以作為它的均一性的一種量度。由于遷移率是電荷和形狀兩者的函數,因此可以預期,能將單體、二聚體等形式彼此分開。也有可能因異構體形狀的差異而用非變性凝膠電泳把蛋白質的構象異構體(conformational isomer) 分開。本實驗來源于蛋白

    影響凝膠電泳色譜儀電泳遷移率的因素

    影響凝膠電泳色譜儀電泳遷移率的因素有樣品的物理性質、支持物介質、電場強度和緩沖液等。一、樣品的物理性質:1、分子大小:線狀雙鏈DNA分子長度(堿基對數目bp)的常用對數與遷移距離成反比,以此來測定DNA片段(線性雙鏈)的分子量準確且方便。當DNA分子大小超過20kb時,普通瓊脂糖凝膠很難將它們分開,

    凝膠遷移實驗(EMSA)之一

    實驗操作方法1.探針的標記:(1) 如下設置探針標記的反應體系:待標記探針 (1.75pmol/微升)??????????????????????? 2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) ? ? ? ? ? ? 1微升Nuclease-Free Water

    電泳遷移率的概念

    帶電粒子在單位時間內移動的距離稱為電泳遷移率。溶液中帶電粒子在電場?(E)中向著與它相異電荷的電極移動,它的移動速度(V)是電場(E)和粒子的有效遷移率(m)的乘積,即:V=mE離子的有效遷移率是一個由許多因素(包括離子半徑、溶劑化作用、介電常數、溶劑粘度、離子形狀和電荷、pH、解離度和溫度等)決定

    凝膠遷移實驗(EMSA)之三:實驗步驟

    實驗材料:DNA樣品試劑、試劑盒:?? ?[γ-32P]ATP、T4多聚核苷酸激酶、Nuclease-Free Water、T4多聚核苷酸激酶緩沖液、醋酸銨、TE、無水乙醇、TBE buffer、重蒸水、甲叉雙、丙烯酰胺、丙烯酰胺、甘油、過硫酸銨、TEMED(四甲基乙二胺)、EMSA Gel

    電泳遷移率變動分析的實驗方法

    通常用32P標記DNA分子,而不標記蛋白質。電泳結束后,用放射自顯影技術顯現具放射性標記的DNA條帶位置。如果細胞蛋白提取物中不存在與同放射性標記的DNA探針結合的蛋白質,那么所有放射性標記都將出現在凝膠的底部;反之,將會形成DNA-蛋白質復合物,由于受到凝膠阻滯的緣故,放射性標記的DNA條帶就會出

    電泳遷移率變動分析的實驗方法

    通常用32P標記DNA分子,而不標記蛋白質。電泳結束后,用放射自顯影技術顯現具放射性標記的DNA條帶位置。如果細胞蛋白提取物中不存在與同放射性標記的DNA探針結合的蛋白質,那么所有放射性標記都將出現在凝膠的底部;反之,將會形成DNA-蛋白質復合物,由于受到凝膠阻滯的緣故,放射性標記的DNA條帶就會出

    凝膠遷移率變動分析實驗

    在本實驗中, 我們用 DNA 親和層析所用的同一互補寡核苷酸 (具體序列見實驗 3 的引言的末尾) 來進行 AP-1 的凝膠遷移率變動分析。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南,作者:朱厚礎。試劑、試劑盒丙烯酰胺雙丙烯酰胺過硫酸銨TEMED(NNN'N'四甲基乙二胺)甘油 (50%;

    凝膠遷移率變動分析實驗

    試劑、試劑盒?丙烯酰胺雙丙烯酰胺過硫酸銨TEMED(NNN'N' 四甲基乙二胺)甘油 (50%;v v)競爭 DNA遷移率變動分析探針TBE凝膠遷移率變動分析緩沖液 TE實驗步驟?材料丙烯酰胺雙丙烯酰胺過硫酸銨(10%;w/v)TEMED(N,N,N',N', 四甲基

    凝膠遷移率變動分析實驗

    凝膠遷移率變動分析實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 丙烯酰胺 雙丙烯酰胺 過硫酸銨

    影響電泳遷移率的因素

      影響電泳遷移率的外界因素:①電場強度 ②溶液的pH值 ③溶液的離子強度 ④電滲現象  影響電泳遷移率的內在因素:①質點所帶凈電荷的量 ②質點的大小和形狀

    影響電泳遷移率的因素

    由電泳遷移率的公式可以看出,影響電泳分離的因素很多,下面簡單討論一些主要的影響因素:1.?待分離生物大分子的性質待分離生物大分子所帶的電荷、分子大小和性質都會對電泳有明顯影響。一般來說,分子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形,則其電泳遷移速度越快。2.?緩沖液的性質緩沖液的?pH?值會影響待分

    電泳遷移率變動分析

    中文名電泳遷移率變動分析外文名electrophoretic mobility shift assay定義用放射性同位素標記待檢測的片段(即探針DNA),然后與細胞提取物共溫育,形成DNA-蛋白復合物,將該復合物加到非變性聚丙烯酰胺凝膠中進行電泳。

    凝膠遷移實驗系列二實驗操作方法

    1.探針的標記:(1) 如下設置探針標記的反應體系:待標記探針 (1.75pmol/微升) ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) ? ? ? 1微升Nuclease-Free Water ? ? ? ? ? ?

    電泳遷移率變動分析的實驗方法介紹

      通常用32P標記DNA分子,而不標記蛋白質。電泳結束后,用放射自顯影技術顯現具放射性標記的DNA條帶位置。如果細胞蛋白提取物中不存在與同放射性標記的DNA探針結合的蛋白質,那么所有放射性標記都將出現在凝膠的底部;反之,將會形成DNA-蛋白質復合物,由于受到凝膠阻滯的緣故,放射性標記的DNA條帶就

    凝膠遷移實驗系統提供了什么試劑?

    ?Promega公司提供一種凝膠遷移實驗系統檢測DNA結合蛋白,系統可作為這類實驗的一種陽性對照。系統包括目的寡核苷酸,對照DNA結合蛋白,結合緩沖液,用于寡核苷酸探針末端標記所需的試劑。Core 系統包括含重組AP2蛋白(AP2抽提液)的大腸桿菌抽提液和AP2的同源寡核苷酸。AP2抽提液是

    凝膠遷移滯后實驗基本原理

    凝膠遷移滯后實驗(electrophoretic mobility shift assays,EMSA)是近年發展起來的研究核酸與蛋白質相互作用簡單、快速、敏感的方法。目前已經成為轉錄因子研究的經典方法。其基本原理是蛋白質可以與末端標記的核酸探針結合,電泳時這種復合物比無蛋白結合的探針在凝膠中泳動的

    EMSA凝膠遷移-(Electrophoretic-mobility-shift-assay)實驗

    實驗原理凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的DNA或RNA探針一同保溫,

    影響瓊脂糖凝膠電泳色譜儀電泳遷移率的因素

    影響瓊脂糖凝膠電泳色譜儀電泳遷移率的因素有DNA分子大小、DNA構象、凝膠濃度、瓊脂糖種類、電泳緩沖液、嵌入染料的存在和使用電壓等。一、DNA分子大小:DNA分子大小遷移速度與logN成反比(N為堿基對數目)。分子越大,摩擦力越大,同時大分子通過凝膠孔的效率低于較小的分子,所以大分子的遷移速度慢。

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