單克隆抗體技術的方法
1、抗原準備抗原(Ag)是指所有能誘導機體發生免疫應答的物質。即能被 T/B 淋巴細胞表面的抗原受體(TCR/BCR)特異性識別與結合,活化 T/B 細胞,使之增殖分化,產生免疫應答產物(致敏淋巴細胞或抗體),并能與相應產物在體內外發生特異性結合的物質。因此,抗原物質具備兩個重要特性:一是誘導免疫應答的能力,也就是免疫原性;二是與免疫應答的產物發生反應,也就是抗原性。很多物質都可以成為抗原,抗原可依據不同的分類方式分為以下幾類:根據抗原性質分為完全抗原和不完全抗原;根據抗原的來源分為異種抗原、同種異型抗原、自身抗原、異嗜性抗原;抗原還可分為內源性抗原、外源性抗原。在進行單克隆抗體制備過程中,很多物質都可以成為抗原,在常規的科研實驗中,科研者經常選用每只小鼠/大鼠每次注射 10～50μg 重組蛋白、偶聯多肽、偶聯小分子等作為抗原產生特異性的單克隆抗體。2、細胞融合細胞融合的方法有物理法(如電融合、激光融合)、化學融合法和生物融合法......閱讀全文
單克隆抗體技術的方法
1、抗原準備抗原(Ag)是指所有能誘導機體發生免疫應答的物質。即能被 T/B 淋巴細胞表面的抗原受體(TCR/BCR)特異性識別與結合,活化 T/B 細胞,使之增殖分化,產生免疫應答產物(致敏淋巴細胞或抗體),并能與相應產物在體內外發生特異性結合的物質。因此,抗原物質具備兩個重要特性:一是誘導免疫應
單克隆抗體技術的技術特點
一是特異性,針對特定的單一抗原表位,它具有高度的特異性,抗腫瘤抗體藥物的研究表明,其特異性主要表現為特異性結合、選擇性殺傷靶細胞、體內靶向性分布以及具有更強的療效。二是多樣性,主要表現在靶抗原的多樣性、抗體結構的多樣性、作用機制的多樣性等方面。三是定向性,抗體藥物可以定向制造,就是根據需要制備具有不
單克隆抗體技術的技術特點
①蛋白質的精細結構；②淋巴細胞亞群的表面新抗原；③組織相容性抗原；④激素和藥物的放射免疫（或酶免疫）分析；⑤腫瘤的定位和分類；⑥純化微生物和寄生蟲抗原；⑦免疫治療和與藥物結合的免疫-化學療法?(“導彈”療法,利用單克隆抗體與靶細胞特異性結合，將藥物帶至病灶部位。因此，單克隆抗體可直接用于人類疾病的診
單克隆抗體技術的技術特點
一是特異性，針對特定的單一抗原表位，它具有高度的特異性，抗腫瘤抗體藥物的研究表明，其特異性主要表現為特異性結合、選擇性殺傷靶細胞、體內靶向性分布以及具有更強的療效。二是多樣性，主要表現在靶抗原的多樣性、抗體結構的多樣性、作用機制的多樣性等方面。三是定向性，抗體藥物可以定向制造，就是根據需要制備具有不
單克隆抗體技術的技術應用
疾病診斷利用單抗進行疾病的診斷目前主要表現在人類疾病和畜禽傳染病的診斷方面，尤其在一些感染性疾病和腫瘤的診斷方面。主要通過鑒定病原體或腫瘤抗原來診斷人是否感染相應疾病。疾病治療目前利用單抗對疾病進行治療已取得了很大的成果，主要是將單抗同藥物耦聯，再與病原體或腫瘤的特異抗原結合后發揮作用。食品衛生目前
單克隆抗體技術
實驗原理 B淋巴細胞能夠產生抗體，但在體外不能進行無限分裂；而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代，但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后，用一特殊選擇培養 基（HAT）阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路，而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存，且既能產生抗體，又能無限增殖，并以此生產抗
單克隆抗體技術
實驗概要顯微鏡下觀察血片或骨髓片，找出異常細胞。實驗原理B淋巴細胞能夠產生抗體，但在體外不能進行無限分裂；而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代，但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后，用一特殊選擇培養基(HAT)阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路，而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存，且既能產
單克隆抗體技術
實驗概要顯微鏡下觀察血片或骨髓片，找出異常細胞。實驗原理B淋巴細胞能夠產生抗體，但在體外不能進行無限分裂；而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代，但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后，用一特殊選擇培養基(HAT)阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路，而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存，且既能產
單克隆抗體技術的方法如何鑒定單抗特性？
鑒定單抗特性⑴ 單克隆性的確定 包括雜交瘤細胞的染色體分析、單抗免疫球蛋白重鏈和輕鏈類型的鑒定和單抗純度鑒定等。⑵ 單抗理化特性的鑒定。從實用意義上說,單抗對溫度和PH變化的敏感性以及單抗的親合力都是理化特性鑒定的主要項目,它們可為單抗的使用和保存提供重要依據。⑶ 單抗與相應抗原的反應性測定。單抗與
單克隆抗體技術的技術類型劃分
鼠源性抗體雜交瘤單克隆抗體制備技術的基本原理是利用聚乙二醇作為細胞融合劑，使免疫的小鼠脾細胞與具有不斷繁殖能力的小鼠骨髓瘤細胞在體外進行融合，在HAT選擇性培養基的作用下，只讓融合成功的雜交瘤細胞生長，經過反復的免疫學檢測篩選和單個細胞培養(克隆化)，最終獲得既能產生所需單克隆抗體，又能不斷繁殖的雜
單克隆抗體技術的原理
哺乳類細胞DNA合成可分為兩條途徑，①從頭(de novo)合成途徑，利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶，可被氨基蝶呤(A)阻斷；②補救(salvag-e)合成途徑，在次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶( HGPRT)存在下利用次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。 單克隆抗體技術的流程為：脾細胞和骨髓瘤細胞在聚乙二醇
單克隆抗體技術的特點
一是特異性，針對特定的單一抗原表位，它具有高度的特異性，抗腫瘤抗體藥物的研究表明，其特異性主要表現為特異性結合、選擇性殺傷靶細胞、體內靶向性分布以及具有更強的療效。 二是多樣性，主要表現在靶抗原的多樣性、抗體結構的多樣性、作用機制的多樣性等方面。 三是定向性，抗體藥物可以定向制造，就是根據需
單克隆抗體技術的介紹
單克隆抗體技術(monoclonal antibody technique) 1975年英國科學家Milstein和Kohler所發明，并獲得1984年諾貝爾醫學獎。 1984 德國人G. J. F.Kohler、阿根廷人C. Milstein[3]和丹麥科學家N. K. Jerne由于發展了單
ELISA技術測定單克隆抗體效價方法
一、實驗目的1.深入了解elisa?法測定抗體效價的原理。2.掌握ELISA 法測定單克隆抗體效價的方法。二、實驗原理ELISA 是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。免疫酶技術是將酶標記在抗體/抗原分子上，形成酶標抗體/
ELISA技術測定單克隆抗體效價方法
一、實驗目的1.深入了解elisa?法測定抗體效價的原理。2.掌握ELISA?法測定單克隆抗體效價的方法。二、實驗原理ELISA?是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。免疫酶技術是將酶標記在抗體/抗原分子上，形成酶標抗體/酶標抗原
單克隆抗體技術簡介
一種免疫學技術，將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞進行細胞融合， 獲得既能產生抗體， 又能無限增殖的雜種細胞，并以此生產抗體。是僅由一種類型的細胞制造出來的抗體，對應于多克隆抗體、多株抗體——由多種類型的細胞制造出來的一種抗體。
單克隆抗體技術的方法細胞篩選操作過程
雜交瘤細胞在融合后2周左右即可篩選,即把分泌所需抗體的雜交瘤孔從眾多的孔中選出來,通常也稱為抗體檢測。抗體檢測的方法很多,通常根據所研究的抗原和 實驗室的條件而定。但作為雜交瘤篩選的抗體檢測方法必須具有快速、準備、簡便,便于一次處理大量樣品等特點。因為往往有幾百個樣品需要在短短幾個小時就報 告結果,
單克隆抗體技術的方法動物免疫操作過程
(1) 抗原制備。制備單克隆抗體的免疫抗原,從純度上說雖不要求很高,但高純度的抗原使得到所需單抗的機會增加,同時可以減輕篩選的工作量。因此,免疫抗原是越純越好,應 根據所研究的抗原和實驗室的條件來決定。一般來說,抗原的來源有限,或性質不穩定,提純時易變性,或其免疫原性很強,或所需單抗是用于抗原不同組
單克隆抗體技術的方法克隆化操作過程
從原始孔中得到的陽性雜交瘤細胞,可能來源于二個或多個雜交瘤細胞,因此它們所分泌的抗體是不同質的。為了得到完全同質的單克隆抗體,必須對雜交瘤細胞進 行克隆化。另一方面,雜交瘤細胞培養的初期是不穩定的,有的細胞丟失部分染色體,可能喪失產生抗體的能力。為了除去這部分已不再分泌抗體的細胞,得到分泌 抗體穩定
單克隆抗體技術：細胞的選擇
脾細胞?1．材料?(1) 免疫過的血清抗體滴度高的Balb/c鼠。?(2) 1640培養液?(3) 2.5％FCS－1640營養液?2．操作方法?(1) 拉頸或用CO2處死小白鼠。?(2) 將小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在無菌條件下取脾。?(3) 把脾放入5ml含有2.5％FCS的
關于單克隆抗體技術的介紹
一種免疫學技術，將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞進行細胞融合， 獲得既能產生抗體， 又能無限增殖的雜種細胞，并以此生產抗體。是僅由一種類型的細胞制造出來的抗體，對應于多克隆抗體、多株抗體——由多種類型的細胞制造出來的一種抗體。 單克隆抗體技術(monoclonal antibody t
單克隆抗體技術的特點簡介
一是特異性，針對特定的單一抗原表位，它具有高度的特異性，抗腫瘤抗體藥物的研究表明，其特異性主要表現為特異性結合、選擇性殺傷靶細胞、體內靶向性分布以及具有更強的療效。 二是多樣性，主要表現在靶抗原的多樣性、抗體結構的多樣性、作用機制的多樣性等方面。 三是定向性，抗體藥物可以定向制造，就是根據需
單克隆抗體技術的基本流程
單克隆抗體技術的流程為:脾細胞和骨髓瘤細胞在聚乙二醇(PEG)作用下發生細胞融合;加入HAT選擇培養基(含H、A和T)后,未融合的骨髓瘤細胞因其從頭合成途徑被氨基蝶呤阻斷,而又缺乏HGPRT不能利用補救途徑合成DNA,從而死亡;未融合的脾細胞難以在體外培養而死亡;融合細胞因從脾細胞獲得HGPRT,故
單克隆抗體技術的醫學應用
利用單抗進行疾病的診斷目前主要表現在人類疾病和畜禽傳染病的診斷方面,尤其在一些感染性疾病和腫瘤的診斷方面。主要通過鑒定病原體或腫瘤抗原來診斷人是否感染相應疾病。目前利用單抗對疾病進行治療已取得了很大的成果,主要是將單抗同藥物耦聯,再與病原體或腫瘤的特異抗原結合后發揮作用。
單克隆抗體技術的制備過程
1.免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處死小
單克隆抗體技術的臨床應用
疾病診斷 利用單抗進行疾病的診斷目前主要表現在人類疾病和畜禽傳染病的診斷方面，尤其在一些感染性疾病和腫瘤的診斷方面。主要通過鑒定病原體或腫瘤抗原來診斷人是否感染相應疾病。 疾病治療 目前利用單抗對疾病進行治療已取得了很大的成果，主要是將單抗同藥物耦聯，再與病原體或腫瘤的特異抗原結合后發揮作
單克隆抗體技術的優缺點
單克隆抗體是人工制備的雜交瘤細胞生產的，雜交瘤細胞是由一個經抗原激活后的B細胞與一個骨髓瘤細胞融合形成。單克隆抗體優點：純度高，靈敏度高，特異性強，交叉反應少，制備的成本低。缺點：對技術有一定的要求，而且通過抗原的化學處理很容易丟失表位 。
單克隆抗體的方法特點
解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識別單一表位特異性的抗體。如果能獲得僅針對單一表位的漿細胞克隆，并使其在體外擴增分泌抗體，就有可能獲得單一表位特異性的抗體。然而，漿細胞在體外的壽命較短，難以培養。為克服這一缺點，Kohler和Milstein將可產生特異性抗體但短壽的B細胞與不產生抗體但長壽
單克隆抗體的產生方法
（一）動物體內誘生法?目前McAb治療用或體外診斷用的多采用該法。小鼠腹腔接種液體石蠟，一周后接種雜交瘤細胞懸液，接種10～14天后，無菌抽取腹水，離心取上清液即可。（二）體外培養法?這是實驗室制備的方法。將雜交瘤細胞置培養瓶中培養，離心后收集上清液。
單克隆抗體的克隆方法
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過