PCR使用技巧
增加PCR的特異性：1. primers design這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些條件a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同樣會降低特異性,并且降低產量b. GC% 40%~~~~60% c. 5'端和中間序列要多GC,以增加穩定性d. 避免3'端GC rich, 最后3個BASE不要有GC,或者最后5個有3個不要是GCe. 避免3'端的互補, 否則容易造成DIMER f. 避免3'端的錯配 g. 避免內部形成二級結構h. 附加序列(RT site, Promoter sequence)加到5'端, 在算Tm值時不算,但在檢測互補和二級結構是要加上它們i. 使用兼并引物時, 要參考密碼子使用表,注意生物的偏好性,不要在3'端使用兼并引物,并使用 較高的引物濃度(1uM-3uM)j.......閱讀全文
PCR使用技巧
基本PCR引物設計參數?引物設計的目的是在兩個目標間取得平衡：擴增特異性和擴增效率。特異性是指發生錯誤引發的頻率。特異性不好或劣等的引物會產生額外無關和不想要的PCR擴增子，在EB染色的瓊脂糖凝膠上可見到；引物效率是指在每一PCR循環中一對引物擴增的產物與理論上成倍增長量的接近程度。?①引物長度；?
PCR使用技巧
增加PCR的特異性：1. primers design這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些條件a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同樣會降低特異性,并且降低產量b. GC% 40%~~~~60% c. 5&
PCR儀使用技巧解析
PCR儀使用技巧解析：PCR儀屬于高端科學產品，在實驗室的使用中，如果不細讀好產品的說明書，以及相關的介紹，將會對pcr儀造成很大的傷害，所以應該做好以下6方面的注意事項。 1.仔細閱讀儀器使用說明書，這樣可以充分發揮儀器的性能并避免發生錯誤 2.程序設計完成后，一定要仔細檢查，以免出錯造成損失
PCR引物設計及軟件使用技巧
PCR引物設計及軟件使用技巧張新宇，朱有康，高燕寧（中國協和醫科大學中國醫學科學院腫瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介紹使用軟件設計PCR引物的技巧。在PCR引物設計原則的基礎上，詳細介紹了兩種常用引物設計軟件的基本使用方法，并對其各自的優缺點進行了比較。一般性引物自動搜索可采用“Prem
PCR儀使用中的一些小技巧
PCR儀使用中的一些小技巧 1.仔細閱讀儀器使用說明書，這樣可以充分發揮儀器的性能并避免發生錯誤 2.程序設計完成后，一定要仔細檢查，以免出錯造成損失 3.常用的程序zui好調用以前使用過的正確程序文件 4.樣品量較小時，zui好在樣品槽的兩邊各加上兩排8聯管，這樣可使熱蓋平整，加熱效果好
PCR儀使用中的一些小技巧
PCR儀使用中的一些小技巧1.仔細閱讀儀器使用說明書，這樣可以充分發揮儀器的性能并避免發生錯誤2.程序設計完成后，一定要仔細檢查，以免出錯造成損失3.常用的程序最好調用以前使用過的正確程序文件4.樣品量較小時，最好在樣品槽的兩邊各加上兩排8聯管，這樣可使熱蓋平整，加熱效果好，有利于效果的穩定性5.在
PCR實驗技巧-1
增加PCR的特異性：?1. prime理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些條件a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同樣會降低特異性,并且降低產量b. GC% 40%~~~~60%?c. 5'端和中間序列要多GC,以增
PCR實驗技巧-5
Trouble shooting guide?1．假陰性，不出現擴增條帶?PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。?模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染
PCR實用技巧
PCR實用技巧增加PCR的特異性：?1. primers design?這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些條件?a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產量?b. G
PCR實驗技巧-5
Trouble shooting guide?1．假陰性，不出現擴增條帶?PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。?模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染