外切核酸酶Ⅲ消化產生多組嵌套缺失突變體
試劑、試劑盒 dNTP 溶液乙醇外切核酸酶Ⅲ緩沖液核酸酶 S1 停止反應混合液酚氯仿醋酸鈉外切核酸酶ⅢKlenow 混合物連接混合物核酸酶 S1 反應混合物限制性內切酶凝膠靶 DNA儀器、耗材 微量離心管或帶 U-型孔的微量滴定板水浴裝置實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液，緩沖液和試劑的成分清參閱附錄 1。將貯存液稀釋到合適的濃度。dNTP 溶液中含有 dATP、dGTP 和 dTTP, 每種 dNTP 濃度為 0.5 mmol/L，溶在 25 mmol/L Tris-Cl(pH8.0) 中乙醇（100%, 冰冷；70%, 室溫。)10x 外切核酸酶Ⅲ緩沖液660 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)66 mmol/LMgCl2100 mmol/Lβ-巰基乙醇核酸酶 S1 停止反應混合液0.3 mmol/L Tris50 mmol/L EDTA(pH8-0)酚：氯仿醋酸鈉（3mol/L,pH5.2)酶和緩沖液外切核酸酶Ⅲ不同......閱讀全文
外切核酸酶的種類
為限制性核酸內切酶（restrictionendonuclease，簡稱限制酶）。當外源DNA侵入細菌后，限制性內切酶可將其水解切成片段，從而限制了外源DNA在細菌細胞內的表達，而細菌本身的DNA由于在該特異核苷酸順序處被甲基化酶修飾，不被水解，從而得到保護。 限制性核酸內切酶的研究和應用發展
外切核酸酶的種類
20世紀70年代，在細菌中陸續發現了一類核酸內切酶，能專一性地識別并水解雙鏈DNA上的特異核苷酸順序，稱為限制性核酸內切酶（restrictionendonuclease，簡稱限制酶）。當外源DNA侵入細菌后，限制性內切酶可將其水解切成片段，從而限制了外源DNA在細菌細胞內的表達，而細菌本身的DNA
外切核酸酶的介紹
一、核酸外切酶 有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例
外切核酸酶的基本介紹
一、核酸外切酶有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例如，蛇毒
外切核酸酶的基本介紹
核酸分解的第一步是水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵,在高等動植物中都有作用于磷酸二酯鍵的核酸酶。不同來源的核酸酶,其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA,稱為核糖核酸酶（RNase）,有些核酸酶只能作用于DNA,稱為脫氧核糖核酸酶（DNase）,有些核酸酶專一性較低,既能作用于RNA
外切核酸酶的基本信息
核酸分解的第一步是水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵，在高等動植物中都有作用于磷酸二酯鍵的核酸酶。不同來源的核酸酶，其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，稱為核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于DNA，稱為脫氧核糖核酸酶（DNase），有些核酸酶專一性較低，既能作用于RNA也能
外切核酸酶Ⅲ的基本信息
中文名稱外切核酸酶Ⅲ英文名稱exonuclease Ⅲ;exoⅢ定 義編號：EC 3.1.11.2。沿3′→5′方向催化脫氧核糖核酸外切，產生5′-磷酸單核苷酸的酶。此酶優先水解雙鏈DNA，對DNA鏈上無嘌呤核苷酸附近的位點具有核酸內切酶的活性。大腸桿菌外切脫氧核糖核酸酶Ⅲ是其中一種。應用學科生物
關于外切核酸酶的種類介紹
20世紀70年代,在細菌中陸續發現了一類核酸內切酶,能專一性地識別并水解雙鏈DNA上的特異核苷酸順序,稱為限制性核酸內切酶（restrictionendonuclease,簡稱限制酶）。當外源DNA侵入細菌后,限制性內切酶可將其水解切成片段,從而限制了外源DNA在細菌細胞內的表達,而細菌本身的D
外切核酸酶Ⅲ的基本信息
中文名稱外切核酸酶Ⅲ英文名稱exonuclease Ⅲ;exoⅢ定 義編號：EC 3.1.11.2。沿3′→5′方向催化脫氧核糖核酸外切，產生5′-磷酸單核苷酸的酶。此酶優先水解雙鏈DNA，對DNA鏈上無嘌呤核苷酸附近的位點具有核酸內切酶的活性。大腸桿菌外切脫氧核糖核酸酶Ⅲ是其中一種。應用學科生物
外切核酸酶的基本信息
核酸分解的第一步是水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵，在高等動植物中都有作用于磷酸二酯鍵的核酸酶。不同來源的核酸酶，其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，稱為核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于DNA，稱為脫氧核糖核酸酶（DNase），有些核酸酶專一性較低，既能作用于RNA也能
外切核酸酶的基本信息介紹
一、核酸外切酶 有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸,所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶,只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸,稱為3′→5′外切酶,例
外切核酸酶－Ⅲ－消化產生多組嵌套缺失突變體
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 dNTP 溶液 乙醇 外切核酸酶Ⅲ緩沖液 核酸酶 S1 停止反應混合液 酚 氯仿 醋酸鈉 外
外切核酸酶－Ⅲ－消化產生多組嵌套缺失突變體
逐步地從靶 DNA 的一端或另一端刪除多個寡核苷酸的嵌套式缺失突變方法被用來確定功能性順式調控元件的邊界，早先曾作為指導 DNA 測序的模板。該方法依賴于核酸酶，這些核酸酶均以可預測的方式消化 DNA, 其中外切核酸酶 HI 是目前最好的。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J.
外切核酸酶－Ⅲ－消化產生多組嵌套缺失突變體
試劑、試劑盒 dNTP 溶液乙醇外切核酸酶Ⅲ緩沖液核酸酶 S1 停止反應混合液酚氯仿醋酸鈉外切核酸酶ⅢKlenow 混合物連接混合物核酸酶 S1 反應混合物限制性內切酶凝膠靶 DNA儀器、耗材 微量離心管或帶 U-型孔的微量滴定板水浴裝置實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液，緩沖液和試劑的成分清參閱附錄
單鏈特異性外切核酸酶的基本信息
中文名稱單鏈特異性外切核酸酶英文名稱singlestrand specific exonuclease定 義編號：EC 3.1.11.1。特異地催化從多核苷酸單鏈的末端相繼切下核苷酸的酶。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
單鏈特異性外切核酸酶的基本信息
中文名稱單鏈特異性外切核酸酶英文名稱singlestrand specific exonuclease定 義編號：EC 3.1.11.1。特異地催化從多核苷酸單鏈的末端相繼切下核苷酸的酶。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
外切體復合物的簡介
外切體的核心是一個由六個亞基組成的環狀結構，外圍的亞基都結合在這一環狀結構上。在真核細胞中，這一核心存在于細胞質和細胞核（特別是核仁）等細胞區室中；在不同的區室中，與之結合的蛋白質也不盡相同，從而可以調控外切體的活性以特異性地降解特定區室的RNA底物。外切體的底物包括信使RNA（mRNA）、核糖
關于核酸外切酶的簡介
有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸二酯酶
關于增變基因的基本信息介紹
許多增變基因的存在，有力地表明自發突變與其說是依賴于理化因子，莫如說是大大的依賴于遺傳控制的生物因子。例如在T4噬菌體中，在同一個DNA多聚酶。 基因座位上曾發現有與增變基因性質相反的反增變基因（antimutator——能使自發突變率降低的基因）的突變型。這是因為在具有增變基因的突變型中DN
S1核酸酶作圖的方法和原理
三種不同的核酸酶——S1核酸酶、RNA酶、外切核酸酶Ⅶ被用來進行RNA定量，確定內含子位置，以及用來鑒定在克隆的DNA模板上的mRNA 5′端和3′端的位置。當檢測RNA被雜交到DNA模板上時，用核酸酶S1進行保護試驗的分析；當檢測RNA被雜交到來自DNA模板的RNA上時用RNA酶。外切核酸酶Ⅶ有更
外切糖苷酶的基本信息
外切糖苷酶是一種蛋白質，能夠切下多糖非還原末端的一個單糖。外切糖苷酶對單糖組成和糖苷鍵有專一性要求。
外切葡聚糖酶的基本信息
中文名稱外切葡聚糖酶英文名稱exoglucanase定 義催化葡聚糖中末端糖苷鍵水解，將單糖分子切下，有一定的底物專一性的酶。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
外切糖苷酶的基本信息
外切糖苷酶是一種蛋白質，能夠切下多糖非還原末端的一個單糖。外切糖苷酶對單糖組成和糖苷鍵有專一性要求。
關于核酸外切酶的信息介紹
有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸二酯酶
不同質量的內切酶，實驗結果大不相同
不好的內切酶常常被各種蛋白酶、非特異外切酶和核酸外切酶污染。使用被外切酶污染的內切酶切割DNA，則會在切割底物的同時破壞產物的末端（外切酶偷偷切掉1、2個bp，瓊脂糖電泳卻看不出來），讓后續的連接、克隆和表達出現問題！而NEB提供的內切酶大部分都經過重組改造，在最大程度上避免了外切酶污染的問題，讓你
核酸酶的分類介紹
核酸外切酶有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸
核酸酶的主要種類
核酸外切酶有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸
細胞內cccDNA的抽提與純化
最常用的抽提細胞內cccDNA的方法是蛋白質－去污劑沉淀法，其原理是基于rcDNA和cccDNA與蛋白質結合能力的差異。rcDNA能與蛋白質共價結合，與絕大多數細胞染色體DNA一起形成沉淀，而cccDNA不能與蛋白質結合故游離于上清中，用酚氯仿抽提上清即可得到cccDNA。根據筆者的經驗，該方法的主
內切葡聚糖酶的外切葡聚糖酶
中文名稱外切葡聚糖酶英文名稱exoglucanase定 義催化葡聚糖中末端糖苷鍵水解，將單糖分子切下，有一定的底物專一性的酶。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
DNA聚合酶外切酶活性─校對作用
外切酶活性──校對作用：這種酶活性的主要功能是從3'→5'方向識別和切除不配對的DNA 生長鏈末端的核苷酸。當反應體系中沒有反應底物dNTP時，由于沒有 聚合作用而出現暫時的游離現象，從而被3'→5'外切酶活性所降解。如果提高反應體系的溫度可以促進這種作用，這表明