免疫組化中抗體選擇要求 1、一抗選擇要點 (1)選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體,單克隆抗體能目標明確地與單一特異抗原決定簇結合,就象導彈精確地命中目標一樣。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內也可以由好幾種克隆產生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應中,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對較低;而多克隆抗體特異性稍弱,抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過封閉等有所避免)。 (2)種屬來源。一般家兔來源的抗體多是多克隆;而小鼠來源的抗體多是單克隆,但也有另外。這條主要要與后面的二抗來源相匹配。 (3)實驗目的是檢測什么種屬的抗原,即species reactivity。這一點很重要,一般說明書上都有注明,如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。 (4)能否做免疫組化。一般一......閱讀全文
歐美國家相繼開展了免疫組化質量控制工作,建立了一套比較完善的質量控制方法和程序。中國病理工作者委員會(CCP)免疫組化研究中心借鑒國外的先進經驗并結合我國當前的實際情況開始探索一種適合我國免疫組化質控的方法,同時,發現和推廣標準化的染色程序,改善和提高免疫組化實驗的可靠性,使免疫組化技術更具標
實驗原理: 抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性,免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來,以此作為抗原或半抗原,通過免疫動物后獲得特異性的抗體,再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。由于抗原與抗體的復合物是無色的,因此還必須借助于組織化學的方法將抗原
小編今天給大家分享一些抗體選擇的經驗~檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體,需要考慮如下幾種因素:分析或應用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種分析類型,如:可以應用于 WB IHC ICC ELASA 分析等,如果抗體說明書沒有提及的
檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體,需要考慮如下幾種因素: (1) 分析或應用的類型 (2)樣本蛋白的結構性質 (3)樣本的種屬 (4)抗體宿主的種類 (5)抗體的標記和檢測 1&nbs
檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體,需要考慮如下幾種因素: 分析試驗應用的類型l 樣本蛋白的結構性質l 樣本的種屬l 抗體宿主的種類l 抗體的標記和檢測l1.分析試驗應用的類型 &nb
檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,在同一個抗體公司,可能會有好幾種,甚至好幾十種;在不同的抗體公司,那就更多了。那怎樣在琳瑯滿目的抗體中,選擇自己實驗需要的抗體呢?主要考慮如下幾種因素:分析自己實驗應用的實驗方法是哪種?分析自己實驗中標本的種屬是哪種動物或人的?分析樣本中的蛋白質的結構性質
2015年5月19日 Nature雜志從美國和加拿大幾位資深科學家的親身經歷,深度闡述了目前抗體試劑的現狀與問題,給全世界科研工作者敲響了警鐘。身為中國科研工作者,我們遇到的抗體試劑問題只怕比國外同行來得更多,當下除了抱怨,我們更應深刻反思:如何才能獲得高質量、合適的抗體試劑。 獲得高質量、合
免疫組織化學的概念: 免疫組化是利用抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學。 免疫組化實驗所用的抗體有哪些? 免疫組化實驗中
6月30日,國家食品藥品監督管理總局在網站上發布新聞,表示以2014年第30號公告形式頒布了《子宮刮匙》等120項推薦性醫療器械行業標準。這是今年6月1日起新修訂的《醫療器械監督管理條例》施行后頒布的第一批醫療器械行業標準。標準的正式頒布將推動醫療器械監督管理,對保障醫療器械安全有效、促進醫療器
Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被
目前,免疫學檢驗中的標記技術主要包括酶免疫技術、熒光免疫技術、放射免疫技術、金免疫技術、化學發光免疫技術等。其中酶免疫技術是以酶標記的抗體(抗原)作為主要試劑,將抗原抗體反應的特異性和酶催化底物反應的高效性和專一性結合起來的一種免疫檢測技術。作為經典的三大標記技術之一,酶免疫技術在檢驗醫學中得到廣
3.抗體T.做細胞信號傳導,要做磷酸化某因子Western Blot,其二抗有何要求?解答:對二抗無要求,要看你實驗條件來選擇,一般推薦用HRP標記的二抗。U.同一公司的另外抗體用這個稀釋度做出來效果很好,所以沒做預試,怕費時間,用什么樣的稀釋度比較好呢?我用的ELL+plus試劑盒顯色。轉膜過夜,
常見問題: 如何選擇合適的一抗? 如何選擇合適的二抗? 如何選擇合適的同型對照? 如何選擇陽性對照? 如何確定一抗的稀釋比例? 如何選擇合適的抗原修復方式? 為何WB檢測條帶大小與預期有差別? 抗體能夠用于其他種屬/實驗方法?
Q&A 常見問題: 如何選擇合適的一抗? 如何選擇合適的二抗? 如何選擇合適的同型對照? 如何選擇陽性對照? 如何確定一抗的稀釋比例? 如何選擇合適的抗原修復方式? 為何WB檢測條帶大小與預期有差別? 抗體能夠用于其他種屬/實驗
1994年到2011年間,《比較神經學》(Comparative Neurology)期刊的主編Clifford Saper經常看到一大堆利用抗體標記神經遞質及其受體位置的論文。2000年前后,基因敲除小鼠在生物領域大受歡迎,但結果令人不安。這提醒了Clifford Saper一個事實:抗體正在
做過病理實驗的人都知道,實驗看似容易,但真想把它做好,還是需要花上很長一段時間去積累和摸索經驗。我從事病理實驗已有 6 年多了,在這段時間里,我做過許許多多病理相關實驗,剛開始啥也不懂,一味按照網上操作流程來做,但做的結果往往并不是十分理想,最終結果未能達到預期的效果。經過一段時間的瀏覽和學習,在論
抗體的制備方法與原理一、抗血清的制備 有了質量好的抗原,還必須選擇適當的免疫途徑,才能產生質量好(特異性強和效價高)的抗體。 (一)用于免疫的動物 作免疫用的動物有哺乳類和禽類,主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等,實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所
了解樣本蛋白的結構性質有助于選擇最合適的抗體,至少兩方面因素需要考慮。?待測樣本蛋白的結構域:抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來,其中的免疫原包括:全長蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機體(如:細菌)或細胞,抗體說明書一般都有免疫原的描述,如果打算檢測的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長的某一區
實驗方法原理 制備免疫親和柱要求抗體首先共價結合到介質上。另一方法是將抗體結合到蛋白 A 或 G 小珠上,再用交聯劑固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 結合在杭體的 Fe 區,
實驗方法原理 制備免疫親和柱要求抗體首先共價結合到介質上。另一方法是將抗體結合到蛋白 A 或 G 小珠上,再用交聯劑固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 結合在杭體的 Fe 區, 所以結合抗原的部位獲得充分暴露,從易于接近。免疫親和柱制備完成后,抗原溶液即可以上樣,接著洗去污染物,然后洗脫抗
在蛋白質純化方法中抗體親和純化是非常有效的方法之一。僅此一步常可獲得 1000~10 000 倍的純化。如果抗體與目的蛋白的結合的特異性得到證明,并且洗脫的目的蛋白沒有受到不可逆的損傷,那么可以認為免疫純化是極好的蛋白質純化方法,特別是用在純化過程的最后步驟。實驗方法原理制備免疫親和柱要求抗體首先共
實驗常見的問題指南根據問題的類型主要分成以下幾類(以下資料權作參考,請勿盲目模仿!):1. 參考書推薦A. 對初學者看什么資料比較好?解答:《抗體技術實驗指南》和Antibodies(a laboratory manual, wrote by Ed Harlow ,d
一、免疫組織化學(Immunohistochemistry,IHC)免疫組織化學是利用抗原抗體的特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及定量的研究。免疫組織化學染色技術不僅有較高的敏感性
免疫組化中抗體選擇要求 1、一抗選擇要點 (1)選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體,單克隆抗體能目標明確地與單一特異抗原決定簇結合,就象導彈精確地命中目標一樣。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內也可以由好幾種克隆產生抗體,形成好幾種單克隆抗
一、抗血清的制備 有了質量好的抗原,還必須選擇適當的免疫途徑,才能產生質量好(特異性強和效價高)的抗體。 (一)用于免疫的動物 作免疫用的動物有哺乳類和禽類,主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等,實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數量,如
實驗原理: WesternBlot印跡方法,又稱為免疫印記,是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,對不同分子量的蛋白質進行分離,并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持物(NC膜或PVDF膜)上,用抗靶蛋白的非標記抗體(一抗)與轉印后膜上的靶蛋白進行特異性結合,再與
前段時間,有小伙伴在公眾號留言說能不能寫點生物藥的文章,不要老是小分子藥嘛。難道你們團隊里只有化學,沒有生物?我們團隊的生物大咖劉博坐不住了,閃開,我來做個分享,絕對干貨!后面還要加鹵蛋!(不對,是彩蛋!) 話不多說,直接開始: 1897年Paul Ehrlich 提出的“魔術子彈”( ma
實驗方法原理 直接法是以熒光素標記的抗體直接與標本內的抗原反應,形成抗原—熒光素標記抗體復合物。根據熒光的分布位置及強度,確定相應抗原的存在與否及其所在部位。實驗材料 抗體試劑、試劑盒 PBS伊文氏蘭儀器、耗材 顯微鏡實驗步驟 1. 標本經固定后,PBS洗滌3×3 分鐘;2. 加熒光素標記的抗體,濕
12月24日,國家藥監局發布《預防用疫苗臨床可比性研究技術指導原則》,將進一步規范和提高疫苗臨床研發水平、加強疫苗質量安全監管。 指導原則共包括“前言”、“臨床試驗前的考慮”、“臨床試驗設計的一般考慮”、“臨床試驗設計的統計學考慮”、“數據管理和質量保證”、“臨床試驗結果評價”共計6個部分。指