【實驗目的】1.熟悉PCR—RFLP分析技術原理及實驗步驟。2.掌握瓊脂糖凝膠電泳檢測方法。3.了解PCR— RFLP在遺傳病基因診斷中的作用。【實驗原理】聚合酶鏈式反應(PCR)是模擬體內DNA復制條件在體外酶促合成特異DNA片段的循環反應,可使目的DNA片段得以迅速擴增。其主要步驟是:將待擴增的模板DNA置于高溫(約93℃-95℃)下使之變性解鏈;人工合成的兩個寡核苷酸引物在低溫(約50℃-70℃)下分別與目的DNA片段兩側的互補序列復性結合;引物在DNA聚合酶作用(約70℃-75℃)下沿模板按5’→3’方向延伸,合成目的DNA片段的新互補鏈。如此經過n個周期,理論上擴增2n倍,一般PCR經30-40周期后可獲得百萬倍以上的目的DNA。聚合酶鏈式反應—限制性片段長度多態(PCR— RFLP)分析技術是在PCR技術基礎上發展起來的。DNA堿基置換正好發生在某種限制性內切酶識別位點上,使酶切位點增加或者消失,利用這一酶切性質......閱讀全文
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
內容:一、遺傳標記 二、DNA分子標記 三、染色體原位雜交 四、DNA分子標記的應用 長期以來,植物育種中選擇都是基于植株的表型性狀進行的,當性狀的遺傳基礎較為簡單或即使較為復雜但表現加性基因遺傳效應時,表型選擇是有效的。但水稻的許多重要農藝性狀為數量性狀,如
前言 一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Po
由于導致語前聾的環境因素的存在,有時無法判斷患者是否為遺傳性聾,同時耳蝸結構復雜,耳聾聽力表現難以區分,常規的電生理檢測或生化檢測均不能從病因學上給出滿意的解釋。這一切,都決定了遺傳性耳聾基因檢測是目前最為有效的病因學
HLA分型并不只是一種應用性的臨床檢測指標,免疫遺傳學研究的發展,很大程度上依賴于以分型為主要手段的HLA多態性分析。60年代建立的并不斷完善的血清學及細胞學分型技術主要側重于分析HLA產物特異性;80年代起建立的DNA分型方法則側重于基因的分型。 一、血清學分型技術 (一)HLA
從DNA水平上尋找確診遺傳病的指標或探討遺傳病和腫瘤的病因等方面,已取得很大成績,這對產前診斷,早期確診和突變基因攜帶者的檢出等都有重要意義。所用的方法大體有以下幾種。 一、分離基因進行結構分析 利用DNA離體轉化,制備探針,制備基因文庫進行篩檢,最后鑒定載體中插入DNA片段的特性等一系列技術,
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
從DNA水平上尋找確診遺傳病的指標或探討遺傳病和腫瘤的病因等方面,已取得很大成績,對產前診斷,早期確診和突變基因攜帶者的檢出等都有重要意義。所用的方法大體有以下幾種。 一、分離基因進行結構分析 利用DNA離體轉化,制備探針,制備基因文庫進行篩檢,最后鑒定載體中插入DNA片段的特性等一系
張珩1 柳洋2(1. 天津市大港醫院檢驗科 2. 德州市中心血站)關鍵詞:1-3-β-D-葡聚糖,真菌感染,實驗室,檢驗方法key words: 1-3-β-D- Glucan, Fungus infection, Laboratory,Testing
一、酸雜交技術檢驗方法建立的基本要素是特異性和靈敏度,在復雜的物體中,使無法感覺的特定物質進入人類的觀察范圍。核酸雜交檢測技術就是利用核酸堿基嚴格配對的特異性,核酸標記物的靈敏度而建立的檢測核酸結構與功能的方法。該法建立以來已有二十年,目前研究實驗室用得多,臨床實驗室用得較少,除成本高外,關鍵是操作
劉向國 謝國明 (重慶醫科大 重慶市 400016)摘 要 熒光定量PCR儀技術是一種新的核酸定量技術,該技木在PCR儀反應系統中引人了熒光標記探針,具有可實時監測,高靈敏性,高特異性和高精確性的特點,極大地克服了原有PCR儀技術的不足,擴大了PCR儀的應用范圍。關鍵詞 定量pcr;熒光;基因Flu
血液分子生物學檢驗技術主要包括PCR技術、DNA測序技術、限制性片段長度多態性(RFLP)、轉基因技術及基因芯片(DNA-chip)技術等分子生物學技術。目前這些技術已應用于血液病基因分析、基因診斷、白血病分型、指導治療、判斷預后和微小殘留病檢測等方面。(1)核酸分子雜交技術原理和方法1)South
血液分子生物學檢驗技術主要包括PCR技術、DNA測序技術、限制性片段長度多態性(RFLP)、轉基因技術及基因芯片(DNA-chip)技術等分子生物學技術。目前這些技術已應用于血液病基因分析、基因診斷、白血病分型、指導治療、判斷預后和微小殘留病檢測等方面。 (1)核酸分子雜交技術原理和方法 1)So
定義 聚合酶鏈式反應簡稱PCR(英文全稱:Polymerase Chain Reaction), 聚合酶鏈式反應具體內容點擊: 聚合酶鏈式反應,簡稱PCR。聚合酶鏈式反應,其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異
【摘要】 目的 應用變性高效液相色譜技術(DHPLC)慘煸此鏈分析對鼻咽癌患者XRCC4基因突變進行篩查與鑒定,研究鼻咽癌患者XRCC4的基因突變情況,探討 DHPLC在篩查相關基因突變、預測放療敏感性方面的應用。 方法 采用聚合酶鏈反應(PCR)和DHPLC篩查88例鼻咽癌患者X
DNA重組技術(或基因工程)是20世紀生物學的偉大成就,并已滲透到生命科學包括醫學 各個領域,為腫瘤的實驗研究和臨床診斷及治療提供了嶄新的技術和有用的工具。本附錄扼要介紹在分子腫瘤學領域中常用的分子生物學基本技術及其在腫瘤研究中的應用,著重介紹它們的原理和應用。至于具體的技術方法和操作步驟可參閱《分
聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增。在擴增反應結束之后,我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析,也可以通過放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析。無論定性還是定量分析,分析的都是PCR終產物。但是在許多
2.第二代分子標記2.1 SSR標記技術 在真核生物基因組中存在許多非編碼的重復序列,如重復單位長度在15~65個核苷酸的小衛星DNA(Minisatellite DNA),重復單位長度在2~6個核苷酸的微衛星DNA(Microsatellite DN
PCR技術www.runwelltac.comPCR技術的基本原理與操作流程聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,為zui常用的分子生物學技術之一。典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模
NGS 是一種識別和確認未知致病菌的前景廣闊的技術,然而其在生物防御和公共健康應用等方面的時效性,卻往往因為缺乏快速、有效、可靠的自動DNA樣品制備方法而受到限制。為了突破這種限制,Kim 等設計了一種基于流體分布元件的數字微流體(DMF) 平臺,使得多子系統模塊能夠進入自動NGS庫樣品
摘要:當代社會人類對食品安全的關注度越來越高,相應的食品檢測技術也得到改善。其中生物技術也揮了重要的作用,PCR技術、酶聯免疫吸附技術(ELISA)、PCR-免疫技術(PCR-ELISA)、免疫親合色譜(IAC)、生物芯片(Biochips)等技術以各自的優點,被廣泛地運用于食品檢測領域。&nb
實驗方法原理 聚合梅鏈式反應(polymerase chain reaction)即PCR技術,是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法,故又稱基因的體外擴增法。PC
實驗方法原理聚合梅鏈式反應(polymerase chain reaction)即PCR技術,是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法,故又稱基因的體外擴增法。PCR技術已成為分子生物學研究中使用最多,最廣泛的手段之一,而引物設計是PCR技術中至關重要的一環,使用不合適的PCR引物容易導致實
聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增。在擴增反應結束之后,我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析,也可以通過放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析。無論定性還是定量分析,分析的都是PCR終產物。但是在
芯片毛細管電泳具有進樣量少,靈敏度高,分析速度快等特點,非常適合法醫DNA-STR的快速檢驗。毛細管電泳芯片由于尺寸小,可施加較大場強,所以在幾秒鐘內就可完成對樣品的分離,微陣列毛細管電泳芯片可實現高通量檢測則成為目前學者研究的熱點。2002年Emrich CA等[31]報道的將高通量384孔毛
聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,為最常用的分子生物學技術之一。典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應組成一個循環,通過多次循環反應,使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是
聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,為最常用的分子生物學技術之一。典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應組成一個循環,通過多次循環反應,使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是
實驗概要聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,為最常用的分子生物學技術之一。典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應組成一個循環,通過多次循環反應,使目的
【摘要】目的 建立結核分枝桿菌的熒光定量PCR檢測方法,探討熒光 PCR檢測痰標本中結核分枝桿菌的應用價值。方法 根據結核分枝桿菌基因保守序列設計引物和探針,并構建標準品。對102例培養涂陽的結核痰液標本和45例非結核感染者的痰標本,應用熒光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法檢測結核分枝桿菌。 結果 熒
(一)常用的分子生物學技術1.核酸雜交 常用的雜交技術有:斑點雜交、southern印跡、原位雜交、Northern印跡等。探針的種類有全染色體DNA探針、染色體克隆片段DNA探針、質粒DNA探針、rRNA基因探針、寡核苷酸探針等醫`學教育網搜集整理。2.核酸擴增技術 核酸擴增技術是分子生物學中最具