利用雙雜交系統相互作用阱／篩選特定蛋白的肽適配體...
利用雙雜交系統相互作用阱／篩選特定蛋白的肽適配體實驗實驗方法原理 實驗材料 DNA酵母株試劑、試劑盒 PCR 引物聚乙二醇甘油存儲液Tris·ClX-gal 平板完全極限（CM） 缺失成分培養基和平板儀器、耗材 30℃ 和 42℃ 培養箱或水浴實驗步驟 實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他」1. 使用標準的亞克隆技術，將編碼誘餌蛋白的 DNA 插入 PEG202 的多克隆位點構建誘館質粒（pBait）。2. 按照乙酸鋰酵母轉化法用 pBait 和 pSH18-34 （lacZ 報道載體）轉化相互作用阱篩選酵母株（EGY48）。3. 將轉化株涂布到 Glu／CM-His、-Ura 平板上，放置于 30℃ 培養箱中。4. 進行 lacZacZ 激活和亮氨酸需求平板檢測以確保誘餌蛋白不會自己激活報道基因。5. 用阻遏測試法確定誘餌蛋白的合成。6. 將轉化的 EGY48（步驟 3）接種到 20 ml Glu／CM-His、-......閱讀全文
利用雙雜交系統相互作用阱／篩選特定蛋白的肽適配體...
利用雙雜交系統相互作用阱／篩選特定蛋白的肽適配體實驗實驗方法原理 實驗材料 DNA酵母株試劑、試劑盒 PCR 引物聚乙二醇甘油存儲液Tris·ClX-gal 平板完全極限（CM） 缺失成分培養基和平板儀器、耗材 30℃ 和 42℃ 培養箱或水浴實驗步驟 實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其
利用雙雜交系統相互作用阱／篩選特定蛋白肽適配體實驗
實驗材料DNA酵母株試劑、試劑盒PCR 引物聚乙二醇甘油存儲液Tris·ClX-gal 平板完全極限（CM） 缺失成分培養基和平板儀器、耗材30℃ 和 42℃ 培養箱或水浴實驗步驟實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他」1. 使用標準的亞克隆技術，將編碼誘餌蛋白的 DNA 插入 PEG20
酵母雙雜交原理（蛋白相互作用）
?概述酵母雙雜交系統由Fields和Song等首先在研究真核基因轉錄調控中建立。典型的真核生長轉錄因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二個不同的結構域: DNA結合結構域（DNA-binding domain）和轉錄激活結構域（transcription-activating domain）。前者
配體-配體相互作用的功能
中文名稱配體-配體相互作用英文名稱ligand-ligand interaction定 義泛指不同配體之間的相互作用。如受體上有多個配體結合位點時，一個配體與受體的結合可能影響另一個配體與受體的結合。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），信號轉導（二級學科）
配體-配體相互作用特點
中文名稱配體-配體相互作用英文名稱ligand-ligand interaction定 義泛指不同配體之間的相互作用。如受體上有多個配體結合位點時，一個配體與受體的結合可能影響另一個配體與受體的結合。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），信號轉導（二級學科）
用肽適配體正向分析細胞過程實驗2
輔助方案 肽適配體靶點的鑒定 實驗方法原理 通過配對相互作用或捕獲法鑒定的肽適配體的假定靶點應當通過遺傳學測試進行驗 證，例如： 1. 用免疫沉淀法確定體內適配體的相互作用； 2. 通過上位（顯）性分析以確定適配體在與靶蛋白相同的區域發揮功能； 3. 比較由靶蛋白刪除或過表
酵母雙雜交系統逆雙雜交系統的介紹
在研究蛋白質的結構功能特點、作用方式過程中，有時還要通過突變、加抑制劑等手段破壞蛋白質間的相互作用。針對實際工作中的這種需要，Vidal等人發展了所謂的逆雙雜交系統（reverse two-hybrid system）。這項技術的關鍵是報道基因URA3的引入。URA3基因在這里起到了反選擇的作用
適配體的篩選方法
適配體靶標范圍廣，靶標的大小與可溶性均不同，因此應用 SELEX 技術篩選核酸適配體可以采用不同的具體操作方法。離心沉淀法常用于針對細胞、細菌與病毒的適配體篩選，固相吸附與洗脫技術可以用于可溶性小分子的適配體篩選。適配體篩選的具體方法包括以下幾個方面。基于不同固定介質的篩選方法。硝酸纖維素膜過濾法是
適配體的篩選方法
適配體靶標范圍廣，靶標的大小與可溶性均不同，因此應用 SELEX 技術篩選核酸適配體可以采用不同的具體操作方法。離心沉淀法常用于針對細胞、細菌與病毒的適配體篩選，固相吸附與洗脫技術可以用于可溶性小分子的適配體篩選。適配體篩選的具體方法包括以下幾個方面。基于不同固定介質的篩選方法。硝酸纖維素膜過濾法是
構建硫氧還蛋白肽適配體組合庫實驗
實驗材料 E.coli MC 1061 （Bio－Rad）硫氧還蛋白表達載體質粒DNA 洗脫液 試劑、試劑盒 DNA 聚合酶DNA 連接酶小牛腸堿性磷酸酶（CIP）限制性內切核酸酶反應緩沖液4dNTPTris·Cl培養基 儀器、耗材 QIAquick 膠回收試劑盒