PCR技術原理、實驗步驟和應用
一、實驗目的1.掌握聚合酶鏈式反應的原理。2. 掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術。二、實驗原理PCR技術,即聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)是由美國PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年獲諾貝爾化學獎)建立的。這項技術可在試管內的經數小時反應就將特定的DNA片段擴增數百萬倍,這種迅速獲取大量單一核酸片段的技術在分子生物學研究中具有舉足輕重的意義,極大地推動了生命科學的研究進展。它不僅是DNA分析最常用的技術,而且在DNA重組與表達、基因結構分析和功能檢測中具有重要的應用價值。PCR可以被認為是與發生在細胞內的DNA復制過程相似的技術,其結果都是以原來的DNA為模板產生新的互補DNA片段。細胞中DNA的復制是一個非常復雜的過程。參與復制的有多種因素。PCR是在試管中進行的DNA復制反應,基本原理與細胞內DNA復制相似,但反應體系相對較簡單。PCR由變性--退......閱讀全文
PCR技術原理、實驗步驟和應用
?一、實驗目的1.掌握聚合酶鏈式反應的原理。2. 掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術。二、實驗原理PCR技術,即聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)是由美國PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年獲諾貝爾化學獎)建立的。這項技術可在試
PCR技術原理、實驗步驟和應用
一、實驗目的1.掌握聚合酶鏈式反應的原理。2. 掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術。二、實驗原理PCR技術,即聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)是由美國PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年獲諾貝爾化學獎)建立的。這項技術
PCR技術原理、實驗步驟和應用
一、實驗目的1.掌握聚合酶鏈式反應的原理。2. 掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術。二、實驗原理PCR技術,即聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)是由美國PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年獲諾貝爾化學獎)建立的。這項技術可在試管
PCR技術原理、實驗步驟和應用
一、實驗目的1.掌握聚合酶鏈式反應的原理。2. 掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術。二、實驗原理PCR技術,即聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)是由美國PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年獲諾貝爾化學獎)建立的。這項技術可在
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至40~60℃左右,引物與模板
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至40~60℃左右,引物與模板
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至40~60℃左右,引物與模板
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至40~60℃左右,引物與模板
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至40~60℃左右,引物與模板
PCRDHPLC實驗原理和步驟
【實驗目的】1.了解PCR-DHPLC技術的原理。2.了解并熟悉PCR-DHPLC技術的步驟。【實驗原理】DHPLC技術也稱為WAVE核苷酸片段分析系統。利用高效液相色譜原理,PCR擴增后的DNA片段與緩沖液(TEAA)混合形成液相,流動相被高壓驅動,通過一個DNA分離柱——DNA Sep柱
PCR實驗的原理和方法步驟
原理就是堿基互補原則步驟模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至40~60℃左右,引物與模板
原位PCR技術基本原理、類型、步驟和應用2
標本的制備原位PCR技術可應用于細胞懸液、細胞涂片、冰凍切片以及石蠟切片。相比較而言,以懸浮的完整細胞做原位PCR效果最好,石蠟切片效果最差。隨著技術方面的一些問題被解決,近年也有從石蠟切片中得到滿意的PCR效率的報道。效果不好的原因是多方面的,如:玻片上做PCR,熱傳導較差,熱對流不均勻,TaqD
原位PCR技術基本原理、類型、步驟和應用2
在科學研究中,每一項新技術的創立都會帶來一系列新的研究成果問世,從而推動著各學科的發展。縱觀形態研究領域,50年代電子顯微鏡引入形態學觀察領域,帶來了從細胞水平到亞細胞水平的深入研究;60-70年代,免疫組織化學與免疫細胞化學技術的廣泛應用,又將觀察的水平由亞細胞結構推向了蛋白質分子
原位PCR技術基本原理、類型、步驟和應用2
在科學研究中,每一項新技術的創立都會帶來一系列新的研究成果問世,從而推動著各學科的發展。縱觀形態研究領域,50年代電子顯微鏡引入形態學觀察領域,帶來了從細胞水平到亞細胞水平的深入研究;60-70年代,免疫組織化學與免疫細胞化學技術的廣泛應用,又將觀察的水平由亞細胞結構推向了蛋白質分子水平,使細胞內眾
PCRSSP分析實驗原理和步驟
PCR 序列特異性引物(sequence specific primer,SSP)分析法是使用能夠特異識別特定等位基因的引物通過PCR 擴增檢測序列多態性的方法,也稱作等位基因特異性引物PCR 法。本實驗是應用PCR-SSP 法檢測MN 基因型。 [實驗原理] 根據決定某等位基因的堿基性質,
PCRSSP分析實驗原理和步驟
?PCR 序列特異性引物(sequence specific primer,SSP)分析法是使用能夠特異識別特定等位基因的引物通過PCR 擴增檢測序列多態性的方法,也稱作等位基因特異性引物PCR 法。本實驗是應用PCR-SSP 法檢測MN 基因型。[實驗原理]根據決定某等位基因的堿基性質,設計3′端
PCRSSP分析實驗原理和步驟
PCR 序列特異性引物(sequence specific primer,SSP)分析法是使用能夠特異識別特定等位基因的引物通過PCR擴增檢測序列多態性的方法,也稱作等位基因特異性引物PCR 法。本實驗是應用PCR-SSP 法檢測MN 基因型。[實驗原理]根據決定某等位基因的堿基性質,設計3′端第一
PCRDGGE實驗原理和操作步驟
【實驗目的】 1.了解PCR-DGGE技術的原理。 2.了解并熟悉PCR-DGGE技術的步驟。 【實驗原理】 變性梯度凝膠電泳(DGGE)是一種根據DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統。核酸的雙螺旋結構在一定條件下可以解鏈,稱之為變性。核酸50%發生變性時的溫度稱為熔解溫度(Tm
PCRSSCP實驗原理和操作步驟
【實驗目的】1.了解PCR-SSCP技術的原理。2.了解并熟悉PCR-SSCP技術的步驟。 【實驗原理】 PCR-SSCP是1989年日本Orita等創建的篩查突變的新技術。它是一種簡單、快速、經濟的點突變篩查手段。PCR-SSCP技術的基本原理是PCR擴增后的DNA片段經變性成單鏈DNA,
PCR擴增DNA(PCR-Amplify-DNA)實驗原理、材料和操作步驟
【實驗原理】聚合酶鏈反應(polymerasechainreaction,PCR)是一種體外 DNA擴增技術,1985年由Mullis等人創立。該技術能在幾小時的實驗操作中,將人為選定的一段DNA擴增幾百萬倍,具有靈敏度高、特異性強、操作簡便和應用廣泛等優點,目前已成為分子生物學及基因工程中極為
基因的PCR擴增實驗原理、實驗材料和操作步驟
實驗原理單鏈DNA在互補寡聚核苷酸片段的引導下,可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向復制出互補DNA。這時單鏈DNA稱為模板DNA,寡聚核苷酸片段稱為引物(Primer),合成的互補DNA稱為產物DNA。雙鏈DNA分子經高溫變性后成為兩條單鏈DNA,它們都可作為單鏈模板DNA,在相應的引物引導下,用
應用PCR技術擴增Hbβ基因實驗原理、儀器試劑和方法
PCR(Polymerase Chain Reaction )是一種在體外特異的擴增基因的技術。由Kary.Mullis發明,該技術大大推動了分子生物學的發展,被認為是分子生物學發展的里程碑。Kary.Mullis分享了1993年諾貝爾化學獎。復習細胞內DNA復制條件和過程。 一、目的 1:
pcr擴增的原理和步驟
實驗方法原理①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;③
PCR擴增的原理和步驟
PCR技術的基本原理 類似于DNA的 天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR是一種體外DNA 擴增技術,是在模板DNA、引物和4種脫氧核苷酸存在的條件下,依賴于DNA聚合酶的酶促合反應,將待擴增的DNA片段與其兩側互補的寡核苷酸鏈引物經“高溫變性——低溫退火——引物PCR
pcr擴增的原理和步驟
實驗方法原理①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;③
pcr擴增的原理和步驟
實驗方法原理①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;③
pcr擴增的原理和步驟
實驗方法原理①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;③
pcr擴增的原理和步驟
實驗方法原理①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;③
pcr擴增的原理和步驟
實驗方法原理①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;③
PCR擴增的原理和步驟
PCR技術的基本原理 類似于DNA的 天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物.PCR是一種體外DNA 擴增技術,是在模板DNA、引物和4種脫氧核苷酸存在的條件下,依賴于DNA聚合酶的酶促合反應,將待擴增的DNA片段與其兩側互補的寡核苷酸鏈引物經“高溫變性——低溫退火——引物PCR