試劑準備1、 TROzlo試劑、氯仿、75%乙醇(0.1% DEPC配制)。2、 塑料器皿需用0.1% DEPC水浸泡。3、 0.1%DEPC水:100ml dd水中加入DEPC0.1ml,充分振蕩,37℃孵育12h以上,121℃高壓滅菌20min,于4℃保存。操作步驟1、 樣品處理(1) 組織:50-100mg組織中加入1ml TROzlo試劑。(2) 單層細胞:加入TROzlo試劑1ml/cm2平板。(3) 懸浮細胞:處理前洗滌細胞,以防止RNA降解。每5-10×105動物、植物或酵母細胞,或1×107細菌加入1 ml TROzlo試劑。2、 將上述樣品于15-30℃靜置5min,使核蛋白充分解離。3、 加入0.2ml(1 ml TROzlo試劑)氯仿,蓋緊蓋子,充分劇烈振蕩15s并于15-30℃靜置2-3min。4、 于2-8℃ 12000g離心15min。離心后樣品分層,上層水相中含RNA,下層有機相中含蛋白和DNA。5......閱讀全文
試劑準備1、 TROzlo試劑、氯仿、75%乙醇(0.1% DEPC配制)。2、 塑料器皿需用0.1% DEPC水浸泡。3、 0.1%DEPC水:100ml dd水中加入DEPC0.1ml,充分振蕩,37℃孵育12h以上,121℃高壓滅菌20min,于4℃保存。操作步驟1、 樣品處理(1) 組織:5
一、用異硫氰酸胍提取提禽流感病毒的詳細步驟,可參考(我提過N次做定量PCR都沒問題):1.取200ul樣品數+陰性對照+陽性對照個1.5ml滅菌eppendorf管2.加600ul異硫氰酸胍,然后加入對照和樣品,再加200ul氯仿,顛倒混勻3.13000rpm離心15min4.在第3步離心快結束時,
實驗概要本實驗旨在掌握病毒RNA提取的實驗方法,包括用異硫氰酸胍提取禽流感病毒RNA、TRIzol LS提取病毒RNA及Trizol法提禽流感病毒RNA。實驗步驟1. 用異硫氰酸胍提取禽流感病毒RNA1) 取200ul樣品數 陰性對照 陽性對照個1.5ml滅菌eppendorf管; 2) 加600u
1,用異硫氰酸胍提取提病毒的詳細步驟,可參考(我提過N次做定量PCR都沒問題):1.取 200ul樣品數+陰性對照+陽性對照個1.5ml滅菌eppendorf管2.加600ul異硫氰酸胍,然后加入對照和樣品,再加200ul氯仿,顛倒混勻3.13000rpm離心15min4.在第3步離心快結束時,另取
病毒的核酸包括雙鏈DNA(dsDNA)、單鏈DNA(ssDNA)、雙鏈RNA(dsRNA)、正單鏈RNA(+ssRNA)、負單鏈RNA(-ssRNA)五種不同類型。病毒顆粒中的組成成分有簡有繁,有的用顆粒自帶專門用于病毒復制的核酸酶,有的則無。有些RNA病毒的RNA并不僅有一個分子,如流感病毒有8條
1,用異硫氰酸胍提取提禽流感病毒的詳細步驟,可參考(我提過N次做定量PCR都沒問題):1.取200ul樣品數+陰性對照+陽性對照個1.5ml滅菌eppendorf管2.加600ul異硫氰酸胍,然后加入對照和樣品,再加200ul氯仿,顛倒混勻3.13000rpm離心15min4.在第3步離心快結束時,
病毒RNA提取可以:(1)用于RNA病毒復制機制研究;(2)用于反向遺傳學研究;(3)用于分子病毒學其他研究。實驗方法原理大多植物病毒RNA 為單鏈RNA ,并且其極性與mRNA 極性相同,植物病毒RNA 提取較為簡單,一般使用酚氯仿即可獲得滿意結果。實驗材料TMV病毒液試劑、試劑盒TE-飽和酚:氯
大多植物病毒RNA為單鏈RNA,并且其極性與mRNA極性相同,植物病毒RNA提取較為簡單,一般使用酚氯仿即可獲得滿意結果。? 一、材料? 提純TMV病毒液(10mg/ml)。? 二、設備? 冷凍臺式離心機,低溫真空干燥儀,電泳儀,電泳槽。? 三、試劑? TE-飽和酚:氯仿(1:1),氯仿
TE-飽和酚/氯仿提取法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 大多植物病毒RNA 為單鏈RNA ,并且其極性與mRNA 極性相同,植物病毒RNA 提取較為簡單,一般使用酚氯仿即可獲
實驗方法原理 大多植物病毒RNA 為單鏈RNA ,并且其極性與mRNA 極性相同,植物病毒RNA 提取較為簡單,一般使用酚氯仿即可獲得滿意結果。實驗材料 TMV病毒液試劑、試劑盒 TE-飽和酚:氯仿氯仿NaAc乙醇TE緩沖液雙菌水儀器、耗材 冷凍臺式離心機低溫真空干燥儀電泳儀電泳槽實驗步驟 一、實驗