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1、通過已知基因產物的分析和鑒定這類技術主要通過生物化學和病理學研究分離鑒定有關基因的蛋白產物，并對蛋白質氨基酸順序進行分析，推斷出編碼該蛋白質的基因序列，然后通過抗體、寡聚核苷酸探針或PCR制備的探針對文庫進行篩選來分離目的基因。如植物抗病蟲基因工程中常用的蘇云金桿菌殺蟲晶體蛋白基因（Bt基因）、豇豆胰蛋白酶抑制基因（CpTI基因）、病毒外殼蛋白基因（CP基因）等。當其他植物的同類基因已分離到并且核苷酸序列保守性較高時，也可直接用這些已知的基因片段作探針對未克隆到該基因的植物基因文庫進行篩選，也可分離到未知的新基因。2、通過遺傳表型分析（1）基因標鑒法。該法是利用轉座子或T-DNA插入植物的基因組中引起某一基因失活產生一些突變體，然后用相應轉座子或T-DNA對突變體文庫進行篩選，以選到的陽性克隆片段為探針，再篩選野生型植物因文庫分離目的基因。如將一株帶有功能的轉位因子系統的植物與另一株在遺傳上有差異的同種植物雜交，在雜交后代中......閱讀全文
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
基因敲除可以說是基因組 學、細胞分離培養以及轉基因技術的組合。那么基因敲除的原理是什么呢？ 基因敲除的方法有哪些呢？在此，做個小結，以供大家學習。一.概述：基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子 生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用D
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統，由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷，人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今
設想，你要把一臺機器，從生產廠里運輸到需要這臺機器的工廠里，并讓它順利工作，要通過幾個步驟呢？首先呢，我們要先把這臺機器生產出來，然后打包，裝到汽車上并運輸到目的工廠內，安裝機器，最后經過一系列調試，才能讓工廠使用這臺新機器進行新產品的生產。和這一過程相似，生產轉基因植物，也需要上面一系列步驟。在一
內容：一、遺傳標記 二、DNA分子標記 三、染色體原位雜交 四、DNA分子標記的應用 長期以來，植物育種中選擇都是基于植株的表型性狀進行的，當性狀的遺傳基礎較為簡單或即使較為復雜但表現加性基因遺傳效應時，表型選擇是有效的。但水稻的許多重要農藝性狀為數量性狀，如
摘要：綜述了RAPD技術的一些理論性問題，包括RAPD與其它分子標記技術相比的優點，影響結果重復性的因素，顯性標記產生的原因，條帶取舍的標準等。提出在實驗中解決這些問題的一些方法：嚴格控制反應條件，采用單倍體和單劑量標記，系統學研究中要結合其它方法進行分析，定位基因時要選用合適的群體等。
蛋白表達是指用模式生物如細菌、酵母、動物細胞或者植物細胞表達外源基因蛋白的一種分子生物學技術。蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系，通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。1、宿主。表達蛋白的生物體。可以為細菌、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性不同，適合表
活體動物體內光學成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物發光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA，而熒光技術則采用熒光報告基團（GFP、RFP, Cyt及dyes等）進
幾十年來生物學上最重要的進展，也許是關于RNA分子能調節基因表達的發現。RNA干涉（RNAi）是指雙鏈RNA分子使基因表達沉寂的現象，是在線蟲中發現的，在 1998年的一篇Nature論文中被公諸于眾。 此后，科學家們明白，RNAi還有其他形式，它既
近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾（RNAi）。一、RNA
RNAi實驗原理與方法近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾（
微生物細胞培養，簡稱微生物培養，包括原核細胞培養（細菌培養）和真核細胞培養（霉菌培養和酵母培養）。這些細胞小、且具有細胞壁，細胞周期非常短，如細菌每20-30min增殖1次。植物細胞培養指原生質體培養。未考慮分離出原生質體的植物細胞培養，無論是游離的單細胞或組織塊，都稱作植物組織培養。動物組織細胞培
Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu第四軍醫大學全軍骨腫瘤研究所 西安 710038Institute of Orthopedi
小動物活體成像主要采用生物發光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術。生物發光是用熒光素酶（Luciferase）基因標記細胞或DNA，而熒光技術則采用熒光報告基團（GFP、RFP, Cyt及dyes等）進行標記。利用一套非常靈敏的光學檢測儀器，讓研究人員能夠直
小動物活體成像 主要采用生物發光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術。生物發光是用熒光素酶（Luciferase）基因標記細胞或DNA，而熒光技術則采用熒光報告基團（GFP、RFP, Cyt及dyes等）進行標記。利用一套非常靈敏的光學
實驗方法原理 聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法，故又稱基因的體外擴增法。PC
實驗方法原理聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法，故又稱基因的體外擴增法。PCR技術已成為分子生物學研究中使用最多，最廣泛的手段之一，而引物設計是PCR技術中至關重要的一環，使用不合適的PCR引物容易導致實
基因敲除技術最新研究進展—|基因敲除技術|轉基因研究|基因克隆|基因靶向操作|基因敲除技術是建立在基因同源重組技術以及胚胎干細胞技術的基礎上而發展起來的一種分子生物學技術。1987年Thompsson建立了完整的ES細胞基因敲除的小鼠模型 。近年來新興起了ZFNs、TALENS、Cas9等多
一、核酸提取技術的改進進行分子生物學研究的前提是取得高數量和高質量的核酸，即DNA和RNA。由于隱球菌細胞壁外有一層厚厚的莢膜，為破除真菌細胞壁造成很大困難。可靠地提取隱球菌DNA的方法建立于20世紀80年代后期，研究者先后建立了玻璃珠方法、超聲粉碎、液氮冷凍研磨等破壁技術。后來，發展酶學方法取代物
(1) 定性PCR法定性PCR可直接檢測啟動子、終止子、標記基因片斷、目的基因片斷。為使目的基因很好的進行表達，在構建基因表達載體時常在目的基因的5’和3’端分別加上啟動子和終止子。當前大約75%的轉基因植物中使用Ca MV( Cauliflower mosaicvirus) 3 5 S啟動
近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型, 稱為RNA干擾（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子,能夠
【實驗目的】1、掌握引物設計的基本要求，并熟悉使用Primer premier5.0軟件進行引物搜索。2、掌握使用軟件oligo6.0對設計的引物進行評價分析。【實驗原理】一、引物設計原則聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或
【實驗目的】1、掌握引物設計的基本要求，并熟悉使用Primer premier5.0軟件進行引物搜索。2、掌握使用軟件oligo6.0對設計的引物進行評價分析。【實驗原理】一、引物設計原則聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或
DNA重組技術（或基因工程）是20世紀生物學的偉大成就，并已滲透到生命科學包括醫學 各個領域，為腫瘤的實驗研究和臨床診斷及治療提供了嶄新的技術和有用的工具。本附錄扼要介紹在分子腫瘤學領域中常用的分子生物學基本技術及其在腫瘤研究中的應用，著重介紹它們的原理和應用。至于具體的技術方法和操作步驟可參閱《分
實驗步驟 一、引言 選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及 時 獲 取 所 需 數 量 和 質 量 的 重z組蛋白非常關鍵。選 擇 了 錯 誤 的表達宿主可 能 導 致 蛋 白 質錯 誤 折 疊 或
重組蛋白是研究生物學過程的重要工具。需要使用表達系統來對其進行制備。合適表達系統的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預期應用以及該系統能否生產足夠量的蛋白質。作者： 伯吉斯等,主譯：陳薇，本實驗來自「蛋白質純化指南」實驗步驟一、引言選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及
一、目的基因的獲得 目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動