活體動物體內光學成像（九）
關于活體成像系統常見問題解答1. 關于小動物活體成像技術的起源與發展活體動物體內光學成像主要采用生物發光與熒光兩種技術。生物發光是用熒光素酶基因標記細胞或DNA，而熒光技術則采用熒光報告基團（GFP、RFP, Cy5及Cy7等）進行標記。該技術最初是由美國斯坦福大學的科學家采用了世界上最優秀的高性能CCD研發與生產制造商最新研發的背部薄化、背照射冷CCD，配合密閉性非常好的暗箱，使得直接監控活體生物體內的細胞活動和基因行為成為現實。科學家借此可以觀測活體動物體內腫瘤的生長及轉移、感染性疾病發展過程、特定基因的表達等生物學過程。所以說該技術是伴隨著背部薄化、背照射冷CCD的產生而產生，并隨著該CCD技術的發展而發展。由于具有更高量子效率CCD的問世，使活體動物體內光學成像技術具有越來越高的靈敏度，對腫瘤微小轉移灶的檢測靈敏度極高。在該技術誕生后的5、6年間，科學家借此取得了大量的科學成果，發表了幾百篇文獻資料，大部分都是應......閱讀全文
活體動物體內光學成像（九）
關于活體成像系統常見問題解答1. 關于小動物活體成像技術的起源與發展活體動物體內光學成像主要采用生物發光與熒光兩種技術。生物發光是用熒光素酶基因標記細胞或DNA，而熒光技術則采用熒光報告基團（GFP、RFP, Cy5及Cy7等）進行標記。該技術最初是由美國斯坦福大學的科學家采用了世界上最優秀
活體動物體內光學成像（八）
關于技術應用42. 可以用熒光素酶基因標記干細胞嗎？如何標記？ 可以，標記干細胞有幾種方法。一種是標記組成性表達的基因，做成轉基因小鼠，干細胞就被標記了，從此小鼠的骨髓取出造血干細胞，移植到另外一只小鼠的骨髓內，可以用該技術示蹤造血干細胞在體內的增殖和分化及遷徙到全身的過程。另外一種方法是用慢病
活體動物體內光學成像（四）
3. 標記細菌（1） 細菌侵染研究可以用標記好的革蘭氏陽性和陰性細菌侵染活體動物, 觀測其在動物體內的繁殖部位、數量變化及對外界因素的反應。（2） 抗生素藥物利用標記好的細菌在動物體內對藥物的反應，醫藥公司和研究機構可用這種成像技術進行藥物篩選和臨床前動物實驗研究。4. 基因表達和蛋白質相互作用（1
活體動物體內光學成像（五）
3. 底物熒光素(Luciferin)是如何進入小鼠體內的？需要多少？ 熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進入小鼠體內的，約一分鐘就可以擴散到小鼠全身。 大部分發表的文章中，熒光素的濃度是150mg/kg (見下圖)。20克的小鼠需要3毫克的熒光素，價錢約兩到三美元。常用方法是腹腔注射，擴散較慢
活體動物體內光學成像（七）
關于生物發光與熒光及其它技術的比較 34. 熒光檢測與生物發光檢測的優勢與劣勢比較如何？ ?熒光發光需要激發光，但生物體內很多物質在受到激發光激發后，也會發出熒光，產生的非特異性熒光會影響到檢測靈敏度。特別是當發光細胞深藏于組織內部，則需要較高能量的激發光源，也就會產生很強的背景噪音。作為體內報告源
活體動物體內光學成像（十）
3. 關于CCD的“背部薄化、背照射”與“冷”的確切含義是什么？之所以叫冷CCD，是由于CCD的芯片溫度下降到零下70℃或110℃，可以降低噪音，提高檢測的靈敏度。Cryogenic 的制冷技術可以使CCD的溫度達到-70℃到 -110℃，那樣的溫度可以使背照射冷CCD的暗電流減少到可忽略不
活體動物體內光學成像（六）
17. 標記好的細胞的熒光素酶是隨機還是插入固定的位點？ 插入的位點是隨機的，但每一個構建好的細胞株我們都做過詳細的分析，與其母細胞株進行詳細的比較，證明熒光素酶的插入對細胞的各種特性(包括生長周期, 成瘤性等)沒有造成影響。18. 能標記病毒嗎？能標記病毒的某一個基因嗎？ 可以標記病毒，由于病毒在
活體動物體內光學成像（三）
（2） 免疫學與干細胞研究將熒光素酶標記的造血干細胞移植入脾及骨髓，可用于實時觀測活體動物體內干細胞造血過程的早期事件及動力學變化。有研究表明，應用帶有生物發光標記基因的小鼠淋巴細胞，檢測放射及化學藥物治療的效果，尋找在腫瘤骨髓轉移及抗腫瘤免疫治療中復雜的細胞機制。應用可見光活體成像原理標記細胞，建
活體動物體內光學成像（一）
活體動物體內光學成像主要采用生物發光與熒光兩種技術。生物發光是用熒光素酶基因標記細胞或DNA，而熒光技術則采用熒光報告基團（GFP、RFP, Cy5及Cy7等）進行標記。該技術最初是由美國斯坦福大學的科學家采用了世界上最優秀的高性能CCD研發與生產制造商Roper scientific公司最
活體動物體內光學成像（二）
3. 實驗過程 通過分子生物學克隆技術, 應用單克隆細胞技術的篩選，將熒光素酶的基因穩定整合到預期觀察的細胞的染色體內，培養出能穩定表達熒光素酶蛋白的細胞株。典型的成像過程是：小鼠經過麻醉系統被麻醉后放入成像暗箱平臺，軟件控制平臺的升降到一個合適的視野，自動開啟照明燈拍攝第一次背景圖。下一步，自動關