簡單小竅門，將CRISPRCas9基因編輯效率提高5倍
CRISPR-Cas9是用于人類細胞系中敲除基因以發現基因功能的一項首選技術，但其讓基因喪失功能的效率卻有著巨大的差異。 加州大學伯克利分校的研究人員現在找到了一種方法，可在大多數類型的人類細胞中將CRISPR-Cas9切割及讓基因喪失功能的效率提高5倍，使得構建及研究基因敲除細胞系變得更容易，并有潛力讓突變基因喪失功能作為一種人類療法。 科學家們在不斷地發現新基因或它們編碼的蛋白，但要闡明它們在體內或疾病中的作用則難得多。發現這一作用的關鍵在于要讓基因喪失功能，看看當除去它時會發生什么。 盡管CRISPR-Cas9可以加速生成基因敲除細胞系的過程，研究人員有時必須制造并篩查這一遺傳剪刀的許多變體來找到能夠很好地起作用的CRISPR-Cas9。加州大學伯克利分校的研究人員發現進行簡單的調整，可以將這一過程的效率提高許多倍。 關鍵是將不與人類基因組中任何DNA序列匹配的一些DNA短片段，與CRISPR-Cas9蛋白一起......閱讀全文
crispr－cas9基因敲除原理
基本原理：CRISPR簇是一個廣泛存在于細菌和古生菌基因組中的特殊DNA重復序列家族，其序列由一個前導區(Leader)、多個短而高度保守的重復序列區(Repeat)和多個間隔區(Spacer)組成。前導區一般位于CRISPR簇上游，是富含AT長度為300～500bp的區域，被認為可能是CRISPR
crispr－cas9基因敲除原理
基本原理：CRISPR簇是一個廣泛存在于細菌和古生菌基因組中的特殊DNA重復序列家族，其序列由一個前導區(Leader)、多個短而高度保守的重復序列區(Repeat)和多個間隔區(Spacer)組成。前導區一般位于CRISPR簇上游，是富含AT長度為300～500bp的區域，被認為可能是CRISPR
教你學會－CRISPR－Cas9－基因敲除技術
CRISPR/Cas 是進行基因編輯的強大工具，可以對基因進行定點的精確編輯。在向導 RNA（guide RNA， gRNA）和 Cas9 蛋白的參與下，待編輯的細胞基因組 DNA 將被看作病毒或外源 DNA，被精確剪切。一、尋找目的基因的靶標使用在線設計網站 CRISPR direct，如需直接復
CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鑒定方法
基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳比對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了PCR膠濃度、電泳電壓及時間的選擇，今天我們就開始學習CRISPR/Cas9完
利用CRISPR/Cas9技術構建基因敲除大鼠及小鼠模型
國際著名生物學期刊《Nature Biotechnology》(2012年影響因子為32.44)于8月8日在線正式發表了上海市調控生物學重點實驗室、華東師范大學生科院生命醫學研究所劉明耀教授和李大力副教授課題組的最新研究成果。這是繼今年6月該課題組在《Nucleic Acids Rese
如何檢測－crispr－基因敲除成功
CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一種來自細菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫機制。在細菌及古細菌中，CRISPR系統共分成3類，其中Ⅰ類和Ⅲ類需要多種CRISPR相關蛋白（Ca
CRISPR/Cas9抗體—CRISPR/Cas9研究
能夠方便而精確的對DNA和核苷酸序列進行編輯，是科研工作者們長期以來的夢想。CRISPR/Cas9系統的誕生和成熟標志這這一夢想逐漸變為現實。CRISPR/Cas9系統，作為第三代基因編輯技術，它的本質其實是細菌中一種對付諸如病毒等外來DNA的防御系統。此系統的工作原理是 成簇的、規律間隔的短回
浙江大學最新文章利用CRISPR/Cas9技術敲除基因
基因組編輯技術(Genome editing)是通過基因工程表達的序列特異的核酸酶對基因組進行切割，實現基因定點敲除、敲入等修飾，在基礎生物學領域的反向遺傳學研究、農業領域的種質改良和醫學領域的基因治療等方面有重要的應用價值。 來自浙江大學生科院的研究人員在 Golden-gate 克隆技術的
CRISPR/Cas9條件性基因敲除鼠的鑒定手法
基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳比對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鑒定，今天我們就開始學習CRISPR/
廣州生物院利用CRISPR/Cas9技術建立基因敲除克隆豬
中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院研究員、吉林大學教授賴良學博士的研究團隊利用最新的CRISPR/Cas9技術成功地培育出兩種基因敲除克隆小型豬，即酪氨酸酶基因敲除豬和PARK2和PINK1雙基因敲除豬，建立了人類白化病和帕金森綜合征兩種豬模型，該研究成果于10月2日在線發表在Cellular
CRISPR專家發表CRISPR/Cas9綜述
CRISPR技術的確在科學界掀起了基因組編輯的狂潮。在Pubmed中快速檢索“CRISPR”，目前已有1400多項結果。也相繼有專家為該技術撰寫了綜述論文，例如：Science綜述：CRISPR-Cas9系統的歷史和未來；北大魏文勝最新發表CRISPR綜述。 最近，來自美國加州大學伯克利分校和
利用CRISPR/CAS9對人類干細胞系進行可誘導基因敲除
近日，來自美國威斯康星大學的華人科學家Su-Chun Zhang在國際學術期刊Cell Stem Cell發表了一項最新研究進展，他們利用CRISPR/CAS9技術實現了對人類干細胞系進行可誘導基因敲除，這一方法的成功對于研究基因在干細胞及分化不同階段中的作用具有重要推動作用。 對基因表達進行
用CRISPR/cas9編輯精原細胞基因
利用CRISPR/Cas9 系統對胚胎進行基因編輯，可有效地產生具有靶向基因組修飾的生物體。三月十二日在Cell子刊《Cell Reports》發表的一項研究中，來自德克薩斯大學西南醫學中心、芝加哥大學和猶他大學等處的研究人員，用CRISPR / cas9技術對大鼠的精原細胞進行基因編輯，為在大
CRISPR－技術進行細胞－TP53－基因敲除
實驗原理 TP53 是重要的抑癌基因。在多種腫瘤中都能發現 TP53 基因突變及功能喪失。我們將針對 TP53 基因設計的靶點構建到 pCas9/gRNA1 載體，轉染 293T 細胞，構建了 TP53 基因敲除 293T 細胞系。 1、本實驗基因敲除原理：pCas9/gRNA1 載體表達
吳志堅發布CRISPR重要成果：CRISPR敲除治療疾病
美國國立衛生研究院眼科研究所的一組研究人員報道了最新成果：他們通過一種病毒載體直接向眼睛輸送了基于CRISPR-as9的治療元件，成功在視網膜變性小鼠中阻止了視網膜色素變性。這一研究成果公布在3月14日的Nature Communications雜志上，文章的通訊作者是美國國立衛生研究院眼科研究
CRISPR/Cas9－技術介紹
優秀的基因編輯技術CRISPR/Cas9基因編輯技術深受研究人員的喜愛，那么它為什么如此優秀呢？CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromicrepeats）規律成簇間隔短回文重復；Cas9（CRISPR associated nuc
PNAS：利用RNA控制CRISPR/Cas9基因編輯
在過去的幾年里，研究人員找到了一種方法利用天然存在的細菌免疫系統CRISPR/Cas9來失活或糾正任何生物體內的特定基因。然而，CRISPR/Cas9持續地發揮基因編輯活性，帶來了額外編輯不必要位點的風險。 現在，來自加州大學圣地亞哥醫學院、Ludwig癌癥研究所和艾希司制藥公司（Isis P
基因編輯CRISPR/Cas9新技術路在何方？
CRISPR/Cas9這項新技術使人們能更精準地對DNA代碼進行控制，引發了遺傳學和細胞生物學領域的革新，科學家們對它寄予厚望，希望借助它的力量，治療包括癌癥在內的疾病并進一步解開人類細胞身上籠罩的謎團。 但這一基因編輯技術也引發了科學家們的憂慮。據美國趣味科學網站報道，有科學家擔心，這一新工
頂級期刊：用光控制CRISPR/Cas9基因編輯
一段時間以來，科學家們一直都在嘗試操縱基因。最近，美國匹茲堡大學的Alexander Deiters就發現了一種方式，以更高的精度來控制這個過程。他采用的是光。Deiters及其研究團隊首次實現了這一技術突破，他們將相關研究結果發表在最近的化學領域頂級期刊《美國化學學會雜志》（Journal o
CRISPR/Cas9：基因編輯的歷史與發展
CRISPR/Cas系統是細菌和古菌特有的一種天然防御系統，用于抵抗病毒或外源性質粒的侵害。當外源基因入侵時，該防御系統的 CRISPR 序列會表達與入侵基因組序列相識別的 RNA，然后 CRISPR 相關酶(Cas)在序列識別處切割外源基因組DNA，從而達到防御目的。根據Cas蛋白的特點，可將CR
如何在構建敲除細胞株時利用好CRISPR/Cas9技術？
從 2013 年 1 月份開始到現在，近 2 年的時間里，CRISPR/Cas9 技術的應用領域被來自全球優秀的科學家們不斷的擴大。其中包括基因敲除，定點突變，定點整合，基因沉默，基因定位和 CHIP 等多個領域，而且這個技術的應用領域還在不斷的被擴大。吉銳生物基于多年的基因重組經驗（系統的研究過
如何在構建敲除細胞株時利用好CRISPR/Cas9技術？
從2013年1月份開始到現在，近2年的時間里，CRISPR/Cas9技術的應用領域被來自全球優秀的科學家們不斷的擴大。其中包括基因敲除，定點突變，定點整合，基因沉默，基因定位和CHIP等多個領域，而且這個技術的應用領域還在不斷的被擴大。筆者基于多年的基因重組經驗（系統的研究過ZFN / IOS /
如何在構建敲除細胞株時利用好CRISPR/Cas9技術？
從2013年1月份開始到現在，近2年的時間里，CRISPR/Cas9技術的應用領域被來自全球優秀的科學家們不斷的擴大。其中包括基因敲除，定點突變，定點整合，基因沉默，基因定位和CHIP等多個領域，而且這個技術的應用領域還在不斷的被擴大。 ?筆者基于多年的基因重組經驗（系統的研究過ZFN / IOS
什么是CRISPR/Cas9技術
CRISPR/Cas9系統的原理是利用gRNA特異性識別靶序列，并引導Cas9核酸內切酶對靶序列的PAM上游進行切割，從而造成靶位點DNA雙鏈斷裂，隨之利用細胞的非同源末端連接（NHEJ）或同源重組（HDR）的方式對切割位點進行修復，實現DNA水平的基因敲除、敲入或點突變。
什么是CRISPR/Cas9技術
CRISPR/Cas9系統的原理是利用gRNA特異性識別靶序列，并引導Cas9核酸內切酶對靶序列的PAM上游進行切割，從而造成靶位點DNA雙鏈斷裂，隨之利用細胞的非同源末端連接（NHEJ）或同源重組（HDR）的方式對切割位點進行修復，實現DNA水平的基因敲除、敲入或點突變。
什么是CRISPR/CAS9技術
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是最新出現的一種由RNA指導的Cas9核酸酶對靶向基因進行編輯的技術。CRISPR/Cas9是細菌和古細菌為應對病毒和質粒不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機制。
什么是CRISPR/CAS9技術
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是最新出現的一種由RNA指導的Cas9核酸酶對靶向基因進行編輯的技術。CRISPR/Cas9是細菌和古細菌為應對病毒和質粒不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機制。
檢測CRISPR/Cas9基因編輯系統的副作用
目前，弗吉尼亞大學醫學院的研究人員設計出一種方法，檢測風靡科學界的CRISPR/Cas9基因編輯系統中意想不到的副作用。相關研究結果發表在最近的《Nature Biotechnology》。 稱為CRISPR的基因打靶系統，可讓我們編輯基因組中特定靶位點的遺傳信息。這種新方法揭示的系統，有可能
全新CRISPR/Cas9基因編輯系統助力肝癌建模
最近發表在開放獲取期刊《Genome Medicine》上的一項研究，報道了一種建立肝癌小鼠模型的新方法，即利用CRISPR/Cas9系統快速將癌癥相關基因敲入小鼠的DNA中。 研究的通訊作者、麻省大學醫學院RNA療法研究所的王文說：“為了更好地理解腫瘤生物學、開展臨床前研究以及為病人找到潛在
湖北農科院用CRISPR制備基因敲除克隆豬
來自湖北省農科院畜牧獸醫研究所、河南科技大學和中科院水生生物研究所的研究人員，用CRISPR/Cas9系統和Cre/LoxP，敲除了豬初生細胞中肌生成抑制蛋白（MSTN）的一個等位基因，制備了無選擇標記的MSTN基因敲除克隆豬。相關研究結果發表在8月17日的《Scientific Reports