GFP抗體—綠色熒光蛋白的單克隆和多克隆標簽抗體
GFP（Green Fluorescent Protein，綠色螢光蛋白）是由下村脩等人在1962年在一種學名Aequorea victoria的水母中發現。其基因所產生的蛋白質，在藍色波長范圍的光線激發下，會發出綠色螢光。GFP標簽可位于蛋白質的C端或N端，該系統已廣泛 應用于各種細胞類型，包括細菌、酵母和哺乳動物細胞等，相應的GFP標簽抗體也被廣泛應用。一般來說，GFP抗體不僅可以檢測GFP或其適當的突變體，也可以檢測和GFP或其適當的突變體融合表達蛋白的表達、細胞內定位，以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達蛋白等。如何選擇合適和最具性價比的GFP抗體？我們在選擇一個標簽抗體時，主要根據自己實驗應用上的需要。這里需要考慮的因素包括，GFP抗體的應用檢測類型、GFP抗體的克隆性及制備來源等。 比如 該GFP抗體是否能用于免疫熒光IF的檢測？是否可以用于Western Bloting和免疫沉淀IP實驗？是否需要特異......閱讀全文
GFP抗體—綠色熒光蛋白的單克隆和多克隆標簽抗體
GFP（Green Fluorescent Protein，綠色螢光蛋白）是由下村脩等人在1962年在一種學名Aequorea victoria的水母中發現。其基因所產生的蛋白質，在藍色波長范圍的光線激發下，會發出綠色螢光。GFP標簽可位于蛋白質的C端或N端，該系統已廣泛 應用于各種細胞
Myc抗體推薦—高品質Myc標簽單克隆抗體
隨著蛋白質組學的迅猛發展，重組蛋白質的使用在近年來大大增加。重組雜合體含有一個親和標簽如GST、Myc、His等，可用于輔助目標蛋白的純化，這已經被廣泛使用。利用融合蛋白有助于重組蛋白純化和檢測的這個有點被廣泛認可。Myc標簽相當于人的c-Myc 410-419位肽段（序列為：EQKLISEED
T克隆綠色熒光蛋白（GFP）基因實驗
【原理】經TaqDNA聚合酶擴增后的PCR產物末端都帶有單個A。正是基于這一原理，pGEM-T質粒經EcoRV切成平端后，在開口端加上一個T制成T載體，一方面避免了自身環化，另一方面由于T-A互補，從而提高了T載體與PCR產物之間的連接效率。由于T-A克隆只需純化PCR產物，因而操作較為簡便。pGE
單克隆抗體和多克隆抗體有何區別
單克隆抗體的優點與局限性：單克隆抗體和多克隆抗體各有其優點和局限性，只有對它們有全面的了解，才能根據不同應用領域的要求，正確的選擇和應用。1.單克隆抗體的優點：（1）雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代，只要不發生細胞株的基因突變，就可以不斷的生產高特異性、高均一性的抗體。（2）可以用相對不純的抗原
單克隆抗體
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單克隆抗體培養—含有單克隆抗體的腹水制備
實驗步驟材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)裸 鼠 ， 6?8 周齡，無 特 殊 病 原（SPF)，或者是同基因型宿主（注射小鼠-小鼠雜交瘤時）姥 鮫 焼（Pristane， 2,6，10，14-四甲基十五焼； Aldrich 公司提供）雜 交 瘤（單 元 1.3)添 加 10 mmol/L H
β內酰胺酶單克隆抗體和多克隆抗體的制備
β-內酰胺酶單克隆抗體和多克隆抗體的制備 目前，在我國奶牛養殖業中，青霉素和頭孢菌素等β-內酰胺類抗生素對奶牛乳房炎等疾病的控制起著十分重要的作用。由于一些奶牛養殖商戶濫用抗生素以及未嚴格遵守休藥期，致使牛奶中抗生素殘留超標，乳中殘留的抗生素嚴重危害食品安全和人體健康。我國政府對超過一定限
單克隆抗體的純化實驗——單克隆抗體的純化實驗
1~5 ml/min?的速度上樣于蛋白A-Sepharose柱，用Tris緩沖液洗柱子直至所有的未結合的蛋白都被洗脫，采用A280監測。?3. ?依次用2~3倍柱床體積的檸檬酸緩沖液、乙酸緩沖液液以及甘氨酸·Cl緩沖液連續洗脫結合蛋白，洗脫下的蛋白直接接入裝有中和緩沖液的管中，中和緩沖液的體積應為所
多羥基反應單克隆抗體的鑒定、生產和使用
所有形式的親和層析法都需要兩個組分間形成特異性相互作用，通過這種作用可以純化其中一種組分。免疫親和層析即利用抗原和抗體的特異性相互作用，是遵循親和層析原理的一個分類 [綜述見 Subramanian(2002)]。事實上，免疫親和層析是免疫沉淀程序規模放大的拓展應用，不同的部分在于, 層析后需要回收
單克隆抗體的克隆方法
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過
β內酰胺酶單克隆抗體和多克隆抗體的制備（上）
β-內酰胺酶單克隆抗體和多克隆抗體的制備目前，在我國奶牛養殖業中，青霉素和頭孢菌素等β-內酰胺類抗生素對奶牛乳房炎等疾病的控制起著十分重要的作用。由于一些奶牛養殖商戶濫用抗生素以及未嚴格遵守休藥期，致使牛奶中抗生素殘留超標，乳中殘留的抗生素嚴重危害食品安全和人體健康。我國政府對超過一定限量抗生素的原
β內酰胺酶單克隆抗體和多克隆抗體的制備（下）
1.7 抗體純化1.7.1 多克隆抗體的純化采用辛酸-飽和硫酸銨法純化抗β-內酰胺酶的兔血清，2次滴加飽和硫酸銨的最終體積分數分別為50%和40%。將沉淀用少量PBS溶解后轉入透析袋中，用PBS溶液透析48h，利用紫外分析法檢測透析液直至透析完全。1.7.2 單克隆抗體的純化采用PEG6000沉淀法
單克隆抗體與多克隆抗體的功能差異
單克隆抗體和多克隆抗體的最大的區別在于特異性上的差別。因此實驗中如果對抗體的特異性有一定的需求，但并不是特別強調的話，可以選擇定制多克隆抗體，這樣的實驗一般包含Western-Blot(WB)，IP等。如果您需要抗體用于流式細胞術時，那么最好選擇單克隆抗體。另外，在研究很多新的蛋白時，并不確定新蛋白
單克隆抗體技術
實驗概要顯微鏡下觀察血片或骨髓片，找出異常細胞。實驗原理B淋巴細胞能夠產生抗體，但在體外不能進行無限分裂；而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代，但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后，用一特殊選擇培養基(HAT)阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路，而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存，且既能產
單克隆抗體技術
實驗原理 B淋巴細胞能夠產生抗體，但在體外不能進行無限分裂；而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代，但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后，用一特殊選擇培養 基（HAT）阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路，而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存，且既能產生抗體，又能無限增殖，并以此生產抗
單克隆抗體技術
實驗概要顯微鏡下觀察血片或骨髓片，找出異常細胞。實驗原理B淋巴細胞能夠產生抗體，但在體外不能進行無限分裂；而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代，但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后，用一特殊選擇培養基(HAT)阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路，而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存，且既能產
單克隆抗體技術：抗體檢測
用檢測抗體的方法從雜交細胞中篩選出生產指定抗體的雜交株是很重要的。檢測抗體的方法很多，從沉淀反應到放射免疫測定。由于細胞培養液中的抗體濃度通常是很低的，而且傳統的檢測方法多是以多價抗原與多克隆抗血清相反應。雜交瘤產生的抗體則是單克隆的，所以并不是每項方法都能適用。一定要選擇敏感的、快速的、一次又能檢
單克隆抗體的優點
(1)雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代，只要不發生細胞株的基因突變，就可以不斷地生產高特異性、高均一性的抗體。(2)可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。(3)由于可能得到“無限量”的均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA和ELISA等。(4)由于單克
單克隆抗體的優點
(1)雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代，只要不發生細胞株的基因突變，就可以不斷地生產高特異性、高均一性的抗體。(2)可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。(3)由于可能得到“無限量”的均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA和ELISA等。(4)由于單克
單克隆抗體的制備
實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握），然后對理想的雜交瘤細胞加
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡便。1、二氧化硅吸附法新鮮采集的腹水（或凍存的腹水），2000r/min 15分鐘，除去細胞成分（或
單克隆抗體的簡介
1975年分子生物學家G.J.F.克勒和C.米爾斯坦在自然雜交技術的基礎上，創建立雜交瘤技術，他們把可在體外培養和大量增殖的小鼠骨髓瘤細胞與經抗原免疫后的純系小鼠B細胞融合，成為雜交細胞系，既具有瘤細胞易于在體外無限增殖的特性，又具有抗體形成細胞的合成和分泌特異性抗體的特點。將這種雜交瘤作單個細
單克隆抗體的概述
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。[1] 它通常采用雜交瘤技術來制備，將具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群，從根本上解決了在抗體制備中長期存在的特異性和可重復性問題，可直接用于疾病的診斷、預防、治療以及免疫機制的研究。
單克隆抗體的定義
由單一克隆B細胞針對單一抗原表位產生的均一性的高特異性的抗體稱為單克隆抗體。
單克隆抗體的制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩
單克隆抗體的概念
單克隆抗體單克隆抗體（Monoclonal Antibody，McAb）即單個B淋巴細胞克隆所分泌的抗體。抗體主要由機體的B淋巴細胞合成，每個B淋巴細胞有合成一種抗體的遺傳基因。當機體受抗原刺激時，抗原分子上的許多決定簇分別激活各個具有不同基因的B細胞。被激活的B細胞分裂增殖形成該細胞的子孫，即克隆
單克隆抗體的定義
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備,雜交瘤(hybridoma)抗體技術是在細胞融合技術的基礎上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群,可制備針
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化?在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡便。?1、二氧化硅吸附法?新鮮采集的腹水（或凍存的腹水），2000r/min 15分鐘，除去細胞成分（
單克隆抗體的優點
(1)雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代，只要不發生細胞株的基因突變，就可以不斷地生產高特異性、高均一性的抗體。 (2)可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。 (3)由于可能得到“無限量”的均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA和ELISA等。
單克隆抗體的純化
實驗方法原理 葡萄球菌蛋白 A 可以結合數種哺乳類動物的免疫球蛋白。蛋白質 A-瓊脂糖介質可以結合部分 IgM、大部分 IgGl 及幾乎所有的 IgG2a、IgG2b 和 IgG3 MAb。實驗材料 腹水（單克隆抗體）試劑、試劑盒 蛋白 A-瓊脂糖 CL-4BTr1s 緩沖液 pH 8.6檸檬酸鹽緩