3’RACE實驗心得
引子：從06年12月份開始，斷斷續續做了一個多月的3’RACE，有了一些心得和體會。期間看了很多前輩們分享的經驗，受益匪淺。在這里，我就自己的經歷略作總結，希望能給像我一樣的新人們有點啟示，少走些彎路，不當之處歡迎指正。一、試劑盒的選擇：3’RACE從原理上就能明白，它比5’RACE 要容易得多，所以并不一定需要用進口試劑盒。原來準備用Takara 3’RACE的試劑盒，可是看了一下它的原理和內容，覺得挺挫的，自己DIY可能效果更好一些呢。于是根據 Invitrogen GeneRacer Kit 自己DIY了，效果不錯。找來了：Invitrogen的SuperScript III反轉酶，TAKaRa LA Taq酶、Pyrobest高保真酶。并根據 Invitrogen GeneRacer Kit，自己合成了3’接頭引物(侵犯了人家知識產權)：3’接頭：3'ap 5'-GCTGTCAACGATACGCTACGT......閱讀全文
MTT實驗心得
MTT實驗是檢測細胞活力的實驗方法，由于細胞活力與細胞數呈正相關，因此也常常用來檢測細胞的增殖情況。MTT的原理：活細胞有琥珀酸脫氫酶，將MTT還原成棕褐色沉淀。由于一般介紹園子里已經很多，筆者將自己的心得按照實驗流程與大家交流交流。1、培養好細胞點板。養細胞沒啥好說的，如果不知道細胞如何養，那就看
3’RACE－實驗心得
引子：從06年12月份開始，斷斷續續做了一個多月的3’RACE，有了一些心得和體會。期間看了很多前輩們分享的經驗，受益匪淺。在這里，我就自己的經歷略作總結，希望能給像我一樣的新人們有點啟示，少走些彎路，不當之處歡迎指正。一、試劑盒的選擇：3’RACE從原理上就能明白，它比5’RACE 要容易得多，所
Realtime－PCR實驗心得和RNA提取心得
并不是所有的實驗都可以做real－time的，技術路線要選好當你的基因表達量少或有些不表達具體就是做普通pcr跑膠條帶比較弱，不是很亮的情況下個人覺得最好不要選擇real，不容易做好，特別是融解曲線用sbgr green染料做的話，引物設計時擴增片斷最好小于250bp，太長了不好擴預實驗先rt－pc
MTT實驗兩年心得
MTT實驗是檢測細胞活力的實驗方法，由于細胞活力與細胞數呈正相關，因此也常常用來檢測細胞的增殖情況。MTT的原理：活細胞有琥珀酸脫氫酶，將MTT還原成棕褐色沉淀。由于一般介紹園子里已經很多，筆者將自己的心得按照實驗流程與大家交流交流。1、培養好細胞點板。養細胞沒啥好說的，如果不知道細胞如何養，那就看
關于藥物分析降解實驗心得
今天我們說說5種條件下的降解實驗及深入的討論降解實驗，是否可以參照破壞試驗?破壞試驗的目的是什么?實驗條件的設置要注意什么?等等問題。 降解實驗也就是通過高溫、酸、堿、氧化等實驗條件對其產品進行產物降解，也屬于破壞性實驗，主要看都能產生哪些雜質。 1、酸降解試 一般選擇0.1N的鹽酸，在
熒光原位雜交技術實驗心得
熒光原位雜交技術（ fluorescence in situ Hybridization,FISH）是一種非放射性原位雜交方法，用特殊的熒光素標記核酸探針，在細胞或組織切片標本上進行雜交，以檢測細胞內 DNA 或 RNA 特定序列存在與否。FISH 實驗操作與用非熒光標記探針的原位雜交基本相似。在組
dna的制備實驗的心得體會
DNA制備即從生命體中提取DNA，需要注意到問題主要有以下幾個方面：（1）新鮮樣品中DNA含量相對較高且完整，能用的時候盡量用新鮮的；（2）取樣量要與抽提試劑的量相對應；（3）離心的轉速要適當；（4）操作時間不宜太長；（5）提取完成后最好用酸性緩沖液低溫保存。
ＷＥＳＴＥＲＮ－ＢＬＯＴＴＩＮＧ心得
蛋白提取：１．??總蛋白提取（胞膜，胞漿，胞核）：?組織勻漿后,15000g, 4度, 20分鐘后,取上清.Buffer:NP40 750ul, 脫氧膽酸鈉0.5克, SDS 0.1克, 加1*PBS 至100ml. 再加入PMSF(7.4mg/ml) 0.1ml. (現用現加)7.4mg/ml P
【銳賽小課堂】熒光原位雜交技術實驗心得
銳賽小課堂1221-157 熒光原位雜交技術（ fluorescence in situ Hybridization,FISH）是一種非放射性原位雜交方法，用特殊的熒光素標記核酸探針，在細胞或組織切片標本上進行雜交，以檢測細胞內 DNA 或 RNA 特定序列存在與否。 FISH 實驗
酶切反應心得
一、 建立一個標準的酶切反應目前大多數研究者遵循一條規則，即10個單位的內切酶可以切割1μg不同來源和純度的DNA。通常，一個50μl的反應體系中，1μl的酶在1X NEBuffer終濃度及相應溫度條件下反應1小時即可降解1μg已純化好的DNA。如果加入更多的酶，則可相應縮短反應時間；如果減少酶的用
核酸抽提心得
最糟糕的心態 - 實驗失敗了，抱怨試劑不好。實驗人員本來是應該擁有修正主義、機會主義、懷疑論等諸多“不完美的”意識，所以一定要用“完美的”自我批評意識來平衡。我為什么沒有一雙慧眼選擇可靠的供應商？我為什么不做預實驗檢測所購試劑？最糟糕的知識 - RNase A 的作用。RNase A 是內切酶，內切
western－blot試驗心得
前兩天做了一個western blot,現在把試驗中的一點小小的體會發上來，與大家交流，希望大家多多指點！1 本實驗室采用的脫脂奶粉已經存放了近兩年了，雖然是四攝氏度保存，但是其封閉質量還是難以保證的。所以本人的試驗結果中出現了小斑點。建議最好使用BSA或專用的脫脂奶粉進行封閉，雖然貴點，但還是有個
ChIP－新手心得
最近有不少戰友在做ChIP實驗，希望我的一點經驗對大家有幫助（本貼不談實驗步驟，最后我會附件一份說明書，有詳細步驟，另外建議像我一樣的新手用試劑盒，避免不必要的麻煩）一、原理轉錄從基因的啟動子區開始，由一系列的轉錄因子結合到基因的啟動子區，通用轉錄因子結合在基本啟動子區起始轉錄，而這個過程對基因的轉
光鏡與電鏡技術我的一點實驗心得
? 一般生物體是不透明的，不能直接在顯微鏡下觀察其內部結構?? ? ? ? 經過特殊的手段，減少體積和厚度，使光線能透過。?? ? ? ? 基本原則：保持其原有的組織結構和相互關系。? ? ? ? 制片方法的種類?? ? ? ? 切片法? ? ? ? 石蠟切片法、冰凍切片法等? ? ? ? 優點：組
色譜柱保養心得
今天有人問我，《色譜柱使用記錄》表里樣品進樣針數后面為什么還有個累計進樣針數？ 套用哲學觀點，任何物質都是有壽命的，大到宇宙，小到原子，但是不同的物質壽命是不一樣的。 每一根色譜柱都有一個大致的進樣針數壽命，理論上可以有一個規定，達到進樣多少針，就強制報廢。不過好像并沒有這樣的規定，那么也可
我作NORTHERN的心得
我們試驗室作NORTHERN的一些總結，歡迎指正，謝謝。Northern雜交準備物品：50ml量筒1個 100ml量筒1個 300ml燒杯1個 250ml 燒杯1個 250ml的錐形瓶1個 10ml 離心管2個 大小盤各1個 鑷子1把 剪刀1把 DEPC水500ml 2，瓶玻璃棒1根 電泳槽、轉膜槽
色譜柱保養心得
每一根色譜柱都有一個大致的進樣針數壽命，理論上可以有一個規定，達到進樣多少針，就強制報廢。不過好像并沒有這樣的規定，那么也可以作為一個參考，當色譜柱的柱性能參數（就是常說的理論塔板數、分離度、拖尾因子等等）不達標時，參照進樣針數判斷是柱子壽命到了，屬于不可逆因素，只能換柱子。還是其它原因，如流動
心得安臨床新用
? 心得安系β－腎上腺素能受體阻滯劑，用于臨床已有40余年，以往主要用于治療心律失常、心律增快、高血壓、心肌梗死、心絞痛和嗜鉻細胞瘤等。 ??? 經臨床實踐，發現該藥的還有其它用途，現分別介紹如下。??? 1.甲亢??? 心得安治療甲亢早有報道。因它能阻斷β－受體，用藥后可使心律減慢、心肌收縮力和房
關于實驗室數據可靠性的一些心得
關于實驗室數據可靠性的一些心得 ???
5S實驗室管理心得體會分享
5S的起源5S起源于日本的現代企業管理模式，包括:整理（Sort）、整頓（Straighten）、清掃（Shine）、清潔（Standardize）和素養（Sustain），因為日語的羅馬拼音均以“S”開頭，英語也是，所以將這種管理模式簡稱為5S管理。整理（Sort）整理就是區分需要和不需要的物品，
我的實戰酶切心得
幾個小技巧：1：在做多個同類酶切反應預混液時，水要多加1-5微升(當然不能超過預混液總體積的5%)，以防止最后一管酶液不夠的尷尬局面.2:記住所用酶的特性，不光體現BUFFER的選擇上。也體現記住不同限制酶穩定性上。比如BamHI5小時內穩定（37度），而BglII16小時內都保留100%的活性；那
胃下垂辨證辨病心得
? 胃下垂屬“胃緩、胃痛”等范疇，病因或為飲食不節、暴飲暴食、過度思慮等，日久損傷脾胃，中氣下陷，胃肌無力，致使胃下垂；或勞倦內傷，感受外邪等，使胃失和降，納化異常，漸漸形體虛損，脾虛下陷，而導致胃下垂；或為情志內傷，肝氣犯脾，升運無力，導致胃下垂；或為常因飽食，食后劇烈運動，或開車上下顛簸，久
難治性腹水的治療心得
? 腹水的形成是腹腔內液體的產生和吸收失去動態平衡的結果。引起腹水的病因很多，無論是腹水呈漏出性還是滲出性，均可因多種疾病而引起，為了減輕大量腹水引起的癥狀(包括腹脹、呼吸受限等)，可采取必要的對癥治療。以下是本人臨床中總結的治療腹水的經驗。??? 一、1克Na可潴留200ml的水，故出現腹水時，應
阿司匹林的臨床應用心得
? 阿司匹林??? 阿司匹林與青霉素、安定一起被認為是醫藥史上三大經典杰作。我們老祖宗早就發現嚼柳樹皮可以退燒和止痛，而到了19世紀，歐洲科學家發現柳樹皮的有效成分是水楊酸，成功提取出來但是對胃**太大。1897年，德國化學家霍夫曼成功將水楊酸乙酰化合成為乙酰水楊酸，保持了原來藥效但副作用大大減
色譜柱維護保養心得
如何清洗和保存反相色譜柱？怎樣處理新買來的色譜柱？用水來沖洗色譜柱有什么后果？分析結束后如何沖洗？這些問題是HPLC分析人員常常要面對的。本文就這些問題介紹一些色譜柱的維護和保養經驗。 新色譜柱的處理 對于新購買的色譜柱，首先應該做些什么呢？幾乎所有的色譜柱在出廠時都保存在它們測試時的
細胞增殖檢測：MTT法心得
MTT實驗是檢測細胞活力的實驗方法，由于細胞活力與細胞數呈正相關，因此也常常用來檢測細胞的增殖情況。一、MTT的原理活細胞有琥珀酸脫氫酶，將MTT還原成棕褐色沉淀。由于一般介紹園子里已經很多，筆者將自己的心得按照實驗流程與大家交流交流。二、MTT法檢測細胞增殖實驗的注意事項1、培養好細胞點板養細胞沒
相色譜柱的使用心得
高效液相色譜儀是進行定量分析，雜質檢查等分析工作中主要的精密儀器，色譜柱是液相色譜儀的zui核心部件。在這里，介紹一下依利特液相色譜柱使用中的注意事項及使用心得。 一、柱頭類型和不銹鋼毛細管接頭的匹配 依利特液相色譜柱是消耗品，不是儀器原配的情況很多，如果接頭和柱頭深度匹配將會產生漏液或者死體積
原子吸收儀器使用心得
環境篇： 1、原子吸收儀器應該放置在單獨的實驗室內（不與其它儀器混放）； 2、儀器上方有良好的排風裝置； 3、原子吸收儀器室不得放置有機試劑； 4、實驗室應具備獨立的鋼瓶室，并具備相應的防爆設施； 5、穩定的220V電源（220V+-10%，無波動），避免與大型用電設備使用同相電源；
關于心得安的簡介
中文名稱：普萘洛爾 中文別名：1-異丙基氨基-3-(萘-1-氧基)丙-2-醇；心得安 英文名稱：Propranolol CAS號：525-66-6 分子式：C16H21NO2 分子量：259.343 精確質量：259.15700 PSA：41.49000 LogP：2.96840
原子吸收儀器使用心得
環境篇： 1、原子吸收儀器應該放置在單獨的實驗室內（不與其它儀器混放）； 2、儀器上方有良好的排風裝置； 3、原子吸收儀器室不得放置有機試劑； 4、實驗室應具備獨立的鋼瓶室，并具備相應的防爆設施； 5、穩定的220V電源（220V+-