哈佛大學實驗室發現CRISPR／Cas9存在嚴重脫靶效應
哈佛大學David R Liu實驗室利用體外篩選和高通量測序檢測CRISPR/Cas9的脫靶，針對CLTA基因的四個不同靶位點共設計了八條不同序列的gRNA，即每個靶位點有兩條gRNA，結果發現，四個靶位點均存在脫靶現象，脫靶效率最高可達 84%，同時CRISPR/Cas9的特異性僅與gRNA配對的靠近PAM處7-12bp堿基相關，CRISPR/Cas9存在嚴重的脫靶效應。該研究成果發表在《Nature Biotechnology》雜志上。 CRISPR/Cas9是一種來源于細菌獲得性免疫的由RNA指導Cas9蛋白對靶向基因進行修飾的技術。有文獻報道，CRISPR/Cas9的切割是通過向導RNA(gRNA)與基因組位置之間20bp堿基的配對，且配對堿基的5′端需要有PAM結構(NGG)，再引導Cas9作用實現的，但是CRISPR/Cas9與靶位點識別的特異性主要依賴于gRNA與靠近PAM處10-12bp堿基......閱讀全文
基因測序技術升級檢測CRISPR脫靶效應
政府主導致效率低 2014年末，習近平總書記前往鎮江視察時發表過如下言論：“一些大醫院始終處于‘戰時狀態’的狀況需要改觀。”新醫改啟動至今已是第七年，但因患者在大醫院高度擁堵造成的看病難、看病貴卻絲毫不見緩解，反而有所加劇，習總書記所指出的，正是這一輪醫療衛生體制改革最亟需解決的問題。 相關
CRISPR實驗指南：如何檢測CRISPR脫靶突變（一）
張鋒實驗室的一位研究生：Winston Yan的項目就是利用CRISPR-Cas9基因組編輯系統的一個突變來敲除調控小鼠膽固醇的基因。“最終的目的是為治療應用鋪平道路，”Yan說，他最近完成了他的研究生工作，同時也第一次遇到CRISPR脫靶效應的問題。 CRISPR能幫助研究人員快速有效地對基
CRISPR導致突變－從而大范圍“脫靶”？
CRISPR基因編輯會導致數以百計意想不到的突變？5月30日，《自然-方法》刊登的一篇通信文章顯示，來自美國哥倫比亞大學等研究機構的科學家確認通過CRISPR基因編輯技術成功修復了導致兩只小鼠失明的基因后，經全基因組測序發現小鼠體內有超過1500個單核苷酸發生突變，并有百個以上的位點發生發生了大片段
CRISPR技術脫靶效應有了解決之道
CRISPR基因編輯技術廣受爭議的最大副作用——脫靶效應有了解決辦法。據物理學家組織網12日報道，CRISPR-Cas9技術發明人之一詹妮弗·杜德納參與的研究團隊證實，抗CRISPR蛋白能將CRISPR導致的脫靶效應降低四分之一，其中一種名叫“AcrllA4”的蛋白甚至能將脫靶效應發生率減少4倍
CRISPR女王最新發現：一種抗CRISPR蛋白能減少脫靶效應
去年12月，兩組科學家發表了幾種可以阻斷CRISPR-Cas9活性蛋白質的重要發現，而7月12日，研究人員又再次指出，利用其中的一種抗CRISPR蛋白能減少Cas9介導的人類細胞基因組編輯中的脫靶效應。 這一研究成果公布在Science Advances雜志上，由美國加州大學伯克利分校Jenn
CRISPR女王最新發現：一種抗CRISPR蛋白能減少脫靶效應
去年12月，兩組科學家發表了幾種可以阻斷CRISPR-Cas9活性蛋白質的重要發現，而7月12日，研究人員又再次指出，利用其中的一種抗CRISPR蛋白能減少Cas9介導的人類細胞基因組編輯中的脫靶效應。 這一研究成果公布在Science Advances雜志上，由美國加州大學伯克利分校Je
Nature－Methods：全面檢測CRISPR脫靶效應的新策略
CRISPR/Cas9基因組編輯目前正應用得如火如荼，但若要轉化到臨床應用，準確檢測脫靶效應則是必不可少的。近日，麻省總醫院的研究人員開發出一種新策略，能夠鑒定全基因組范圍的CRISPR/Cas9脫靶突變。 之前，在全基因組范圍鑒定脫靶效應的細胞方法也時有報道，但這些方法可能錯過低頻率的脫靶突
證實CRISPR/Cpf1基因組編輯幾乎沒有脫靶效應
作為CRISPR基因組編輯的新工具，Cpf1因其不同于Cas9的性質而引起人們的廣泛關注。它只需要單個RNA，即crRNA（CRISPR RNA），因而組裝更加簡單；它的交錯切割模式可能促進利用所需的序列替換現有的DNA序列；它識別富含胸腺嘧啶的DNA序列，而且相對于Cas9識別的富含鳥嘌呤的序
基因編輯新進展:－關鍵酶消除CRISPRCas技術脫靶效應
近來全球興起的CRISPR-Cas編輯技術是基于細菌和古細菌天然防御機制的一項技術。與真核生物體內的RNA干擾過程極為相似，CRISPR-Cas 技術能夠特異性切割核酸片段，不過該技術也有可能發生非特異性切割，引起基因組非靶向位點的突變，這一問題越來越受到科研人員的關注。 CRISPR
完美基因編輯:－新方法可消除CRISPRCas的脫靶效應
前段時間，麻省理工的研究人員發現基因編輯工具CRISPR-Cas系統具有脫靶效應。近日，這個研究小組的負責人張峰教授表示，他們已經找到了影響CRISPR-Cas系統精確度的關鍵因素，這一發現將使該系統在人類細胞中的應用更安全。目前，這一研究發表在Nature Biotechnology上。
盤點全基因組檢測CRISPR脫靶位點的幾種重要技術
在2013年，來自麻省總醫院的研究人員發現使用CRISPR-Cas RNA引導性核酸酶的一個重要局限：會在預期靶點以外的位點上生成多余的DNA突變。此后陸續有研究直接說明了CRISPR/Cas9存在嚴重的脫靶性，即該技術可以發生非特異性切割，引起基因組非靶向位點的突變，這樣會造成研究結果的不確定
CRISPRCas9基因編輯系統在靈長類中不會導致明顯脫靶效應
CRISPR-Cas9基因編輯系統已被廣泛應用于生物和醫學研究，研究人員正在嘗試利用這一系統進行人類疾病的基因治療。然而，CRISPR-Cas9系統在臨床前的安全性卻缺少全面的評估。之前有研究表明，CRISPR-Cas9系統在小鼠中會造成大量脫靶突變。此外，對細胞系的研究發現，Cas9編輯細胞的
基因編輯crispr原理
ZFNZFN，即鋅指核糖核酸酶，由一個 DNA 識別域和一個非特異性核酸內切酶構成。DNA 識別域是由一系列 Cys2-His2鋅指蛋白（zinc-fingers）串聯組成（一般 3~4 個），每個鋅指蛋白識別并結合一個特異的三聯體堿基。鋅指蛋白源自轉錄調控因子家族（transcription fa
基因編輯crispr原理
ZFNZFN，即鋅指核糖核酸酶，由一個 DNA 識別域和一個非特異性核酸內切酶構成。DNA 識別域是由一系列 Cys2-His2鋅指蛋白（zinc-fingers）串聯組成（一般 3~4 個），每個鋅指蛋白識別并結合一個特異的三聯體堿基。鋅指蛋白源自轉錄調控因子家族（transcription fa
基因編輯crispr原理
ZFNZFN，即鋅指核糖核酸酶，由一個 DNA 識別域和一個非特異性核酸內切酶構成。DNA 識別域是由一系列 Cys2-His2鋅指蛋白（zinc-fingers）串聯組成（一般 3~4 個），每個鋅指蛋白識別并結合一個特異的三聯體堿基。鋅指蛋白源自轉錄調控因子家族（transcription fa
DISCOVERSeq檢測CRISPR脫靶效應的新方法
自從CRISPR基因組編輯技術于2012年發明以來，它已經顯示出治療許多難治性疾病的巨大希望。然而，科學家們一直在努力在治療相關的細胞類型中鑒定潛在的脫靶效應，這仍然是將治療方法轉移到臨床應用的主要障礙。如今，在一項新的研究中，來自美國加州大學伯克利分校、加州大學舊金山分校、格拉德斯通研究所和瑞
三篇Nature子刊：如何克服CRISPR的脫靶效應
規律成簇的間隔短回文重復CRISPR與內切酶Cas9的組合，原本是細菌抵御病毒的重要武器，現在這一組合已經成為了一個通用工具，被用于在真核生物中進行位點特異性的基因組修飾。 最近Nature Biotechnology雜志上發表了三個研究團隊的研究成果，研究人員深入分析了CRISPR的脫靶效應
全基因組測序揭示CRISPR－/－Cas9在葡萄上的脫靶效應
近日，Horticulture Research在線發表了西北農林科技大學葡萄種質資源與育種團隊王西平課題組題為“Whole genome sequencing reveals rare off-target mutations in CRISPR/Cas9-edited grapevine”的
Nature?Methods：兩種新型?CRISPR?脫靶效應的分析方法
昨日，在 Nature Methods 同時刊登的兩篇研究中，發表了兩種分析 CRISPR/Cas -9 基因組編輯脫靶效應的新方法。其中一種方法可以鑒定細胞類型特異性 SNP 相關的脫靶突變，另一種則可以檢測潛在脫靶切割位點。 第一項研究中，來自麻省綜合醫院（MGH）和哈弗大學的研究人員開發
Editas創始人再破“脫靶效應”，向精準CRISPR時代邁進！
在CRISPR系列的基因編輯系統中，Cas9酶是一個非常關鍵的組成部分，更是“元老級”的成員，但是CRISPR/Cas9的脫靶效應是一直急需攻克的難題。在CRISPR技術向醫學臨床不斷轉化的過程中，科學家們正想法設法的解決這一重大技術難題，希望形成更精準的基因編輯系統。 1月6日，發表在《自然
應用慢病毒載體檢測CRISPRCAS9和TALEN脫靶
近日，國際生物學期刊nature biotechnology在線刊登了美國科學家的一項最新研究成果，他們應用整合酶缺陷的慢病毒載體（IDLV）檢測CRISPR-CAS9和TALEN對基因組造成的脫靶效應，最低可檢測1%的脫靶頻率。這項研究或對推廣CRISPR-CAS9和TALEN技術，保證基因操
國際期刊評論CRISPR基因療法
在醫療領域，基因編輯技術可以更加準確、深入地了解疾病發病機理和探究基因功能，可以改造人的基因，達到基因治療的目的等。今年五月份，來自中山大學的遺傳學，在世界上首次嘗試使用CRISPR–Cas9基因組編輯技術，修改來自人類胚胎的疾病相關DNA，從而引發了科學界的激烈爭論。這篇論文發表在五月份的《P
國際期刊評論CRISPR基因療法
在醫療領域，基因編輯技術可以更加準確、深入地了解疾病發病機理和探究基因功能，可以改造人的基因，達到基因治療的目的等。今年五月份，來自中山大學的遺傳學，在世界上首次嘗試使用CRISPR–Cas9基因組編輯技術，修改來自人類胚胎的疾病相關DNA，從而引發了科學界的激烈爭論。這篇論文發表在五月份的《P
用CRISPR成功編輯蚊子基因
蚊子是傳播某些致命疾病（如登革熱和瘧疾）的一個重要因素，因為它們攜帶寄生蟲和病毒，當它們叮咬人類和動物時會進行傳播。最近，來自美國密蘇里大學（MU）的研究人員，找到了一種有效的方法，來編輯蚊子的基因。MU獸醫學院獸醫病理學系的博士后研究人員Shengzhang Dong表示，這一新技術，為今后轉
如何檢測－crispr－基因敲除成功
CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一種來自細菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫機制。在細菌及古細菌中，CRISPR系統共分成3類，其中Ⅰ類和Ⅲ類需要多種CRISPR相關蛋白（Ca
CRISPR基因編輯技術的利與弊
說到基因編輯，大家都會想起CRISPR技術。這個當年名聲大噪的技術，現今依舊熱度不減，尤其是我們的CRISPR大神張鋒，近期發表的文章頻頻亮相于知名雜志，又引起一片熱議。時過境遷，CRISPR技術并沒有銷聲匿跡，一直在線。但任何事物包括技術有利就有弊，CRISPR技術當然也毫不例外。CRISPR技術
CRISPR基因編輯的臨床之路
CRISPR基因編輯技術不僅是炙手可熱的研究技術，也在最短的時間內走出實驗室，邁向臨床。今年6月，美國NIH的重組DNA顧問委員會已經給美國的第一例臨床試驗開了綠燈。研究人員計劃用CRISPR/Cas9來增強癌癥療法。 早些年，基因編輯作為一種治療工具，曾遭遇重大失敗，特別是18歲的Jesse
關于基因編碼的真相－CRISPR－：有什么是－CRISPR－不能做的？
如今，你幾乎在一每本科學或醫學雜志上，都能讀到，關于CRISPR 的信息。7 年前，自從改變游戲規則的 CRISPR-Cas9 方法首次用于基因組編輯以來，各行各業都在探索其無限的可能性。世界各地的生化學家正在夜以繼日地工作，檢驗這種創新做法的界限與局限。然而，方法不斷創新，不斷發展，從大型制藥企業
Science：張鋒再發重大突破，新成果“劍指”CRISPR脫靶效應！
2015年，基因編輯這個詞可謂是最活躍的科技詞匯之一；CRISPR作為最受歡迎的基因編輯神器更是突破不斷。雖然今年它最終沒能摘得諾獎，但是技術的一次次更新和突破讓科學界根本無法忽視這一技術的巨大實力和無限潛力。 Cas9酶是基因編輯系統中一個非常關鍵的組成部分，而脫靶效應一直是CRISPR技術
CRISPR大范圍“脫靶”？可能還需要進一步驗證
來源：Pixbay編者按：CRISPR基因編輯會導致數以百計意想不到的突變？5月30日，《自然-方法》刊登的一篇通信文章顯示，來自美國哥倫比亞大學等研究機構的科學家確認通過CRISPR基因編輯技術成功修復了導致兩只小鼠失明的基因后，經全基因組測序發現小鼠體內有超過1500個單核苷酸發生突變，并有百個