天然RNA文庫篩選與蛋白特異性結合的RNA序列實驗
實驗方法原理 細胞中，蛋白質與 RNA 結合參與多種生理調控和發育過程。在 mRNA 的加帽，多聚腺苷酸化，剪切，核外運，翻譯起始及降解等過程中都存在著蛋白質與 RNA 的直接相互作用。在發育的各個階段，RNA 結合蛋白可以通過與 mRNA 的相互作用調控基因的表達。實驗材料 mRNA寡核苷酸試劑、試劑盒 工具酶二硫蘇糖醇無核酸酶去離子水乙酸鉀PCI 溶液NT2 緩沖液KNET 緩沖液儀器、耗材 微離心管及加樣器吸頭Sephadex G-50 柱實驗步驟 一、材料與設備1. mRNA（購自 Clontech 公司，也可自行純化獲取）。2. 工具酶：Superscript Ⅱ 反轉錄酶和緩沖液（Life Technologies 公司），E.coli RNase H（Life Technologies 公司），未端脫氧核糖核酸轉移酶（Td Tase）和緩沖液（Life Technologies 公司），RNasin R......閱讀全文
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
實驗材料 樣品試劑、試劑盒 雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀器、耗材 加濕盒熱循環儀實驗步驟 1. ?將載有固定樣品的載玻片置105℃加熱塊上5~120 s。?2. ?載玻片放入含0.3%H2O2中，于37℃或室溫溫育過夜，以滅活內源性過氧化物酶活性，然后以
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技術，就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。實驗材料樣品試劑、試劑盒雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀
天然RNA文庫篩選與蛋白特異性結合的RNA序列實驗
細胞中，蛋白質與 RNA 結合參與多種生理調控和發育過程。在 mRNA 的加帽，多聚腺苷酸化，剪切，核外運，翻譯起始及降解等過程中都存在著蛋白質與 RNA 的直接相互作用。在發育的各個階段，RNA 結合蛋白可以通過與 mRNA 的相互作用調控基因的表達。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛
天然RNA文庫篩選與蛋白特異性結合的RNA序列實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 細胞中，蛋白質與 RNA 結合參與多種生理調控和發育過程。在 mRNA 的加帽，多聚腺苷酸化，剪切，核外運，翻譯起始及降解等過程中都存在著蛋白質與 RNA 的直接相互作用。在發育的各個階段，RNA 結合蛋白可以通過與 m
天然RNA文庫篩選與蛋白特異性結合的RNA序列實驗
實驗方法原理 細胞中，蛋白質與 RNA 結合參與多種生理調控和發育過程。在 mRNA 的加帽，多聚腺苷酸化，剪切，核外運，翻譯起始及降解等過程中都存在著蛋白質與 RNA 的直接相互作用。在發育的各個階段，RNA 結合蛋白可以通過與 mRNA 的相互作用調控基因的表達。實驗材料 mRNA寡核苷酸試劑、
核酸序列分析實驗
實驗方法原理針對核酸序列的分析就是在核酸序列中尋找基因，找出基因的位置和功能位點的位置，以及標記已知的序列模式等過程。在此過程中，確認一段 DNA 序列是一個基因需要有多個證據的支持。一般而言，在重復片段頻繁出現的區域里，基因編碼區和調控區不太可能出現；如果某段 DNA 片段的假想產物與某個已知的蛋
核酸序列的檢索實驗
實驗方法原理掌握核酸序列檢索的操作方法；熟悉GenBank數據庫序列格式及其主要字段的含義；了解EMBL數據庫序列格式及其主要字段的含義；熟悉GenBank數據庫序列格式的FASTA序列格式顯示與保存；實驗材料電腦儀器、耗材筆記本筆實驗步驟1. ?使用Entrez信息查詢系統檢索核酸序列BC0608
RNA干涉實驗
RNA 干涉（RNA1） 是指在真核細胞中引入雙鏈 RNA ( doubt-stranded RNA，dsRNA ) 分子從而導致具有序列同源性的基因產生特異件基內沉默（gene silencing ) 的現象。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理當確定了靶基因上的 siRN
純化RNA實驗
從培養的細胞中純化總RNA 從組織中純化總RNA ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
RNA干涉實驗
實驗方法原理 當確定了靶基因上的 siRNA 分子作用位點以后，根據靶位點的序列可以很方便地推導得到相應的 siRNA 分子的正義與反義 RNA 鏈序列。它們包含 19 bp 的互補雙鏈區和兩側的不配對區（每側為 2 個 U 成 2 個 T )，在合成時用 T 替代 U 可以降低成本并可以提
RNA干涉實驗
化學合成siRNA分子實驗 體外轉錄合成siRNA分子實驗 采用RNA聚合酶Ⅲ啟動子表達siRNA分子 采用RNaseⅢ制備siRNA分子實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法
隨機序列庫的純化實驗
實驗方法原理 實驗材料 DNA 庫試劑、試劑盒 氫氧化銨正丁醇TE 緩沖液 尿素上樣緩沖液NaCl 乙醇儀器、耗材 熒光薄層層析板（VWR）紫外燈剃刀刀片小孔注射器能耐受極端溫度的 13 ml 離心管（Sarstedt） 90℃水浴旋轉混合器實驗步驟 實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他
隨機序列庫的純化實驗
實驗方法原理實驗材料DNA 庫試劑、試劑盒氫氧化銨正丁醇TE 緩沖液尿素上樣緩沖液NaCl乙醇儀器、耗材熒光薄層層析板（VWR）紫外燈剃刀刀片小孔注射器能耐受極端溫度的 13 ml 離心管（Sarstedt）90℃水浴旋轉混合器實驗步驟實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他」1. 寡核苷酸
隨機序列庫的純化實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 DNA 庫 試劑、試劑盒 氫氧化銨
氨基酸序列測定實驗
實驗方法原理 實驗材料 分離膠和積層膠溶液還原型谷胱甘肽干粉試劑、試劑盒 4 × 凝膠緩沖液10 × 下槽緩沖液10 × 上槽緩沖液甲醇轉移緩沖液0.1%（V／V）考馬斯亮藍的 50％甲醇溶液10％（V／V）乙酸的 50％甲醇溶液儀器、耗材 微量注射器或凝膠加樣吸頭PVDF 膜小型電轉裝置自動蛋白質
氨基酸序列測定實驗
基本方案 測定通過 SDS-PAGE 轉移到 PVDF 膜上樣品的氨基酸序列 輔助方案 準備SDS-PAGE蛋白質樣品 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
RNA分離與分析實驗_分離RNA
實驗材料標記細胞試劑、試劑盒乙酸緩沖液儀器、耗材漩渦器實驗步驟1. 收獲標記細胞。2. 小心處置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸緩沖液懸浮細胞沉淀，每 1 ml 壓積細胞用 10 ml 緩沖液。3. 于室溫用漩渦器振蕩裂解細胞。4. 加等體積的水飽和酚，充分混勻，于 60
RNA干擾主體實驗
siRNA表達載體構建好后，即可進行RNA干擾主體實驗。RNA干擾主體實驗的重點在于：成功將siRNA表達載體導入目的細胞如果目的細胞的質粒轉染效率較低（低于70%），則應采用腺病毒或慢病毒載體，利用病毒載體的高感染率、高表達特性，更好地開展RNA干擾主體實驗。設置好分組和對照按照nature的標準
RNA實驗方法
Solublization of RNA in Formamidecontributed by James McCaughern-Carucci, Yale UniversityResuspending RNA in Formamide (as reported by Chomczynski et
動物RNA提取實驗
實驗方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 總RNA 純化系統)可在1小時內從組織、培養細胞和白細胞中提取純化完整總RNA，方法簡單、快速。該系統以膜為基礎，根據組織類型的不同，每次最多可純化60 mg 組織。系統包含DNase 處理步驟，直接在小離
RNA干擾回復實驗
RNA干擾回復實驗，主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects（脫靶效應）最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
病毒RNA提取實驗
實驗方法原理 大多植物病毒RNA 為單鏈RNA ，并且其極性與mRNA 極性相同，植物病毒RNA 提取較為簡單，一般使用酚氯仿即可獲得滿意結果。實驗材料 TMV病毒液試劑、試劑盒 TE-飽和酚:氯仿氯仿NaAc乙醇TE緩沖液雙菌水儀器、耗材 冷凍臺式離心機低溫真空干燥儀電泳儀電泳槽實驗步驟 一、實驗
病毒RNA提取實驗
病毒RNA提取可以：（1）用于RNA病毒復制機制研究；（2）用于反向遺傳學研究；（3）用于分子病毒學其他研究。實驗方法原理大多植物病毒RNA 為單鏈RNA ，并且其極性與mRNA 極性相同，植物病毒RNA 提取較為簡單，一般使用酚氯仿即可獲得滿意結果。實驗材料TMV病毒液試劑、試劑盒TE-飽和酚:氯
動物RNA提取實驗
SV總RNA試劑盒提取法 Trizol試劑提取法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 總RNA
病毒RNA提取實驗
TE-飽和酚/氯仿提取法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 大多植物病毒RNA 為單鏈RNA ，并且其極性與mRNA 極性相同，植物病毒RNA 提取較為簡單，一般使用酚氯仿即可獲
RNA干擾回復實驗
RNA干擾回復實驗，主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects（脫靶效應）最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
細菌RNA制備實驗
革蘭氏陰性細菌中提取 革蘭氏陽性細菌中提取 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 RNA 試
真菌RNA提取實驗
液氮研磨法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 液氮研磨可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯仿時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚
細菌RNA制備實驗
實驗材料 RNA試劑、試劑盒 STET氯仿乙酸鈉氯化銫無水乙醇EDTA儀器、耗材 離心機分光光度計搖床實驗步驟 1. ?培養100 ml 大腸桿菌或500 ml 藍細菌至對數生長期，加入1/20體積終止緩沖液，置于冰上。2. ?于4℃用JA-10轉子17 700 g 離心5 min 收集細胞。3.
真菌RNA提取實驗
真菌RNA的提取可以：（1）用于真菌RNA干擾機制研究；（2）用于cDNA文庫構建等研究；（3）用于真菌分子生物學相應研究。實驗方法原理液氮研磨可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯仿時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成