ELISA抗原競爭法檢測樣品中sIL2R含量

實驗概要

本法是用純化或重組的IL-2R(α鏈，P55，CD25，Tac抗原)蛋白包被96孔酶標反應板，同時加入已知量的抗IL-2RMcAb，再分別加入sIL-2R標準品與待測樣品。則待測sIL-2R或者sIL-2R標準品與包被的純化或重組的IL-2R蛋白競爭與抗IL-2R McAb結合。通過與標準品對照，從抗IL-2R McAb與包被的純化或重組的IL-2R蛋白結合受抑制程度來求得待測樣品中sIL-2R含量。

主要試劑

1. FITC標記的抗IL-2R McAb(0.2μg/ml)：FITC為異硫氰酸熒光素，這里僅作為半抗原使用，而不作為熒光素標記。

2. 堿性磷酸酶標記的兔抗FITC抗體(酶標抗體)

3. 對硝基苯磷酶鹽底物液；用pH9.8的二乙醇胺緩沖液溶解，配成濃度為1mg/ml。

4. 1%牛血清白蛋白-PBS(1%BSA-PBS)：為封閉液點稀釋液

5. 不同倍比稀釋度的sIL-2R標準品：以1% BSA-PBS稀釋。

6. 洗滌液(0.05%Tween20-PBS)

主要設備

96孔酶標板(聚苯乙烯板)，酶標儀，波長465nm濾光片，刻度吸管，毛細吸管，加樣器(頭)，4℃冰箱

實驗材料

1. 純化或重組的IL-2R蛋白(α鏈，P55，CD25，Tac抗原)(40.000u/ml)

2. 待測sIL-2R樣品

實驗步驟

1. 以一定濃度的純化或重組的IL-2R(P55)蛋白包被96孔酶標板，100ul/孔，4℃過夜(16-72h)；

2. 棄包被液，用1%BSA-PBS封閉非特異性結合位點，200ul/孔，置室溫2h；

3. 用洗滌液加滿各孔置3min，然后傾去，反復洗滌3次；

4. 分別加入不同稀釋度的sIL-2R標準品及待測樣品，50μl/孔；

5. 各孔均加入FITC標記的IL-2R McAb，50μl/孔，充分混勻后置室溫2h；

6. 同上洗滌3次；

7. 各孔均加入堿性磷酶酶標記的兔抗FITC抗體，100μl/孔，置室溫1h；

8. 同上洗滌3次；

9. 各孔均加入底物液，100μl/孔，置室溫15-30min；

10. 用酶標儀以波長405nm測各孔OD值。