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  • 發布時間:2019-03-27 19:34 原文鏈接: RNA在甲酰胺中的溶解保存

    將 RNA 保存于甲酰胺中比儲存于水中或乙醇中有更多好處:(1)甲酰胺將保護 RNA 不受 RNA 酶的降解,以這種方式保存的 RNA 是相當穩定的,可以在 4℃ 保存過夜,或在一 20°C 保存相當長的一段時間。樣品甚至可以置于室溫過夜而不用擔心其降解;(2)樣品可被高度濃縮,其終濃度甚至可以達到 4 mg/ml;(3)由于有了高度濃縮的 RNA 樣品,在進行反轉錄實驗時效率提高。 

    實驗方法原理

    甲酰胺具有活潑的反應性和特殊的溶解能力,可用作有機合成原料,紙張處理劑,纖維工業的柔軟劑,動物膠的軟化劑,還用作測定大米中氨基酸含量的分析試劑。在有機合成中,醫藥方面的用途居多,在農藥、染料、顏料、香料、助劑方面也有很多用途。

    也是優良的有機溶劑,主要用于丙烯腈共聚物的紡絲和離子交換樹脂中,以及塑料制品的防靜電涂飾或導電涂飾等。此外,還用于分離氯硅烷、提純油脂等。甲酰胺可發生多種反應,除了由三個氫參與反應外,還可以進行脫水,脫CO,引入氨基,引入酰基和環合等反應。

    實驗材料

    RNA

    試劑、試劑盒

    無水乙醇異丙醇的乙醇甲酰胺3mol L 的乙酸鈉

    儀器、耗材

    高速離心機紫外分光光度計

    實驗步驟

    一材料與設備

    所有的試劑配制均需采用經過蒸餾并消毒的去離子水。

    1) 無水乙醇

    2) 異丙醇

    3)75% 的乙醇

    4)100% 甲酰胺

    5)3mol/L 的乙酸鈉

    6) 高速離心機

    7) 紫外分光光度計


    二操作方法

    1) 使用 CsCl 法,酸-苯酚法,TRIol 法或 RNaolB 法進行 RNA 的一步提取。

    2) 用無水乙醇 (CsCl 法)或異丙醇 (其他方法)沉淀 RNA, 離心獲得 RNA 沉淀。

    3) 用 75% 的乙醇清洗 RNA 沉淀以除去多余的鹽分。

    4) 晾干,盡量吸去乙醇,并確保 RNA 中沒有多余的乙醇存在。

    5) 用保存的 100% 甲酰胺重懸 RNA。甲酰胺的用量應視 RNA 沉淀的多少而定,通常用量在 10ul 到 1000ul 之間。

    6) 大部分的 RNA 可立即溶解,可以在室溫放置 15 min,并用吸頭不時的上下吹打液體,以促進 RNA 的溶解。如果 RNA 的濃度很高,可以在 4℃ 放置過夜,以促進其完全溶解。

    7) 定量時,將 1ul RNA 溶液稀釋到 500ul 水中,測量其 OD260 

    8) 如果樣品被過分稀釋了,可以像水溶的 RNA 樣品一樣進行乙醇沉淀濃縮,加水溶解后使用。

    收起 
    注意事項

    1. 當使用 CsCl 法進行 RNA 的提取時,更應注意 RNA 多余鹽分的去除。

    2. 操作方法第4)步中,RNA 不要過分干燥。

    3. 測量 RNA 的 OD 值時,應在空內對照中加入 1ul 甲酰胺,以消除 RNA 產物中由于甲酰胺的加入而帶來的可能的背景,

    其他

    測量 RNA 的 OD 值時,應在空內對照中加入 1ul 甲酰胺,以消除 RNA 產物中由于甲酰胺的加入而帶來的可能的背景,


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