流動相的選擇秘訣
秘訣1:由強到弱:一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進行試驗,這樣可以很快地得到分離結果,然后根據出峰情況調整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。 秘訣2: 三倍規則:每減少10%的有機溶劑(甲醇或乙腈)的量,保留因子約增加3倍,此為三倍規則。這是一個聰明而又省力的辦法。調整的過程中,注意觀察各個峰的分離情況。 秘訣3: 粗調轉微調:當分離達到一定程度,應將有機溶劑10%的改變量調整為5%,并據此規則逐漸降低調整率,直至各組分的分離情況不再改變。 1.流動相的性質要求 一個理想的液相色譜流動相溶劑應具有低粘度、與檢測器兼容性好、易于得到純品和低毒性等特征。 選擇流動相時應考慮以下幾個方面: ①流動相應不改變填料的任何性質。低交聯度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時遇到某些有機相會溶脹或收縮,從而改變色譜柱填床的性質。堿性流動相不能用于硅膠柱系統。酸性流動相不能用于氧化鋁、氧化......閱讀全文
液相流動相中有機溶劑和緩沖鹽各有什么作用
有機溶劑主要是起到洗脫的作用,樣品能在柱子里完全被洗脫主要還是有機溶劑的作用,而使樣品能在柱子里面保留時間延長主要是水相的作用,分離是有機相和水相與柱子的固定相三者的共同作用(分配作用),而水相中的緩沖鹽,主要是起到抑制樣品解離的作用,使樣品成分子狀態,峰型較好,一般是酸樣加酸,堿樣加堿,也就是我們
液相流動相中有機溶劑和緩沖鹽各有什么作用
有機溶劑主要是起到洗脫的作用,樣品能在柱子里完全被洗脫主要還是有機溶劑的作用,而使樣品能在柱子里面保留時間延長主要是水相的作用,分離是有機相和水相與柱子的固定相三者的共同作用(分配作用),而水相中的緩沖鹽,主要是起到抑制樣品解離的作用,使樣品成分子狀態,峰型較好,一般是酸樣加酸,堿樣加堿,也就是我們
液相流動相中有機溶劑和緩沖鹽各有什么作用
有機溶劑主要是起到洗脫的作用,樣品能在柱子里完全被洗脫主要還是有機溶劑的作用,而使樣品能在柱子里面保留時間延長主要是水相的作用,分離是有機相和水相與柱子的固定相三者的共同作用(分配作用),而水相中的緩沖鹽,主要是起到抑制樣品解離的作用,使樣品成分子狀態,峰型較好,一般是酸樣加酸,堿樣加堿,也就是我們
液相流動相中有機溶劑和緩沖鹽各有什么作用
有機溶劑主要是起到洗脫的作用,樣品能在柱子里完全被洗脫主要還是有機溶劑的作用,而使樣品能在柱子里面保留時間延長主要是水相的作用,分離是有機相和水相與柱子的固定相三者的共同作用(分配作用),而水相中的緩沖鹽,主要是起到抑制樣品解離的作用,使樣品成分子狀態,峰型較好,一般是酸樣加酸,堿樣加堿,也就是我們
效液相色譜流動相的溶劑選擇
流動相溶劑的選擇1)所選用的流動相溶劑要有一定的化學穩定性,不與固定相和樣品組分起反應,其純度和化學特性必須滿足色譜過程的穩定性和重復性的要求。2)溶劑應當不干擾檢測器的工作,溶劑應與檢測器匹配,選擇不影響檢測器正常工作應選擇在測定波長范圍內無吸收的流動相。3)在制備分離中,溶劑應當易于除去,不干擾
流動相為含緩沖鹽流動相,走完樣品應該怎么沖柱子
要看色譜柱C18接的是什么鍵,不同的鍵對水的耐受性不同,有的柱子是不怕純水做流動相的含緩沖鹽肯定先用10%甲醇水沖洗,含有蛋白如果是能耐純水的色譜柱一般是用甲酸或者乙酸調PH大于2的水清洗
如何-選擇-液相色譜流動相ph和-溶劑-要求
當然要根據你測定的物質來確定。一般極性小的物質,有機相會相對大一些,極性大的物質就可以小一些。有些特殊的物質會易溶于酸或堿,根據這些來進行調整。簡單說就是保證你的測定物質可以溶于流動相。此外的一些緩沖鹽比較復雜,最好在網上搜索類似的方法加以改進。注意的是要保證你的方法在色譜柱的適用范圍內,如果方法特
液相色譜儀溶劑流動相的純化
分析純和優級純溶劑在很多情況下可以滿足液相色譜儀分析的要求,但不同的色譜柱和檢測方法對溶劑的要求不同。目前液相色譜分析用的色譜純溶劑除zui常用的甲醇外,其余多為分析純,有時要進行除去紫外雜質、脫水和蒸餾等純化操作。一、乙腈是常用的溶劑,分析純乙腈中含有少量的丙酮、丙烯腈、丙烯醇和噁唑等化合物,會產
高效液相色譜中流動相常用的緩沖鹽有哪些
沖柱時間的長短,要看你的色譜柱。柱長決定流動相的緩沖時間。按照標準執行,需要沖10倍的柱體積。不過如果是研發做實驗,通常會節省一些時間。250mm的長柱都是至少要沖色譜柱半個小時也就夠了。反相色譜柱,比如C8和C18色譜柱會先用10%的甲醇水(或乙腈水)來過渡半小時,然后沖緩沖鹽的流動相平衡進樣。結
高效液相色譜中流動相常用的緩沖鹽有哪些
沖柱時間的長短,要看你的色譜柱。柱長決定流動相的緩沖時間。按照標準執行,需要沖10倍的柱體積。不過如果是研發做實驗,通常會節省一些時間。250mm的長柱都是至少要沖色譜柱半個小時也就夠了。反相色譜柱,比如C8和C18色譜柱會先用10%的甲醇水(或乙腈水)來過渡半小時,然后沖緩沖鹽的流動相平衡進樣。結
液相流動相溶劑過濾器操作說明
液相流動相溶劑過濾器是適用于搭配各種品牌、型號的HPLC液相色譜使用的一款配套設備。其主要作用是用于去除色譜流動相中的雜質,延長色譜柱的使用壽命,同時整個過濾的過程中也起到了較好的脫氣效果,去除氣泡后可顯著提高分析精度。液相流動相溶劑過濾器(以R300MF舉例)其主要由抽濾泵、抽濾瓶組成,兩個部分通
高效液相色譜儀溶劑流動相的純化
分析純和優等純溶劑在許多情況下都能滿足高效液相色譜儀的要求,但不同的色譜柱和檢測方法對溶劑的要求不同。目前,用于高效液相色譜儀分析的純色譜溶劑,除甲醇外,大多為分析純,有時需要通過去除紫外雜質、脫水、蒸餾等方法進行提純。1.乙腈是常用的溶劑。對純乙腈的分析中含有少量的丙酮、丙烯腈、丙烯酸酯、惡唑化合
液相流動相中緩沖鹽的作用是什么
1. 使用前的處理:???? 在使用緩沖鹽作流動相之前需要用不含緩沖鹽的流動相沖洗色譜柱,直至基線平穩。原則上,用于沖洗的流動相與分析時所用的流動相含水的比例相同(或含水更多),不同的只是用于沖洗用的流動相中不含緩沖鹽。理由:緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動相的水為飽和
液相色譜流動相中緩沖液有那些作用
有很多,比如酸類的:醋酸,磷酸,TFA等緩沖液;堿類的:三乙胺,二乙胺。還有鹽類的:磷酸二氫鉀,酸酸氫二鉀等。作用主要就是調節PH,防止樣品解離,便于分離,峰型更好。
液相流動相中緩沖鹽的作用是什么
. 使用前的處理:???? 在使用緩沖鹽作流動相之前需要用不含緩沖鹽的流動相沖洗色譜柱,直至基線平穩。原則上,用于沖洗的流動相與分析時所用的流動相含水的比例相同(或含水更多),不同的只是用于沖洗用的流動相中不含緩沖鹽。理由:緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動相的水為飽和的
所有可以用作液相色譜流動相的有機溶劑
常用,乙腈水正己烷脂肪醇(甲醇,異丙醇)氯代烷烴酰胺苯,烷基取代苯氯苯脂肪酮(丙酮等)
聚合物gpc溶劑和流動相可以不同嗎
從實驗角度出發的話,不能。淋洗液和流動相是同一種試劑,原因是溶劑分子之間也有空隙,如果與流動相不是同一種試劑,當你用淋洗液進行淋洗時,淋出體積就會與兩者相同時的淋出體積不一樣。我們假設淋洗液A(乙醇)與流動相B(水)都是某一高分子的良溶劑,這樣會使淋出體積較都是乙醇時小,而且高分子與淋洗液和高分子與
液相色譜HPLC流動相的溶劑怎么選擇應遵循什么原則?
流動相溶劑的選擇:正確選擇流動相溶劑對高效液相色譜的成功至關重要。目前還沒有理想的選擇模式這主要取決于經驗的積累。流動相溶劑選擇的一般要求是:(1)溶劑應純度高,不溶于固定相,并能保持色譜柱的穩定性;(2)溶劑的性能應與所用的檢測器相匹配;(3)溶劑應具有足夠的樣品溶解能力;(4)溶劑應該具有低粘度
高效液相色譜流動相溶劑使用的注意事項
流動相溶劑使用的注意事項1)流動相溶劑應選擇HPLC的溶劑或依此為標準的溶劑。流動相使用前用0.45μm濾膜過濾、脫氣,清除微粒和灰塵。在送液泵內,為了防止雜物(固體)進入流路,裝有吸濾器,但網孔徑為10μm,比此更小的顆粒仍然可通過,這會導致流路和柱子堵塞和污染。為此,建議常用0.45μm濾膜過濾
流動相溶劑瓶的保養
溶劑瓶是流動相的起點,通常是盛放水相溶液或是有機相溶液。 1、水相溶液,對于水相溶液來說,首要的問題是防止污染。對于溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動相,常換常新。 2、有機相溶液,對于有機相溶液,可以不用擔心細菌繁殖的問題。但是有機相容易發生聚合,特別是乙腈在適宜的光照條件下極
化學鍵合相色譜儀流動相的要求與常用溶劑
化學鍵合相色譜儀流動相由為底劑和洗脫劑組成。底劑決定基本的色譜分離情況,洗脫劑是為了調節樣品組分的滯留并對某幾個組分進行選擇性分離。一、流動相的要求:1、溶劑具有穩定的化學性質。2、溶劑的選擇與檢測器相容。3、溶劑的粘度小。4、溶劑的沸點不能太低。5、溶劑的純度高且價格便宜。二、常用溶劑:1、正相鍵
實驗室高效液相色譜儀流動相的溶劑選擇
流動相溶劑的選擇1)所選用的流動相溶劑要有一定的化學穩定性,不與固定相和樣品組分起反應,其純度和化學特性必須滿足色譜過程的穩定性和重復性的要求。2)溶劑應當不干擾檢測器的工作,溶劑應與檢測器匹配,選擇不影響檢測器正常工作應選擇在測定波長范圍內無吸收的流動相。3)在制備分離中, 溶劑應當易于除去,不干
流動相脫氣
流動相脫氣對于避免HPLC系統出問題,順利得到一個理想的數據是一個很有效的措施。HPLC系統內是不能夠有氣泡存在的。HPLC泵在輸送液體時要產生很大的壓力,由于氣體的壓縮比與液體相比大的多,因而當氣泡存在時,你將觀察到瞬間的流速降低和系統壓力下降。如果這個氣泡足夠大,液相泵將不能輸送任何溶劑,而且如
液相色譜儀分析中作為流動相的溶劑應具備的性質
溶劑的種類和數目很多,但是可作為液相色譜儀分析中流動相的溶劑的數目很少,溶劑的選擇在液相色譜中是比較不容易的。可作為流動相的溶劑至少應具備如下一些性質:一、具有穩定的化學性質。溶劑不能和固定相發生不可逆的化學反應,也不引起固定相表面活性基團的流失和基質的溶漲。除特殊的分配過程,溶劑只溶解樣品,而不
流動相的特點和常見的流動相介紹
色譜過程中攜帶待測組分向前移動的物質稱為流動相。與固定相處于平衡狀態、帶動樣品向前移動的另一相。用作流動相的物質有:氣體、液體、超臨界流體等。常見的流動相主要有:乙腈-水溶液、乙腈-醋酸水溶液、甲醇-水溶液、乙腈-磷酸水溶液等。
液相色譜儀分析中的緩沖溶液和流動相添加物
液相色譜儀分析中的緩沖溶液是由磷酸、醋酸及其它弱酸等和它們的鹽所構成的水溶液,流動相添加物主要指為了分離某些化合物而在流動相中添加的一些物質。一、緩沖溶液:在液相色譜分析過程中常使用緩沖溶液作為流動相,在流動相中添加少量的酸,以保持流動相pH值,提供一定的離子強度,通過控制酸性、堿性化合物的離解度或
流動相中緩沖鹽的正確使用方法
1. 使用前的處理:在使用緩沖鹽作流動相之前需要用不含緩沖鹽的流動相沖洗色譜柱,直至基線平穩。原則上,用于沖洗的流動相與分析時所用的流動相含水的比例相同(或含水更多),不同的只是用于沖洗用的流動相中不含緩沖鹽。理由:緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動相的水為飽和的緩沖鹽溶
液質流動相與液相流動相有什么不同
液質的流動相要求不能含有不揮發性的鹽類,如果非要加入的話,質譜要及時清洗。使用液相是因為要進行物質的結構確證。?
液相色譜流動相脫氣
流動相的脫氣HPLC所用流動相必須預先脫氣,否則容易在系統內逸出氣泡,影響泵的工作。氣泡還會影響柱的分離效率,影響檢測器的靈敏度、基線穩定性,甚至使無法檢測。(噪聲增大,基線不穩,突然跳動)。此外,溶解在流動相中的氧還可能與樣品、流動相甚至固定相(如烷基胺)反應。溶解氣體還會引起溶劑PH的變化,對分
液相流動相如何脫氣
流動相溶液往往因溶解有氧氣或混入了空氣影響液相色譜的操作性能,在泵中產生氣泡使流速不穩,氣泡大時會在泵頭形成空穴。氣泡進入檢測器后會在色譜圖上出現尖銳的噪音峰,降低響應甚至導致信號消失。流動相中的氧對光電檢測器影響最大,使紫外檢測器基線增高,低波長檢測時信號被抵消。在熒光檢測中,溶解氧還會使熒光淬滅