獻給初學者：PCR常見問題分析
我們給大家匯總了 PCR 常見問題、出現的原因及解決對策，還有終極解決方案。 PCR 常見問題及解決方案 1沒有擴展條帶 可能的原因及對應的解決方案如下： 酶失活或在反應體系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或運輸不當而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結果。 模板含有雜質。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成 DNA 脫嘌呤而影響 PCR 的結果。 變性溫度是否準確：PCR 儀指示溫度與實際溫度是否相符，過高酶在前幾個循環就迅速失活；過低則模板變性不徹底。 反應系統中污染了蛋白酶及核酸酶，應在未加 Taq 酶以前，將反應體系 95℃ 加熱 5~10 分鐘。 引物變質失效。人工合成的引物是否正確。是否純化，或因儲存條件不當而失活。 引物錯誤。利用 BLAST 檢查引物特異性或重新設計引物。 DNA 凝膠電泳時加入陽性對照，確保不是 DNA 凝膠和 PCR 程序......閱讀全文
傳代細胞－PCR常見問題及回答
1. cDNA產量的很低?可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl?2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺?*zui常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應
PCR－Array－常見問題解答
PCR Array FAQ:任何一臺能夠做QPCR的儀器據能夠做PCRarray嗎？QPCR 儀器都可以進行QPCR array的實驗。根據儀器采用的96孔或者384孔板，分為以下5種板型（plate format）：plate formatInstrument providerQPCR instr
PCR中常見問題分析與對策
PCR產物的電泳檢測時間?一般認為PCR產物應在48h以內完成電泳檢測，有些zui好于當日電泳檢測，大于48h后帶型就會出現不規則，甚至消失。?1? 假陰性，不出現擴增條帶???? PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節
PCR常見問題及解決方案
PCR常見問題及解決方案? 1沒有擴展條帶? 可能的原因及對應的解決方案如下：? 酶失活或在反應體系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或運輸不當而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結果。? 模板含有雜質。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR
PCR常見問題解決方法
?1）出現假陽性的原因是什么？出現的PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致，有時其條帶更整齊，亮度更高。①引物設計不合適：選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性，因而在進行PCR擴增時，擴增出的PCR產物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現假陽性。需重新設計引物。②靶序列或擴增產物的交叉污染
PCR原理及常見問題解答
PCR?(Polymerase Chain Reaction)，中文翻譯為聚合酶鏈式反應，是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制。 由1983年美國Mullis首先提出設想，1985年由其發明了聚合酶鏈反應，即簡易DNA擴增法，意味著PCR
PCR技術（五）：常見問題分析與對策
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
PCR實驗指導與常見問題分析1
CONTENTPCR guide: a discussion of the main parameters influencing the outcome of the PCR and multiplex PCR reaction in 16 pages/sections and using ove
PCR實驗指導與常見問題分析3
Influence of annealing temperature and number of loci amplifiedLike any other PCR, multiplex reactions should be done at a stringent enough temperatur
PCR實驗指導與常見問題分析4
Fig. 25.?Multiplex PCR of mixtures A-D comparing PCR programs with 2 (green) and 1 (yellow) minute extension time at 54° C annealing temperature. Comp
PCR實驗指導與常見問題分析5
MgCl2?concentrationRelationship between MgCl2?and dNTP concentrationdNTP concentrations of about 200μM each are usually recommended for the Taq polyme
PCR實驗指導與常見問題分析6
Non-denaturing PAA gelsTo separate PCR products differing in only a few bp in length (for example, microsatellite markers), 6-10% PAA gels need to be
PCR實驗指導與常見問題分析7
11. All products in my multiplex reaction are weak. How can I improve the yield?Decrease annealing time in small steps (2o C)Decrease extension temper
PCR實驗指導與常見問題分析2
Fig. 11.?Example of the influence of extension temperature. Multiplex PCR with mixtrues A-B using two different PCR programs. Reactions on the right s
PCR儀溫控性能及常見問題分析
??PCR 技術自發明以來已經三十多年，一直廣泛應用于分子生物學的各個領域，普通定性PCR在基礎研究中仍舊是不可或缺的環節。今天小寶來聊一聊定性PCR儀zui為實驗人員關注的溫控性能和常見問題。一、PCR儀溫控性能解讀-----------------------------------------
PCR原理及常見問題解答
PCR (Polymerase Chain Reaction)，中文翻譯為聚合酶鏈式反應，是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制。 由1983年美國Mullis首先提出設想，1985年由其發明了聚合酶鏈反應，即簡易DNA擴增法，意味著PCR技術的真
進口PCR儀的常見問題詳細解答
1. 進口PCR儀cDNA產量的很低 可能的原因： *RNA模板質量低 *對mRNA濃度估計過高 *反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足 *同位素磷32過期 *反應體積過大，不應超過50μl 2. 進口PCR儀擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺 *zui常見的原因在于
進口PCR儀的常見問題詳細解答
1. 進口PCR儀cDNA產量的很低 可能的原因： *RNA模板質量低 *對mRNA濃度估計過高 *反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足 *同位素磷32過期 *反應體積過大，不應超過50μl 2. 進口PCR儀擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺 *zui常見的原因在于
PCR常見問題及解決方案（二）
問題可能原因解決方法無產物或產量低模板濃度偏低或偏高電泳檢測模板濃度，調整模板用量模板降解重新制備；基因組DNA、cDNA應小量分裝后低溫保存模板中含有抑制反應的雜質純化模板引物濃度不足調整引物濃度，特別是針對長片段PCR引物存在二級結構重新設計引物，避免二級結構；優化退火溫度引物降解引物應高濃度小
PCR儀溫控性能及常見問題分析
?PCR 技術自發明以來已經三十多年，一直廣泛應用于分子生物學的各個領域，普通定性PCR在基礎研究中仍舊是不可或缺的環節。今天小寶來聊一聊定性PCR儀zui為實驗人員關注的溫控性能和常見問題。一、PCR儀溫控性能解讀------------------------------------------
定量PCR常見問題及解決方法
Q1．CT值出現過晚1.擴增效率低，反應條件不夠優化。設計更好的引物或探針；改用三步法進行反應；適當降低退火溫度；增加鎂離子濃度等。2.PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足。3.PCR產物太長。一般采用80-150bp的產物長度。Q2．無CT值（信號）出現1.反應循環數不夠。一般都要在35個循環以
PCR儀溫控性能及常見問題分析
?PCR 技術自發明以來已經三十多年，一直廣泛應用于分子生物學的各個領域，普通定性PCR在基礎研究中仍舊是不可或缺的環節。今天小寶來聊一聊定性PCR儀zui為實驗人員關注的溫控性能和常見問題。一、PCR儀溫控性能解讀------------------------------------------
講解7500熒光定量PCR儀常見問題
?打怪升級的不敗經驗在于“儲備”，儲備技能和能量，從容應對每一個遇到的挑戰。就像解決熒光定量PCR儀常規問題一樣，學幾招，也許在某一刻就是你需要的，先儲備起來吧！Q?：7500快速定量PCR儀可以使用0.2ml PCR反應管或者96孔板嗎？A：不可以，7500 快速定量PCR儀只支持0.1ml PC
PCR儀溫控性能及常見問題分析
PCR 技術自發明以來已經三十多年，一直廣泛應用于分子生物學的各個領域，普通定性PCR在基礎研究中仍舊是不可或缺的環節。今天來聊一聊定性PCR儀最為實驗人員關注的溫控性能和常見問題。一、PCR儀溫控性能解讀-----------------------------------------------
獻給初學者：PCR－常見問題分析
我們給大家匯總了 PCR 常見問題、出現的原因及解決對策，還有終極解決方案。 PCR 常見問題及解決方案 1沒有擴展條帶 可能的原因及對應的解決方案如下： 酶失活或在反應體系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或運輸不當而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結果。
RTPCR常見問題及解決方案
RT-PCR常見問題及解決方案?
逆轉錄RTPCR常見問題分析
RT-PCR常見問題（一）RT-PCR靈敏度：在瓊脂糖凝膠分析中看到少量或沒有RT-PCR產物。可能原因解決方案RNA被降解在用來驗證完整性之前先在變性膠上分析RNA。使用良好的無污染技術分離RNA。在將組織從動物體取出后立刻處理。RNA中包含逆轉錄抑制劑通過乙醇沉淀RNA除去抑制劑。用70%（體積
PCR實驗操作常見問題及解決方法
?1. cDNA產量的很低可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺*最常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系*與
QPCR常見問題及解決方法
?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ???Q-PCR常見問題及解決方法Q1．CT值出現過晚A2.1.擴增效率低，反應條件不夠優化。設計更好的引物或探針；改用三步法進行反應；適當降低退火溫度；增加鎂離子濃度等。2.PCR各種反應成分的降解或加樣
PCR實驗操作常見問題及解決方法
1. cDNA產量的很低可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺*最常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系*與反