氨基酸的薄層層析實驗原理
聚酰胺薄膜層析是60年代以后發展起來的一種新的層析方法,特別適用于氨基酸及其衍生物的分析。具有靈敏度高、分辨率強、操作方便快捷等特點。 聚酰胺是一類化學纖維素原料,即錦綸(尼龍)。由乙二酸和乙二胺聚合而成的,稱錦綸66。 由于分子中含有大量的酰胺基團,故稱聚酰胺。聚酰胺薄膜是在滌綸片基上涂上一層錦綸制成的。聚酰胺對許多極性物質有吸附作用,這是由于聚酰胺的-C=O和-NH -能與被分離物質的一定基團形成H鍵。如酚類(黃酮類、鞣質)和酸類(氨基酸、核苷酸)能以其羥基與酰胺鍵的羰基形成H鍵。在層析過程中,當樣品隨流動相通過聚酰胺薄膜時,由于聚酰胺與各極性分子產生H鍵吸附能力的強弱不同,從而可將樣品中各成分分離。 物質分離后,層析點在圖譜上的位置,即在濾紙上的移動速率,用Rf來表示。 在一定條件下,每個物質都有特定的Rf值,因此,用Rf可鑒定不同的物質。 無色物質的層析圖譜可用光譜法(紫外照射)或顯色法鑒定。氨基酸層析圖譜......閱讀全文
氨基酸的薄層層析
原理 介紹層析的概念 所謂層析,就是利用樣品中各組成成分的理化性質的差異,使各組分以不同程度分布在固定相和流動相兩相中,由于各組分隨流動相前進的速率不同,從而把它們分離開來的技術。這些物理特性包括分子的大小、形狀、所帶電荷、揮發性、溶解性及吸附性質等。層析系統的必要組分有:
氨基酸的薄層層析(TLC)
【實驗原理】聚酰胺薄膜層析是60年代以后發展起來的一種新的層析方法,特別適用于氨基酸及其衍生物的分析。具有靈敏度高、分辨率強、操作方便快捷等特點。聚酰胺是一類化學纖維素原料,即錦綸(尼龍)。由乙二酸和乙二胺聚合而成的,稱錦綸66。 由于分子中含有大量的酰胺基團,故稱聚酰胺。聚酰胺薄膜是在滌綸片基
氨基酸的薄層層析實驗原理
聚酰胺薄膜層析是60年代以后發展起來的一種新的層析方法,特別適用于氨基酸及其衍生物的分析。具有靈敏度高、分辨率強、操作方便快捷等特點。 聚酰胺是一類化學纖維素原料,即錦綸(尼龍)。由乙二酸和乙二胺聚合而成的,稱錦綸66。 由于分子中含有大量的酰胺基團,故稱聚酰胺。聚酰胺薄膜是在滌綸片基上涂上
氨基酸薄層層析實驗方法
【實驗試劑和器材】 (一) 試劑 1. 氨基酸標準液(10mg/ml):三種氨基酸是賴氨酸、脯氨酸、纈氨酸,分別配成上述濃度的溶液。 2. 氨基酸混合液(每種氨基酸5mg/ml) 3. 展層劑:正丁醇:12%氨水:95%乙醇=13: 3: 3(V/ V) 4. 0.1%茚三酮-正丁醇液
薄層層析
Reaction volume 100 ul5 ul NADPH (100 mM)x ul cell extract so you get 50 % conversion0.2 uM C14-Testosteroneadd Tris-Citrate Buffer pH 6 to an endvolu
薄層層析的薄層層析的分析程序
將樣品溶液用毛細管點在薄層板的一端,置密閉槽中,加入適宜溶劑為流動相。由于毛細管原理,溶劑被吸上,沿板移動,并帶動樣品中各組分向前移動,這個過程稱為展開。由于各組分性質不同,移動距離不同,展開一定距離后,即得互相分離的組分斑點。可用適當方法使各組分在板上顯示其位置,如組分本身有顏色,即可直接觀察,否
糖的硅膠G薄層層析實驗——薄層層析
實驗方法原理硅膠 G 是一種添加了粘合劑的硅膠粉,約含12 %-13 %的石膏,它可以把一些物質從溶液中吸附于自身的表面上,利用它對各種物質的吸附能力不同,再用適當的溶劑系統展層,使不同的物質得以分開,使用顯色劑顯色,得到不同的 Rf 值。糖在硅膠 G 薄層上的移動速度與糖的分子量和羥基數有關,經過
氨基酸纖維素薄層層析(cellulose-thinlayer-chromatography)
一、目的學習纖維素薄層層析的操作方法,掌握分配層析的原理。二、原理以纖維素作為支持物,把它均勻地涂布在玻璃板上成一薄層,然后在此薄層上進行層析即為纖維素薄層層析。纖維素是一種惰性支持物,它與水有較強的親和力而與有機溶劑親和力較弱。層析時吸著在纖維素上的水是固定相,而展層溶劑是流動相。當欲被分離的各種
薄層層析和紙層析的異同
一、性質不同1、紙層析:用紙作為載體的一種色譜法。2、薄層層析:色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質的一種重要實驗技術。二、用途不同1、紙層析用途:常用于葉綠素色素、氨基酸的鑒定和測定、桔皮精油成分的測定和一些特定細胞的篩選實驗。2、薄層層析用途:適用于揮發性較小或較高溫度易發生變化而不能用
薄層層析和紙層析的異同
一、性質不同1、紙層析:用紙作為載體的一種色譜法。2、薄層層析:色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質的一種重要實驗技術。二、用途不同1、紙層析用途:常用于葉綠素色素、氨基酸的鑒定和測定、桔皮精油成分的測定和一些特定細胞的篩選實驗。2、薄層層析用途:適用于揮發性較小或較高溫度易發生變化而不能用
薄層層析法原理
層析須在兩相系統間進行。一相是固定相,需支持物,是固體或液體。另一相為流動相,是液體或氣體。當流動相流經固定相時,被分離物質在兩相間的分配,由平衡狀態到失去平衡到又恢復平衡,即不斷經歷吸附和解吸的過程。隨著流動相不斷向前流動,被分離物質間出現向前移動的速率差異,由開始的單一區帶逐漸分離出許多區帶
薄層層析操作要點
鋪板鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀:過稠,板容易出現拖動或停頓造成的層紋;過稀,水蒸發后,板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1:2~3,硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間,根據經驗來定,與空氣濕度有關,一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷,越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑
薄層層析法原理
薄層層析又叫薄層色譜,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術,屬固—液吸附色譜,它兼備了柱色譜和紙色譜的優點,一方面適用于少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在制作薄層板時,把吸附層加厚加大,因此,又可用來精制樣品,此法特別適用于揮發性較小或較高溫度
薄層層析定量方法
可分為洗脫測定法、薄層層析法和原位掃描法:洗脫測定法①洗脫測定法,將展開后的組分斑點處的吸附劑刮下,用適宜溶劑將組分洗脫溶出,然后用適當方法進行定量測定。常用方法為比色法、紫外-可見分光光度法,也可用電化學分析法等。原位掃描法②原位掃描法,將展開后的薄層板放在光密度計內,以一定波長的光照射,同時使斑
薄層層析法原理
層析須在兩相系統間進行。一相是固定相,需支持物,是固體或液體。另一相為流動相,是液體或氣體。當流動相流經固定相時,被分離物質在兩相間的分配,由平衡狀態到失去平衡到又恢復平衡,即不斷經歷吸附和解吸的過程。隨著流動相不斷向前流動,被分離物質間出現向前移動的速率差異,由開始的單一區帶逐漸分離出許多區帶,這
薄層層析分離中的薄層板制作
???薄層層析分離中的薄層板制作是指將經離心機處理后的固定相支持劑均勻地涂布在玻璃板上形成薄層。玻璃板要求表面平滑、清潔,大小按需要選定。一、干板制作:??????? 干板是將不加粘合劑的支持劑干粉均勻地涂布在玻璃板上制成的薄層板。干板制作簡單,展開快,但極易吹散。制作方法如下:? 1、選直徑約為5
薄層層析分離中的薄層板制作
薄層層析分離中的薄層板制作是指將經離心機處理后的固定相支持劑均勻地涂布在玻璃板上形成薄層。玻璃板要求表面平滑、清潔,大小按需要選定。一、干板制作:干板是將不加粘合劑的支持劑干粉均勻地涂布在玻璃板上制成的薄層板。干板制作簡單,展開快,但極易吹散。制作方法如下:1、選直徑約為50mm的玻璃管一根,根據薄
關于薄層層析的簡介
英文為thin layer chromatography 又稱薄層色譜,色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質的一種重要實驗技術,屬固—液吸附色譜,兼備了柱色譜和紙色譜的優點,一方面適用于少量樣品(幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在制作薄層板時,把吸附層加厚加大,因此,又可用來精
什么叫薄層層析法
薄層層析又叫薄層色譜,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術,屬固—液吸附色譜,它兼備了柱色譜和紙色譜的優點,一方面適用于少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在制作薄層板時,把吸附層加厚加大,因此,又可用來精制樣品,此法特別適用于揮發性較小或較高溫度
什么叫薄層層析法
薄層層析又叫薄層色譜,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術,屬固—液吸附色譜,它兼備了柱色譜和紙色譜的優點,一方面適用于少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在制作薄層板時,把吸附層加厚加大,因此,又可用來精制樣品,此法特別適用于揮發性較小或較高溫度
薄層層析的相關介紹
在玻璃片、金屬箔或塑料片上鋪上一層約1~2毫米的支持物,如纖維素、硅膠、離子交換劑、氧化鋁或聚酰胺等,根據需要做不同類型的層析。聚酰胺薄膜是一種特異的薄層,將尼龍溶解于濃甲酸中,涂在滌綸片基上,當甲酸揮發后,在滌綸片基上形成一層多孔的薄膜,其分辨力超過了用尼龍粉鋪成的薄層。薄層層析較紙層析優越在
薄層層析的分析程序
將樣品溶液用毛細管點在薄層板的一端,置密閉槽中,加入適宜溶劑為流動相。由于毛細管原理,溶劑被吸上,沿板移動,并帶動樣品中各組分向前移動,這個過程稱為展開。由于各組分性質不同,移動距離不同,展開一定距離后,即得互相分離的組分斑點。可用適當方法使各組分在板上顯示其位置,如組分本身有顏色,即可直接觀察,否
薄層層析分離原理
薄層層析分離是把支持劑均勻涂布于支持板(常用玻璃板和滌綸布等)上形成薄層,待分離樣品點在支持板上,然后用相應的溶劑進行展開,使樣品中各組分得到分離的過程。薄層層析分離根據固定相支持劑的不同,分薄層吸附層析分離、薄層分配層析分離、薄層離子交換層析分離和薄層凝膠層析分離等。一般實驗中應用較多的是薄層吸附
薄層層析分離原理
薄層層析分離是把支持劑均勻涂布于支持板(常用玻璃板和滌綸布等)上形成薄層,待分離樣品點在支持板上,然后用相應的溶劑進行展開,使樣品中各組分得到分離的過程。薄層層析分離根據固定相支持劑的不同,分薄層吸附層析分離、薄層分配層析分離、薄層離子交換層析分離和薄層凝膠層析分離等。一般實驗中應用較多的是薄層吸附
薄層層析操作關鍵點
薄層層析操作關鍵點1、鋪板鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀:過稠,板容易出現拖動或停頓造成的層紋;過稀,水蒸發后,板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1:2~3,硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間,根據經驗來定,與空氣濕度有關,一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷,越稠越難下滴。勻
什么叫薄層層析法
薄層層析又叫薄層色譜,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術,屬固—液吸附色譜,它兼備了柱色譜和紙色譜的優點,一方面適用于少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在制作薄層板時,把吸附層加厚加大,因此,又可用來精制樣品,此法特別適用于揮發性較小或較高溫度
薄層層析技術介紹
在玻璃片、金屬箔或塑料片上鋪上一層約1~2毫米的支持物,如纖維素、硅膠、離子交換劑、氧化鋁或聚酰胺等,根據需要做不同類型的層析。聚酰胺薄膜是一種特異的薄層,將尼龍溶解于濃甲酸中,涂在滌綸片基上,當甲酸揮發后,在滌綸片基上形成一層多孔的薄膜,其分辨力超過了用尼龍粉鋪成的薄層。薄層層析較紙層析優越在于分
薄層層析的定量測定
薄層層析的定量測定:? ? 1)直接測定法:色譜分離后,直接用肉眼觀察比較或用儀器掃描斑點而測定其含量。? ? a.目測法樣品經色譜分離后,直接觀察所得斑點的大小和顏色的深淺,并與標準品在相同條件下展開所得到的一系列已知不同濃度的標準斑點相比較,而近似地判斷樣品中所測成分的含量。? ? b.測面積法
薄層層析的定性檢測
薄層層析的定性檢測:展開完畢后,把薄層從層析缸中取出,用鉛筆劃出或小針刺出展開劑前緣的位置,隨即進行顯色,以確定各個斑點的位置、Rf值和顯色情況,從而判斷試樣中含有哪些組分。有色物質經展開后呈現明顯的色斑,很易判斷。對于無色物質,可根據化合物的性質,用物理檢出法、化學檢出法、酶與生物檢出法和放射性檢
薄層層析的操作步驟
1.點樣: ⑴ 樣品的溶解:將樣品溶于展開劑極性相近、揮發性高的有機溶劑。 ⑵ 薄層點樣:用毛細管(0.5mm以下)或用專業點樣器進行點樣。 點樣的要求:樣點位置應在距離底邊1-1.5cm處;點樣量適當;樣點直徑小于2-3mm;間隔反復點樣;多個樣點時,間隔為2cm且處于同一條直線上。