差示反轉錄PCR實驗——熒光標記法
實驗方法原理熒光，又作“螢光”，是指一種光致發光的冷發光現象。當某種常溫物質經某種波長的入射光（通常是紫外線或X射線）照射，吸收光能后進入激發態，并且立即退激發并發出比入射光的的波長長的出射光（通常波長在可見光波段）；而且一旦停止入射光，發光現象也隨之立即消失。具有這種性質的出射光就被稱之為熒光。在日常生活中，人們通常廣義地把各種微弱的光亮都稱為熒光，而不去仔細追究和區分其發光原理。利用熒光染料與被研究對象（蛋白、多肽等）吸附或共價結合后其熒光特性發生改變，從而反映有關研究對象性能的信息。實驗材料人單核細胞系U937試劑、試劑盒胎牛血清TRIzol試劑Fluoro DD試劑盒Supersript Ⅱ逆轉錄酶Ampli Taq DNA聚合酶儀器、耗材手術刀片PCR儀凝膠成像儀離心管移液槍水浴鍋實驗步驟一、材料 1. 標本人單核細胞系U937，細胞密度2×108/L，分對照組（N）、處理Ⅰ組（T1）、處理Ⅱ組（......閱讀全文
PCR擴增標記法探針標記
PCR擴增標記法探針標記???? PCR擴增標記法的原理與普通的核酸PCR相同。即Taq?DNA多聚酶以DNA為模板，在特異引物引導下，在PCR儀中合成cDNA探針。由于在反應體系中加入一定量的標記dNTP，因此擴增的同時又是一個標記過程。cDNA探針PCR擴增法標記原理
連續標記法的技術特點
連續標記法是指在植物生長某個生育期，甚至整個生育期內，對植物進行不間斷標記的一種方法。連續標記法有助于定量全部生育期或某一生育期全部投入，但由于成本高以及技術困難，運用受到限制。
雙鏈DNA探針標記法
分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。 雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連
微衛星標記法的特點
與其它標記技術相比，具有以下特點：首先，在每個微衛星DNA?兩端的序列多是相對保守的單拷貝序列，尤其在親緣關系相近的物種間是保守的，而且在一些緊密相關的物種中其重復單位和重復次數具有一定的相似性。其次，這些小的、串聯排列的重復序列經常是通過核苷酸鏈的滑動錯配或者其它未知的過程來改變它們的長度,從而導
實驗動物常用的標記法
常用的標記法有染色、耳緣剪孔、烙印、號牌等方法。二）烙印法用刺數鉗在動物耳上刺上號碼，然后用棉簽蘸著溶在酒精中的黑墨在刺號上加以涂抹，烙印前最好對烙印部位預先用酒精消毒。（三）針刺法用七號或八號針頭蘸取少量碳素墨水，在耳部、前后肢以及尾部等處刺入皮下，在受刺部位留有一黑色標記。該法適用于大小鼠、豚鼠
流式細胞儀的簡要介紹與注意事項
一、流式細胞儀的檢測范圍1．流式細胞儀可以檢測細胞結構，包括：細胞大小、細胞粒度、細胞表面面積、核漿比例、DNA含量與細胞周期、RNA含量、蛋白質含量。2．流式細胞儀可以檢測細胞功能，包括：細胞表面/ 胞漿/ 核的特異性抗原、細胞活性、細胞內細胞因子、酶活性、激素結合位點和細胞受體。二、流式細胞儀的
免疫熒光雙標技術中操作要點和經驗
一、免疫熒光技術中標本制作的基本程序近似于酶免疫組化，不同點如下：?1、免疫熒光不需要使用雙氧水處理，封閉和一抗孵育與其相同。?2、免疫熒光的二抗使用不同熒光標記的二抗孵育，孵育時間根據抗體的工作濃度確定。?3、二抗孵育之后充分洗片后即可貼片、封片和觀察。?4、免疫熒光在封片時常使用專用封片劑或甘油
石蠟切片免疫熒光TUNEL和NEUN雙標染色
石蠟切片免疫熒光TUNEL和NEUN雙標染色曾經作過腦組織的TUNEL，也指導過別人做心肌的TUNEL，談談我的意見：蛋白酶K37度30min，好像有點偏長，我是10min。你是NBT/BICP顯色的話，這說明你用的是AP系統，而不是HRP這樣的話就不是用3%H2O2來去除內源性酶的了，（H2O2是
為什么可以用熒光標記法觀測基因在染色體上的位置
因為用熒光標記的基因會發出熒光，就像螢火蟲發出熒光一樣，所以在細胞分裂時會觀測到基因在染色體上的位置。
放射免疫分析直接標記法與間接標記法的說法正確的是
正確答案:A解析：采用放射性碘制備標志物的基本原理是以放射性碘原子通過取代反應置換被標志物分子中酪氨酸或酪胺殘基以及組胺殘基上的氫原子。因此，凡蛋白質、肽類等化合物在結構上含有上述基團，均可用[SB125.gif]I直接標記。而對那些不含上述基團的甾體激素或藥物分子則必須在分子結構上連接相應基團才能
流式細胞術常規檢測時的樣品制備
一、流式細胞術常規檢測時的樣品制備??(一)直接免疫熒光標記法??取一定量細胞(約1X106細胞／ml)，在每一管中分別加入50μl的HAB，并充分混勻，于室溫中靜置1分鐘以上(),再直接加入連接有熒光素的抗體進行免疫標記反應(如做雙標或多標染色，可把幾種標記有不同熒光素的抗體同時加入)，。孵育20
流式細胞術:標本處理
一、流式細胞術常規檢測時的樣品制備(一)直接免疫熒光標記法取一定量細胞(約1X106細胞／ml)，在每一管中分別加入50μl的HAB，并充分混勻，于室溫中靜置1分鐘以上(),再直接加入連接有熒光素的抗體進行免疫標記反應(如做雙標或多標染色，可把幾種標記有不同熒光素的抗體同時加入)，。孵育20-60分
Genome－Biology發文介紹RNA印記法
生物學家們逐漸意識到，RNA不只是DNA和蛋白之間的過渡產物，它對調節基因的表達有重要作用。深入研究RNA調控，能夠幫助科學家們進一步理解相關疾病。 賓夕法尼亞大學的科學家們開發了分析RNA調控的新方法，這一方法能夠有效獲得RNA與RNA結合蛋白(RBP)互作的所有位點。這一發表在Geno
免疫電鏡膠體金標記法
第四節 免疫電鏡膠體金標記法 金標法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質，使其與抗體相吸附，從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時，在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色，不需加外進行染色。在電鏡水平，金顆粒具有很高的電子密度，
BrdU標記法檢測原代細胞增殖
BrdU標記法檢測原代細胞增殖1．細胞以1.5×105/ml細胞接于直徑35ml培養皿中（內放置蓋玻片），培養1天，用含0.4％ FCS培養液同步化3天，使絕數細胞處于G0期2．終止細胞培養，加入BrdU（終濃度30μg/L），37℃，孵育40min。3．棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。4．甲醇/醋
靶細胞殺傷實驗：AnnexiV標記法
正常細胞的磷酯酰絲氨（phosphatidylserine，PS）位于細胞膜內表面，細胞凋亡時翻轉露于膜外側，可與annexinV高親合力結合。研究發現PS外翻為細胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的釋放。將效應細胞與靶細胞充分共育后，用PE結合的效應細胞特異性單克隆抗體（如CD
雙鏈DNA探針標記法介紹
分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。1.?切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的
金標免疫層析法和熒光免疫層析法的區別
酶免法是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。用酶與指示劑的反應來放大信號便于檢測。就是用酶標記抗原或抗體，抗原抗體反應后加入酶的指示劑(酶的底物反應后會顯色)，顏色的深淺與抗
金標免疫層析法和熒光免疫層析法的區別
酶免法是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。用酶與指示劑的反應來放大信號便于檢測。就是用酶標記抗原或抗體，抗原抗體反應后加入酶的指示劑(酶的底物反應后會顯色)，顏色的深淺與抗
金標免疫層析法和熒光免疫層析法的區別
酶免法是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。用酶與指示劑的反應來放大信號便于檢測。就是用酶標記抗原或抗體，抗原抗體反應后加入酶的指示劑(酶的底物反應后會顯色)，顏色的深淺與抗
金標免疫層析法和熒光免疫層析法的區別
酶免法是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。用酶與指示劑的反應來放大信號便于檢測。就是用酶標記抗原或抗體，抗原抗體反應后加入酶的指示劑(酶的底物反應后會顯色)，顏色的深淺與抗
X射線熒光光譜儀無標樣分析方法
對于以固體進樣為主的X射線熒光分析技術，要獲得一套高質量的固體標準樣品有一定難度，限制了X射線熒光分析的應用范圍。 而X射線熒光光譜無標樣分析技術是20世紀90年代推出的新技術，其目的是不用標準樣品也可以分析各種樣品。它的基本思路是：由儀器制造商測量標準樣品，儲存強度和工作曲線，然后將這些數據
金標免疫層析法和熒光免疫層析法的區別
酶免法是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。用酶與指示劑的反應來放大信號便于檢測。就是用酶標記抗原或抗體，抗原抗體反應后加入酶的指示劑(酶的底物反應后會顯色)，顏色的深淺與抗
金標免疫層析法和熒光免疫層析法的區別
酶免法是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。用酶與指示劑的反應來放大信號便于檢測。就是用酶標記抗原或抗體，抗原抗體反應后加入酶的指示劑(酶的底物反應后會顯色)，顏色的深淺與抗
金標免疫層析法和熒光免疫層析法的區別
酶免法是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。用酶與指示劑的反應來放大信號便于檢測。就是用酶標記抗原或抗體，抗原抗體反應后加入酶的指示劑(酶的底物反應后會顯色)，顏色的深淺與抗
原裝進口酶標各種熒光標記抗地高辛抗體
地高辛（Digoxin）是一種從洋地黃提取出的beta抑制劑性的藥物，被廣泛用于治療高血壓、瓣膜性心臟病、先天性心臟病等急性和慢性心功能不全的一種藥物。由于地高辛的治療指數狹窄，用藥過量與用藥不足時的癥狀相似，加之其個體差異大，故中毒的發生率高，是臨床上最難掌握藥物之一。目前解除地高辛毒性的最有效的
流式細胞儀實驗方法（一）
一、實驗準備1． ? 標本制備：2． ? 最小化非特異性結合：二、凋亡1．凋亡的檢測方法：網站和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA四、血小板1．活化2．活化檢測3．網織血小板五、紅細胞1．網織紅細胞2．PNH3．胎兒紅細胞六、腫瘤學
免疫熒光雙標技術中操作要點和注意事項
一、免疫熒光技術中標本制作的基本程序近似于酶免疫組化，不同點如下：?1、免疫熒光不需要使用雙氧水處理，封閉和一抗孵育與其相同。?2、免疫熒光的二抗使用不同熒光標記的二抗孵育，孵育時間根據抗體的工作濃度確定。?3、二抗孵育之后充分洗片后即可貼片、封片和觀察。?4、免疫熒光在封片時常使用專用封片劑或甘油
《熒光酶標分析儀校準規范》等征求意見通知
近日，全國生物計量技術委員會發布了《熒光酶標分析儀校準規范》及《碘含量分析儀校準規范》征求意見的通知，征求意見稿的相關材料在下列附件中。請大家認真評閱審議后填寫征求意見表反饋到委員會秘書處或相關起草小組。各起草小組的聯系方式如下:《熒光酶標分析儀校準規范》起草小組Email：liuyahui@nim
免疫熒光雙標技術中操作要點和注意事項
一、免疫熒光的標本制作的基本程序同DAB顯色的免疫組化，不同點如下：1、免疫熒光不需要使用雙氧水處理，封閉和一抗孵育與其它相同。2、免疫熒光的二抗使用不同熒光標記的二抗孵育，孵育時間根據抗體的工作濃度確定。3、二抗孵育之后充分洗片后即可貼片、封片和觀察。4、免疫熒光在封片使用專用封片劑或甘油：0.0