蛋白共沉淀檢測實驗_備擇用GST融合蛋白
實驗材料全細胞抽提物試劑、試劑盒谷胱甘肽-瓊脂糖或者谷胱甘肽-瓊脂糖漿抗體免疫共沉淀緩沖液氯化鈉蛋白 A G-瓊脂糖漿2 × 樣品緩沖液（用于 SDS-PAGE 膠）儀器、耗材20 ml 注射器和 18-G 針頭漢密爾頓注射器實驗步驟1. 按照蛋白 A/G-瓊脂糖漿所述的方式準備兩份樣本（見「用蛋白A/G-瓊脂糖」步驟 1），不加抗體。2. 4℃ 下最大速度離心 10 min，沉淀非特異性聚集。轉移上清到新的離心管中。3. 加 30 μl 谷胱甘肽-瓊脂糖或者谷胱甘肽-瓊脂糖漿（25～30 μl 珠子體積）。確保在加到樣本中之前瓊脂糖漿均勻懸浮。4. 旋轉樣本，沉淀然后洗谷胱甘肽-瓊脂糖或者谷胱甘肽-瓊脂糖漿，并且進行SDS- PAGE電泳和免疫印跡分析（見「用蛋白A/G-瓊脂糖」步驟 5～10）。展開......閱讀全文
蛋白共沉淀檢測實驗_備擇 用GST融合蛋白
實驗材料全細胞抽提物試劑、試劑盒谷胱甘肽-瓊脂糖或者谷胱甘肽-瓊脂糖漿抗體免疫共沉淀緩沖液氯化鈉蛋白 A G-瓊脂糖漿2 × 樣品緩沖液（用于 SDS-PAGE 膠）儀器、耗材20 ml 注射器和 18-G 針頭漢密爾頓注射器實驗步驟1. 按照蛋白 A/G-瓊脂糖漿所述的方式準備兩份樣本（見「用蛋白
GST 融合蛋白沉降實驗
實驗材料 細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒 裂解緩沖液SDS 聚丙烯酰胺凝膠探針GST 蛋白儀器、耗材 沸水浴翻轉祥品旋轉儀谷胱甘肽瓊脂糖球珠實驗步驟 材料緩沖液和溶液將緩沖液稀釋到適當濃度。裂解緩沖液20 mmol/LTris-Cl(pH8.0)200 mml/L NaCl1 mm
GST 融合蛋白沉降實驗
GST 沉降實驗與 far western(方案 2) 相比有—個優點：探針蛋白是在更自然的環境下與可能的搭檔蛋白孵育，因而增強了相互作用的有效性。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒裂解
GST 融合蛋白沉降實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞裂解液 其中蛋白質 35S 用標記 試劑、試劑盒 裂解緩沖液 SDS 聚丙烯酰胺凝膠
用 GST 融合蛋白檢測蛋白質-蛋白質相互作用實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白 試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相
用 GST 融合蛋白檢測蛋白質-蛋白質相互作用實驗
GST 融合蛋白作為在細菌中表達的重組蛋白，從它們被介紹以來，已用于成千上萬個研究項目中（Smith and johnson 1988)。它們常常被用于制備抗體，這些抗體可用于研究蛋白質-蛋白質相互作用以及分析生化反應。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W
用 GST 融合蛋白檢測蛋白質-蛋白質相互作用實驗
實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相互作用緩沖液PK 緩沖液還原型谷胱甘肽于 Tris-Cl中洗滌緩沖液 1 洗滌緩沖液 2蛋白酶蛋白激酶 A[y-32P]ATP儀器、耗材 與待篩選蛋白結合的膜或濾膜Sephadex G-50 轉柱實驗步驟 材
GST融合蛋白的親和純化實驗
實驗方法原理瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用 1/10 的 GST 融合體加樣做平行 SDS-PAGE 凝膠電泳并染色以便更確切地比較 GST 融合體蛋白帶。另外，融合蛋白的降解可能導致誘餌蛋白的量減少，尤其是當
GST融合蛋白的親和純化實驗
GST 共結合純化法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用
GST融合蛋白的親和純化實驗
實驗方法原理 瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用 1/10 的 GST 融合體加樣做平行 SDS-PAGE 凝膠電泳并染色以便更確切地比較 GST 融合體蛋白帶。另外，融合蛋白的降解可能導致誘餌蛋白的量減少