實驗材料草地夜蛾細胞(Sf 9)高滴度重組病毒儀器、耗材無血清昆蟲細胞培養基1~10 L 旋轉培養瓶10.16 cm 管索張力器多旋轉瓶攬拌臺27℃ 培養箱供氣泵實驗步驟1. 在懸浮培養液中培養 Sf 9 細胞,并使之適應無血清培養液(基本方案 1)。2. 準備旋轉培養瓶,用于按比例擴增 Sf 9 細胞,將合適大小的兩孔蓋連接在轉瓶的一個側臂,另用一平蓋接在另一側臂(圖 16.9.1)。將一段短管(約 15 cm)裝在通氣孔中,末端連接一濾器。借助張力器用管索將管子與通氣孔和濾器加固。3. 將一段長管(30~60 cm)連接至進氣孔,并在末端連接一濾器。用管索加固。另一段管子連接于濾器的另一端,用管索加固。管子末端用鋁箔封好。4. 將與兩孔裝置相對的側壁上的蓋子旋轉 90° 以松開,高壓滅菌培養瓶 1 h。5. 將適應了無血清培養液的 Sf 9 細胞(得自步驟 1)接種于經高壓滅菌的培養瓶中。將培養瓶裝至半滿至全滿之間(例如,在......閱讀全文
蛋白表達是指用模式生物如細菌、酵母、動物細胞或者植物細胞表達外源基因蛋白的一種分子生物學技術。蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系,通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。1、宿主。表達蛋白的生物體。可以為細菌、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性不同,適合表
實驗步驟 一、引言 選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及 時 獲 取 所 需 數 量 和 質 量 的 重z組蛋白非常關鍵。選 擇 了 錯 誤 的表達宿主可 能 導 致 蛋 白 質錯 誤 折 疊 或
重組蛋白是研究生物學過程的重要工具。需要使用表達系統來對其進行制備。合適表達系統的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預期應用以及該系統能否生產足夠量的蛋白質。作者: 伯吉斯等,主譯:陳薇,本實驗來自「蛋白質純化指南」實驗步驟一、引言選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及
蛋白表達是指用模式生物如細菌、酵母、動物細胞或者植物細胞表達外源基因蛋白的一種分子生物學技術。蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系,通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。 1、宿主。表達蛋白的生物體。可以為細菌、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性
五、哺 乳 動 物 細 胞以前通常認為哺乳動物表達方法是重組蛋白表達效率最低的方法。然 而 ,最近的研究進展已經極大地提高了哺乳動物細胞系的表達水平(詳 見 第 15章)。例如, 有報道稱利用穩定轉染的中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary,C H O )細胞,重組抗體的表
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統,由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷,人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來,基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行,在技術方法上得到了很大發展,時至今
MaxCyte流式電轉染平臺在新一代疫苗快速研發生產中的優勢分析日前,新型冠狀病毒(COVID-19)疫情仍在持續發展,截至目前,累計確診病例數已超過70000。盡管統計數據在不斷增加,但全國乃至全球抗擊疫情的決心和信心越來越強。對于疫情防控,其中最重要的研究工作是要盡早研發出針對2019-nCoV
由于腺病毒易于培養、純化,宿主范圍廣,故采用該類病毒構建的載體被廣泛應用腺病毒載體的構建依賴于腺病毒穿梭質粒和包裝載體之間的同源重組。但是哺乳動物細胞內的這種同源重組效率很低,利用細菌內同源重組法構建重組體效率會大大提高,即將外源基因插入到腺病毒穿梭質粒中,形成轉移質粒,將其線性化后與腺病毒包裝質粒
桿狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒,可用于(1)作為基因工程病毒殺蟲劑 ,提高害蟲防治效率(2)作為超高效的真核基因表達載體 ,生產有用的工程蛋白(3)研究桿狀病毒基因組的結構與功能(4)研究真核基因表達的調控機制。實驗方法原理由于昆蟲桿狀病毒環狀雙鏈DNA基因組很大 (約 13