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實驗材料蛋白質試劑、試劑盒Tris腹水液寧酸鹽緩沖液甘氨酸乙酸鹽緩沖液儀器、耗材超濾器濾膜實驗步驟1. 將10 ml 經CNBr活化Sepharose 4B溶脹于1 mmol/l HCl中，然后轉移至玻璃沙漏斗中，并用：①200~500 的1 mmol/l HCl和②200~500 ml 偶聯緩沖液各連續洗滌不少于30 min。 2. 將Sepharose凝膠轉移至50 ml 錐形塑料離心管中，加50~100 mg 的配體，混勻后4℃靜置過夜。3. 250 g 離心10 min，棄上清，加偶聯緩沖液至滿管，離心，棄上清。4. 加20~40 ml 1 mol/l pH8.0的乙醇胺，4℃靜置4~5 h，離心，棄上清。在管中依次加滿PBS和洗滌緩沖液來洗洗滌Sepharose，每次洗完后即離心。 5. 將Sepharose轉移到一個2.5 cm 的玻璃柱......閱讀全文
抗體制備制備出效價高，特異性強，穩定性好的抗體是免疫學實驗取得成功的基礎，抗體質量的好壞直接影響著研究者研究的成敗，不同的免疫學實驗方法（如ELISA，IHC，IP，ICC,SDS-PAGE, WB等）對抗體的效價，濃度和純度有不同的要求。我們知道，一般免疫血清中含有特異性抗體和非特異性抗體
【本屆論壇特點】 前沿學術交流與實驗技能培訓班有機的結合在一起，讓生物制藥科研人員在了解新技術、新工藝、新材料等行業前沿動態的同時，有機會在國內外一線專家的指導下親自上機操作，切實提高一線技術人員在研發和生產過程中解決實際問題的水平和動手操作能力。 強大的演講嘉賓陣容，本次論壇將邀請近30位
（一）大咖授課，機會難得 分離純化行業的泰斗級專家黃駿雄老師與擁有多年蛋白純化培訓和項目指導經驗的姜韜老師，作為主講嘉賓，親自授課。為確保培訓效果，姜韜老師與黃駿雄老師在九月上旬親臨納微科技，查看實驗培訓的設備與環境，為確保培訓課程能達到最佳效果，帶領工作人員完成預實驗。 （二）小班授課，最
【本屆論壇特點】 前沿學術交流與實驗技能培訓班有機的結合在一起，讓生物制藥科研人員在了解新技術、新工藝、新材料等行業前沿動態的同時，有機會在國內外一線專家的指導下親自上機操作，切實提高一線技術人員在研發和生產過程中解決實際問題的水平和動手操作能力。 強大的演講嘉賓陣容，本次論壇將邀請近30位
常見問題： 如何選擇合適的一抗？ 如何選擇合適的二抗？ 如何選擇合適的同型對照？ 如何選擇陽性對照？ 如何確定一抗的稀釋比例？ 如何選擇合適的抗原修復方式？ 為何WB檢測條帶大小與預期有差別？ 抗體能夠用于其他種屬/實驗方法？
Q&A 常見問題： 如何選擇合適的一抗？ 如何選擇合適的二抗？ 如何選擇合適的同型對照？ 如何選擇陽性對照？ 如何確定一抗的稀釋比例？ 如何選擇合適的抗原修復方式？ 為何WB檢測條帶大小與預期有差別？ 抗體能夠用于其他種屬/實驗
制備高特異性、高效價的抗體是實驗免疫學技術的基礎，抗體質量的高低將直接影響試驗的成敗。 通過不同方法制備的抗體往往與多種雜蛋白混雜在一起，為了獲得成分相對單一的抗體或將抗體用于特定的用途，就需要進行抗體純化。抗體純化分了幾種類型，根據用途決定選擇哪種方法進行純化：1. 粗純：將制備抗體的血清
（一）實驗班簡介 為滿足研發及產業工作中的實際需求，讓從事生命科學研究與生物技術應用領域的專業人員更好、更快、更高質量地完成科研任務，納微科技將同期舉辦小分子制備色譜分離純化實驗培訓班和蛋白/抗體純化高級實驗技能培訓班。兩組實驗培訓班分別由兩組不同老師進行授課。 時間：2016.10.15-
9. 問：選擇哪個物種用于免疫接種?答：使用IgG (兔、山羊)和IgY(雞)抗體針對同一抗原的優勢：----獨立確認預期的目標蛋白質被檢測。——抗體庫具有不同的特性，在不同的技術中能起到互補的作用(免疫印跡、免疫沉淀反應等)雙重染色。----一般從遺傳角度上選擇與抗原有較遠的親源關系的物
理論上使用公認選擇的親和純化抗體可得到高特異性，高敏感度的免疫測定。然而，由于經濟原因或是缺乏合適的試劑，使得許多工作者采用低純度的制品，這種試劑通常含有與試驗中其它成分起交叉反應的抗體。現已發現在用抗人IgG抗血清的抗體時，抗體中含有不需要的抗體交叉反應。但當使用親和純的抗血清時，交叉反應不明顯。
2015年5月19日 Nature雜志從美國和加拿大幾位資深科學家的親身經歷，深度闡述了目前抗體試劑的現狀與問題，給全世界科研工作者敲響了警鐘。身為中國科研工作者，我們遇到的抗體試劑問題只怕比國外同行來得更多，當下除了抱怨，我們更應深刻反思：如何才能獲得高質量、合適的抗體試劑。 獲得高質量、合
當我們要檢測目的蛋白在組織中表達情況的時候，如何選擇適合我們實驗需要的抗體，并恰當保存使用，是每個科研人員需要細心考慮的。抗體種類繁多，品牌眾 多，技術參數不一，價格和質量更是相差甚大，如何購買到高質量價格合適的抗體，并準確地做出我們想要的結果，其中有很多細節需要注意。 一、怎樣選擇適
3.2 免 疫 B 細胞的制備血清效價有意義(>1 : 1000)的免疫后動物可以提供抗原反應性B 細胞用于融合。這些細胞可以從脾臟或淋巴結中獲得。動物用吸人CO2 處死，在無菌操作下取組織，放 在 4°C無血清培養基中，最多可放lh 。用懾子或針頭輕輕打開組織脾臟或淋巴結的外包膜獲得
當我們要檢測目的蛋白在組織中表達情況的時候，如何選擇適合我們實驗需要的抗體，并恰當保存使用，是每個科研人員需要細心考慮的。抗體種類繁多，品牌眾 多，技術參數不一，價格和質量更是相差甚大，如何購買到高質量價格合適的抗體，并準確地做出我們想要的結果，其中有很多細節需要注意。一、怎樣選擇適合你實
一、如何選擇合適的一抗請先確定您要檢測的種屬和使用的實驗方法，然后查找相關產品，根據說明書上描述的“適用種屬和實驗方法”來確定合適的抗體。如果說明書中有明確您要檢測的種屬和實驗方法均經過檢測，則您可以放心地購買該產品。二、如何選擇合適的二抗二抗的選擇原則：針對一抗Ig亞型的(比如一抗是IgM，二抗就
1、eBioscience公司提供了哪些抗體？ A：物種——人、小鼠、大鼠、非人靈長類、犬類等。檢測指標——包括細胞表面標記（CD分子，膜骨架，趨化因子受體）和胞內指標（細胞因子，核內轉錄因子）。抗體標記——生物素標記抗體，親和純化抗體以及直標熒光素抗體。eB抗體的直標熒光素有（括號內是
隨著人類基因組測序工作的基本完成，功能基因組學逐漸成為研究的熱點。而基因表達的調控又是功能基因組學的一個重要研究領域，要想提供蛋白因子直接調控的證據，需要直接檢測蛋白質-DNA的相互作用，而染色質免疫沉淀技術（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）就是一種研
如果說明書中有推薦的稀釋比例，請按照該稀釋比例進行實驗。但是由于標本類型、實驗條件、操作環境等各種因素的影響，推薦濃度僅作為參考。實驗者需要在推薦濃度周圍進行多個濃度梯度的實驗，從中發現最佳的稀釋比例。如果說明書沒有推薦稀釋比例，僅注明“Use at an assay dependent dil
3. 染色質免疫沉淀Input對照：在進行免疫沉淀前，需要取一部分斷裂后的染色質做Input對照。Input是斷裂后的基因組DNA，需要與沉淀后的樣品DNA一起經過逆轉交聯，DNA 純化，以及最后的PCR或其他方法檢測。Input對照不僅可以驗證染色質斷裂的效果，還可以根據Input中的靶序
Flag標簽系統是已被公認的用于表達、純化以及檢測融合蛋白的表達系統，廣泛應用于Western blotting、免疫細胞組化、免疫共沉淀、流式細胞術、蛋白純化以及蛋白相互作用、蛋白分離等多個研究領域。Flag標簽是一個與重組蛋白相融合的由 8個親水氨基酸（DYKDDDDK）組成的多
自身抗體診斷的標準技術是間接免疫熒光法，其特點是特異性強，陽性與陰性樣品的信號強度對比明顯，通過顯微鏡觀測能夠精確地判斷組織或細胞內熒光的分布。自身抗原的位置決定了其相應抗體的典型的熒光模式，所有與此典型模式不相關區域的染色被認為是非特異性染色。即使偶爾伴有強的
自身抗體診斷的標準技術是間接免疫熒光法，其特點是特異性強，陽性與陰性樣品的信號強度對比明顯，通過顯微鏡觀測能夠精確地判斷組織或細胞內熒光的分布。自身抗原的位置決定了其相應抗體的典型的熒光模式，所有與此典型模式不相關區域的染色被認為是非特異性染色。即使偶爾伴有強的非特異性染色，但弱的特異性信號也能夠被
Western Blot又稱為蛋白質印跡，是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的基于抗體抗原之間特異免疫反應的一種定量或定性檢測蛋白的實驗方法。基本原理：聚丙烯酰胺凝膠電泳將不同分子量的蛋白質樣品分離，分離后的蛋白被轉移到固相支撐物（雜交膜）上，抗體特異性識別目標蛋白，通過酶促反應或者化學發光等
在蛋白質純化方法中抗體親和純化是非常有效的方法之一。僅此一步常可獲得 1000～10 000 倍的純化。如果抗體與目的蛋白的結合的特異性得到證明，并且洗脫的目的蛋白沒有受到不可逆的損傷，那么可以認為免疫純化是極好的蛋白質純化方法，特別是用在純化過程的最后步驟。實驗方法原理制備免疫親和柱要求抗體首先共
⒊ 注射抗原 ⑴ 準備兩只成年兔，將100μg抗原/兔溶入1ml磷酸緩沖溶液中待用。在1ml福氏不完全佐劑中加入分枝桿菌制成完全佐劑，并加入1ml抗原溶液，劇烈震蕩使之充分乳化，用3ml注射器抽取該乳化液，接上25G針頭，排除注射器中的氣泡。從籠中取出兔子放在平坦處，在4個不同的部位進
以下問題是以Promega公司試劑盒為例。凝膠遷移實驗1)什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗？凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互
實驗概要本實驗介紹了果蠅類標本的辣根過氧化物酶標記試劑染色檢測操作流程。實驗原理果蠅類標本被固定及透化處理后，可加入抗體。如同其他免疫組化技術一樣可以直接用標記的一抗，或者通過標記的二級試劑(能與一抗特異性結合)進行檢測。一般而言，直接標記一抗產生的信號更為清晰，背景較低。不足之處在于如檢測多種抗原
當前，我國以疫苗和單抗藥物為主要領域的生物制藥研發已經初具規模，生物工程中下游的關鍵技術與配套基礎正在加速建立與完善，國際生物產業的發展也將加快向中國轉移。基因工程下游技術、蛋白質分離純化技術等作為生物技術研究與產業化中的一線技術，在新產品開發、工藝流程優化、基因工程項目規劃與實施等方面極為重要
實驗方法原理 制備免疫親和柱要求抗體首先共價結合到介質上。另一方法是將抗體結合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交聯劑固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 結合在杭體的 Fe 區， 所以結合抗原的部位獲得充分暴露，從易于接近。免疫親和柱制備完成后，抗原溶液即可以上樣，接著洗去污染物，然后洗脫抗
實驗概要本實驗介紹了三種抗體純化的方法。實驗步驟1. 抗Fab片段抗體親和層析純化法 1) 偶聯抗人或抗鼠Fab片段抗體到Protein G Sepharose，將純化的抗人或鼠Fab片段抗體以2mg/ml的比例與Protein G Sepharose凝膠珠溶液混合，