病毒DNA的提取實驗——培養細胞中病毒DNA的提取
實驗材料細胞試劑、試劑盒裂解液TE 緩沖液儀器、耗材培養瓶EP管真空泵實驗步驟1. 貼壁培養細胞傾去培養液,加 PBS 洗 2次,加胰蛋白酶消化 (37℃, 5~10 min)后移入Ep管中,2000 r/min 離心 10 min, 棄上清液,用 PBS 懸浮細胞,離心洗滌 2~3次,用 PBS 重新懸浮細胞, 3500 r/min, 棄上清液。2. 懸浮細胞的培養 移入 Ep 管中,以 2000 r/min 離心 10 min, 棄上清液,用 PBS 懸浮細胞,余下的操作同貼壁培養細胞。3. 加人 1/2 體積 2M NaCl 和 1/2 體積 20% PEG 6000( 聚乙二醇 6000), 充分混勻溶解,置于 4℃ 8~12 h 或過夜, 3500 r/min 離心 20 min, 棄上清液。4. 加 1/10 原培養液體積的裂解液,混勻, 37℃作用 2~3 h 。5. 用等體積的平衡酚抽提 1次,再用氯仿/異戊醇 ......閱讀全文
質粒DNA的大量提取和純化實驗
堿法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細菌 試劑、試劑盒 ST
血基因組DNA提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 采用特殊的細胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)從抗凝全血中得到基因組DNA。 實驗材料 抗凝全血
細菌基因組DNA提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本試劑盒采用獨特的細胞裂解和相分離技術,結合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA 的方法達到純化基因組DNA 的目的。適合于從1.0x109 細菌中獲得多至20 ug 的基因組DNA。用于PCR、Southern 印跡分析、RAPD
SDS裂解法提取質粒DNA實驗
這種溫和的方法(改進自 Godson and Vapnek 1973 ) 在處理大質粒(>15 kb ) 時較堿裂解法和煮沸法好。但溫和的代價是產量低:有相當數量的質粒 DNA 混于細胞渣滓中,在操作的早期步驟中丟失。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理這種溫和的方法(改進自
SDS裂解法提取質粒DNA實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這種溫和的方法(改進自 Godson and Vapnek 1973 ) 在處理大質粒(>15 kb ) 時較堿裂解法和煮沸法好。但溫和的代價是產量低:有相當數量的質粒 DNA 混于細胞渣滓中,在操作的早期步驟中丟失。
細菌基因組DNA提取實驗
實驗方法原理 本試劑盒采用獨特的細胞裂解和相分離技術,結合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA 的方法達到純化基因組DNA 的目的。適合于從1.0×109 細菌中獲得多至20 μg 的基因組DNA。用于PCR、Southern 印跡分析、RAPD、RFLD 等分子生物學實驗。實驗材料 細菌培養物
血基因組DNA提取實驗
實驗方法原理 本試劑盒采用特殊的細胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)從抗凝全血中得到基因組DNA。適用于從凍全血、血漿、血清、骨髓、其他體液、淋巴細胞、培養細胞、病毒和線粒體中提取DNA。實驗材料 抗凝全血試劑、試劑盒 血基因組DNA 試劑盒儀器、耗材 96孔深孔板96圓孔板96孔DNA制備板
SDS裂解法提取質粒DNA實驗
實驗方法原理 這種溫和的方法(改進自 Godson and Vapnek 1973 ) 在處理大質粒(>15 kb ) 時較堿裂解法和煮沸法好。但溫和的代價是產量低:有相當數量的質粒 DNA 混于細胞渣滓中,在操作的早期步驟中丟失。試劑、試劑盒 抗生素氯霉素氯仿EDTA乙醇NaClSDSSTETri
細菌基因組DNA提取實驗
細菌基因組DNA提取可應用于:(1)獲得細菌基因組DNA;(2)作為PCR模板;(3)用于測序、遺傳信息分析等。實驗方法原理本試劑盒采用獨特的細胞裂解和相分離技術,結合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA 的方法達到純化基因組DNA 的目的。適合于從1.0x109?細菌中獲得多至20 ug 的基因組DN
病毒RNA提取實驗方法(protocol)
1,用異硫氰酸胍提取提禽流感病毒的詳細步驟,可參考(我提過N次做定量PCR都沒問題):1.取200ul樣品數+陰性對照+陽性對照個1.5ml滅菌eppendorf管2.加600ul異硫氰酸胍,然后加入對照和樣品,再加200ul氯仿,顛倒混勻3.13000rpm離心15min4.在第3步離心快結束時,
BIOG病毒DNA提取試劑盒使用說明
BIOG病毒DNA提取試劑盒說明書(中量)?????????????????????????????????????????運輸條件:常溫運輸 ??????????????貨 ???號:51019-M:?10次反應??????????51020-M:?20次反應 ??????????????????
核酸提取——RNA提取與DNA的提取
核酸分為兩大類:一類為核糖核酸(RNA),另一類為脫氧核糖核酸(DNA)。核酸的分子量極大,從數萬到億萬。核酸是兩性化合物,在一定的等電點溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有機溶劑。細胞內的核酸常和蛋白質結合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質溶液中 的溶解度有顯著區別,在一定濃
核酸提取——RNA提取與DNA的提取
核酸分為兩大類:一類為核糖核酸(RNA),另一類為脫氧核糖核酸(DNA)。核酸的分子量極大,從數萬到億萬。核酸是兩性化合物,在一定的等電點溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有機溶劑。細胞內的核酸常和蛋白質結合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質溶液中 的溶解度有顯著區別,在一定濃
DNA提取中EB的去除實驗方法
Removal of Ethidium Bromide from DNA by Extraction with Organic SolventsJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourn
粗提取植物DNA的實驗步驟和原理
提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理:CTAB是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物,只是不能沉淀核酸。通過有機溶劑抽提,去除蛋白,多糖,酚類等雜質后加入乙醇沉淀即可使核酸分
實驗中提取質粒DNA時的注意點
提取質粒的時候,最后一步的酒精揮發很關鍵,基本上是其后續的酶切反應的決定性因素。所以這一步盡量揮發長一點時間,最好是空調吹熱風,或是37度溫箱放長一點的時間,我試過室溫過夜,酶切很好。將amp濃度提高到200ug/ml,下班前接種,次日一早收獲菌體,此時OD雖然不高,質粒豐度卻不一般。菌體量少些,操
質粒DNA提取實驗——SDS堿裂解法(試劑盒提取)
實驗方法原理堿裂解法是一種應用最為廣泛的制備質粒DNA的方法,堿變性抽提質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH值高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會完全分離
血液DNA的提取
Part A: Purifying nuclear pellets.1) Add 50-60μl fresh, packed red blood cells (RBC) to 700μl PBS. Mix by inversion.2) Add 700-800μl Lysis buffer. Clo
真菌DNA的提取
1.實驗試劑 (1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1%SDS (2)3M NaAc (3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA (4)酚(pH8.0):氯仿:異戊醇(25:
DNA的提取方法
一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速離心后取上清,所得DNA大小為100-150kb二.甲酰胺解聚法:破碎細胞同上,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪于乙醇上,
質粒DNA的提取
實驗概要? ? ? ? 通過本實驗學習和掌握堿裂解法提取質粒。實驗原理? ? ? ? ?堿裂解法提取質粒是根據共價閉合環狀質粒DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們。在pH值介于12.0~12.5這個狹窄的范圍內,線性的DNA雙螺旋結構解開而被變性,盡管在這樣的條件下,共價閉環質粒DNA
DNA提取的原理
原理:1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。2.用冷酒精提取出含雜質較少的DNA。3.DNA在沸水浴時被二苯胺染成藍色。方法步驟:1.提取細胞核物質:順時針方向攪拌,稍快,稍重。5min2.溶解DNA:3.析出含DNA的黏稠物:蒸餾水300mL,逆時針方向攪拌,緩慢4.過濾:取黏稠物5.再溶解:順時
種子DNA提取儀對云南紫蘇的種子DNA提取
云南各地收集到20份紫蘇品種并進行了多年的栽培和經濟性狀評估,發現在紫蘇種內存在 著豐富的遺傳變異,并且已用形態聚類分析的方法對云南境內紫蘇的種下變異進行了探討,將其分為5個變種。由于形態特征是基因型和環境相互作用的產物,紫蘇 的形態聚類分析結果僅從表現型上間接地反映出了云南境內紫蘇的遺傳多樣性。試
種子DNA提取儀是種子DNA提取的好方法
??? 隨著社會和科技的發展,在種子研究等領域,快速而經濟的從種子樣品中提取高產量、高純度的基因組DNA已經成為植物分子生物學研究的首要問題,過去傳統的種子DNA提取方法非常復雜,需要用到大量的試劑,容器等,提取所需要花費的時間也非常長,因此是明顯不符合現代科學研究的發展需要的,而種子DNA提取
血基因組DNA提取實驗——血基因組DNA-試劑盒提取法
血基因組DNA提取可用于:(1)從凍全血、血漿、血清、骨髓、其他體液、淋巴細胞、培養細胞、病毒和線粒體中提取DNA;(2)用于后續測序、遺傳信息學等研究。實驗方法原理采用特殊的細胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)從抗凝全血中得到基因組DNA。實驗材料抗凝全血試劑、試劑盒血基因組DNA 試劑盒儀
用于PCR的模板DNA制備實驗——改進的石蠟切片-DNA-提取方法
實驗步驟1. 5 μm 厚的石蠟切片 5 至 10 張貼在干凈的載玻片上,常規烘片,脫蠟,水化,蒸餾水清洗,無菌蒸餾水浸泡,取出晾至半干。2. 無菌尖頭刀片刮下,放入 300~900 μl 組織裂解液中,并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K(PK)10~15 μl,封口膜封口,置 55℃ 3 h 以
DNA怎么提取
DNA提取的幾種方法(1).濃鹽法利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間,而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽
DNA提取儀
DNA提取儀也叫核酸純化儀,是應用配套的核酸提取試劑來自動完成樣本核酸的提取工作的儀器。
DNA提取原則
1.保證核酸一級結構的完整性;2.核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子;3.其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到最低程度;4.其他核酸分子,如RNA,也應盡量去除。
一種簡單實用的提取植物DNA實驗
實驗方法原理的提取是植物分子生物學和基因工程研究的一種基本的技術,至今已有了數種方法。此方法最大的特點是:將SDS同時用作細胞膜的去污劑和蛋白質的變性劑,變性的蛋白質通過離心而不是酚抽提除去,使得整個操作過程變得簡單快捷,比較溫和,1小時左右就可以獲得純化的植物DNA。用這種方法得到的DNA能直接被