植物體內多酚氧化酶活性的測定實驗
實驗方法原理多酚氧化酶是一種含銅的氧化酶,在有氧的條件下,能使一元酚和二元酚氧化產生醌。用分光光度法在525nm波長下測其吸光度,即可計算出多酚氧化酶的活力和比活性。反應式如下:.實驗材料馬鈴薯塊莖試劑、試劑盒聚乙烯吡咯烷酮磷酸緩沖液磷酸緩沖液和度硫酸銨兒茶酚三氯乙酸儀器、耗材UV-1206UV-1240分光光度計離心機恒溫水浴研缽或勻漿機試管移液管紗布袋實驗步驟1. 粗酶液的制備稱取馬鈴薯塊莖5g于研缽中,加入0.5g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮(事先用蒸餾水浸洗,然后過濾以除去雜質)和100 ml 0.1mol·L-1pH6.5磷酸緩沖液,磨成勻漿,用幾層紗布袋過濾,濾液加入30%飽和度硫酸銨,離心除沉淀,上清液再加硫酸銨使達60%飽和度,離心收集沉淀。將所得沉淀溶于2~3 ml 0.01mol·L-1 pH6.5磷酸緩沖液中,即為粗制酶液。2. 活性酶的測定在試管中加入3.9 ml 0.05 mol·L-1 pH5.5磷酸緩沖液......閱讀全文
植物體內多酚氧化酶活性的測定實驗
實驗方法原理多酚氧化酶是一種含銅的氧化酶,在有氧的條件下,能使一元酚和二元酚氧化產生醌。用分光光度法在525nm波長下測其吸光度,即可計算出多酚氧化酶的活力和比活性。反應式如下:. ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?實驗材料馬鈴薯塊莖 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
植物體內多酚氧化酶活性的測定實驗
實驗方法原理多酚氧化酶是一種含銅的氧化酶,在有氧的條件下,能使一元酚和二元酚氧化產生醌。用分光光度法在525nm波長下測其吸光度,即可計算出多酚氧化酶的活力和比活性。反應式如下:.實驗材料馬鈴薯塊莖試劑、試劑盒聚乙烯吡咯烷酮磷酸緩沖液磷酸緩沖液和度硫酸銨兒茶酚三氯乙酸儀器、耗材UV-1206UV-1
植物體內多酚氧化酶活性的測定實驗
實驗方法原理?多酚氧化酶是一種含銅的氧化酶,在有氧的條件下,能使一元酚和二元酚氧化產生醌。用分光光度法在525nm波長下測其吸光度,即可計算出多酚氧化酶的活力和比活性。反應式如下:.實驗材料?馬鈴薯塊莖試劑、試劑盒?聚乙烯吡咯烷酮磷酸緩沖液磷酸緩沖液和度硫酸銨兒茶酚三氯乙酸儀器、耗材?UV-1206
多酚氧化酶的活性測定方法
常用檢壓法和分光光度法。前者應用多酚氧化酶(PPO)可催化兒茶素等底物在有氧條件下的氧化還原反應,根據底物的氧化速率與單位酶濃度和單位時間內的耗氧量成正比這一原理,用瓦氏呼吸儀測定反應過程中的耗氧量求得PPO活性的大小,此方法設備簡便,但操作復雜,誤差較大。后者利用鄰苯二酚和D-兒茶素在PPO催化下
植物體內抗壞血酸氧化酶活性的測定實驗
實驗方法原理 抗壞血酸氧化酶在有氧情況下,能氧化抗壞血酸成脫氫抗壞血酸,同時促進其氫與空氣中的氧結合成水。抗壞血酸氧化酶的測定是在該酶的最適pH及適宜的溫度下,向反應瓶中加入一定量的底物(抗壞血酸)及酶提取液,讓酶作用一段時間,然后測定底物被消耗的數量來計算酶的活性。抗壞血酸被消耗的量,可用碘液滴定
植物體內抗壞血酸氧化酶活性的測定實驗
實驗方法原理抗壞血酸氧化酶在有氧情況下,能氧化抗壞血酸成脫氫抗壞血酸,同時促進其氫與空氣中的氧結合成水。抗壞血酸氧化酶的測定是在該酶的最適pH及適宜的溫度下,向反應瓶中加入一定量的底物(抗壞血酸)及酶提取液,讓酶作用一段時間,然后測定底物被消耗的數量來計算酶的活性。抗壞血酸被消耗的量,可用碘液滴定剩
植物體內抗壞血酸氧化酶活性的測定實驗
實驗方法原理抗壞血酸氧化酶在有氧情況下,能氧化抗壞血酸成脫氫抗壞血酸,同時促進其氫與空氣中的氧結合成水。抗壞血酸氧化酶的測定是在該酶的最適pH及適宜的溫度下,向反應瓶中加入一定量的底物(抗壞血酸)及酶提取液,讓酶作用一段時間,然后測定底物被消耗的數量來計算酶的活性。抗壞血酸被消耗的量,可用碘液滴定剩
多酚氧化酶活性的測定(氧電極法)
? 原理 ? 多酚氧化酶是一種含銅的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化生成醌。多酚氧化酶活性可以用氧電極測量反應耗氧的速度,或用比色法測量產物的形成,常用的底物如兒茶酚(鄰苯二酚)和多巴(3,4-二羥苯丙氨酸)。 ? ? 儀器藥品 ? 測氧儀
植物中的多酚氧化酶及作用
在植物(如蘋果、荔枝、菠菜、馬鈴薯、豆類、茶葉、桑葉、煙草等)組織中,PPO是與內囊體膜結合在一起的,天然狀態無活性,但將組織勻漿或損傷后PPO被活化,從而表現出活性。在果蔬細胞組織中,PPO存在的位置因原料的種類、品種及成熟度的不同而有差異,綠葉中PPO活性大部分存在于葉綠體內;馬鈴薯塊莖中幾乎所
植物中的多酚氧化酶及作用
在植物(如蘋果、荔枝、菠菜、馬鈴薯、豆類、茶葉、桑葉、煙草等)組織中,PPO是與內囊體膜結合在一起的,天然狀態無活性,但將組織勻漿或損傷后PPO被活化,從而表現出活性。在果蔬細胞組織中,PPO存在的位置因原料的種類、品種及成熟度的不同而有差異,綠葉中PPO活性大部分存在于葉綠體內[7];馬鈴薯塊
植物中的多酚氧化酶及作用
在植物(如蘋果、荔枝、菠菜、馬鈴薯、豆類、茶葉、桑葉、煙草等)組織中,PPO是與內囊體膜結合在一起的,天然狀態無活性,但將組織勻漿或損傷后PPO被活化,從而表現出活性。在果蔬細胞組織中,PPO存在的位置因原料的種類、品種及成熟度的不同而有差異,綠葉中PPO活性大部分存在于葉綠體內[7];馬鈴薯塊莖中
多酚氧化酶的純化和活力測定
實驗原理很多植物受到機械損傷時在空氣中會逐漸變成褐色,這是損傷時植物細胞破碎,原來彼此分開的多酚氧化酶和多酚類物質接觸反應的結果。反應如下: +H2O 多酚氧化酶 +1/2O2 多酚氧化酶(po1yphenoloxidase,PP0)是一種含銅酶,它能夠催化酚類物質轉變成
多酚氧化酶的提取、純化和活力測定
實驗概要本文介紹了多酚氧化酶提取、純化和活力測定的原理及方法等。實驗原理很多植物受到機械損傷時在空氣中會逐漸變成褐色,這是損傷時植物細胞破碎,原來彼此分開的多酚氧化酶和多酚類物質接觸反應的結果。反應如下:+H2O多酚氧化酶+1/2O2多酚氧化酶(po1yphenoloxidase,PP0)是一種含銅
多酚氧化酶的提取、純化和活力測定
實驗概要本文介紹了多酚氧化酶提取、純化和活力測定的原理及方法等。實驗原理很多植物受到機械損傷時在空氣中會逐漸變成褐色,這是損傷時植物細胞破碎,原來彼此分開的多酚氧化酶和多酚類物質接觸反應的結果。反應如下:+H2O多酚氧化酶+1/2O2多酚氧化酶(po1yphenoloxidase,PP0)是一種含銅
離體法植物體內硝酸還原酶活性的測定實驗
實驗方法原理 硝酸還原酶(NR)催化植物體內的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,產生的亞硝酸鹽與對-氨基苯磺酸(或對-氨基苯磺胺)及α-萘胺(或萘基乙烯二胺)在酸性條件下定量生成紅色偶氮化合物。其反應如下:生成的紅色偶氮化合物在520nm有最大吸收峰,可用分光光度法測定。硝酸還原酶活性可由產生的亞硝態氮的量表示
離體法植物體內硝酸還原酶活性的測定實驗
實驗方法原理硝酸還原酶(NR)催化植物體內的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,產生的亞硝酸鹽與對-氨基苯磺酸(或對-氨基苯磺胺)及α-萘胺(或萘基乙烯二胺)在酸性條件下定量生成紅色偶氮化合物。其反應如下: 生成的紅色偶氮化合物在520nm有最大吸收峰,可用分光光度法測定。硝酸還原酶活性可由產生的亞硝態氮的量表示
離體法植物體內硝酸還原酶活性的測定實驗
實驗方法原理硝酸還原酶(NR)催化植物體內的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,產生的亞硝酸鹽與對-氨基苯磺酸(或對-氨基苯磺胺)及α-萘胺(或萘基乙烯二胺)在酸性條件下定量生成紅色偶氮化合物。其反應如下:生成的紅色偶氮化合物在520nm有最大吸收峰,可用分光光度法測定。硝酸還原酶活性可由產生的亞硝態氮的量表示。
多酚氧化酶的制備方法
由絲狀菌(Alternaria; Asp. niger; Corio-lus)或擔子菌(Cyathus; Polyporus cinereus; Pycno porus coc-cineus; Polyporus; Trametes) 的培養液,用室溫以下的水提取后,再在低溫下用冷的乙醇、含水乙醇或
多酚氧化酶的制備方法
由絲狀菌(Alternaria; Asp. niger; Corio-lus)或擔子菌(Cyathus; Polyporus cinereus; Pycno porus coc-cineus; Polyporus; Trametes) 的培養液,用室溫以下的水提取后,再在低溫下用冷的乙醇、含水乙醇或
多酚氧化酶的檢測方法
活性測定常用檢壓法和分光光度法。前者應用多酚氧化酶(PPO)可催化兒茶素等底物在有氧條件下的氧化還原反應,根據底物的氧化速率與單位酶濃度和單位時間內的耗氧量成正比這一原理,用瓦氏呼吸儀測定反應過程中的耗氧量求得PPO活性的大小,此方法設備簡便,但操作復雜,誤差較大。后者利用鄰苯二酚和D-兒茶素在PP
多酚氧化酶的研究方向
PPO與抗病性的關系人們已進行了廣泛的研究[32]。植物在抵御病原微生物的侵染過程中,抗性相關酶發揮了重要作用,這主要包括了酚類代謝系統中的一些酶和病原相關蛋白家族PPO通過催化木質素及醌類化合物形成,構成保護性屏蔽而使細胞免受病菌的侵害,也可以通過形成醌類物質直接發揮抗病作用。目前已比較成功的有:
關于多酚氧化酶的簡介
多酚氧化酶是一類含銅的氧化還原酶。編號:EC 1.10.3.1(編號:EC 1.14.18.1)。催化鄰苯二酚氧化成鄰苯二醌,也能作用于單酚單加氧酶的底物。淡黃至暗褐色粉末或液體。溶于水,不溶于乙醇。有吸濕性。相對分子質量約為125000,最適pH為6.5,最適溫度為2℃。 多酚氧化酶是種末端
多酚氧化酶的研究歷史
多酚氧化酶(,PPO)是自然界中分布極廣的一種金屬蛋白酶,普遍存在于植物、真菌、昆蟲的質體中,甚至在土壤中腐爛的植物殘渣上都可以檢測到多酚氧化酶的活性。由于其檢測方便,是被最早研究的幾類酶之一。自1883年Yoghid發現日本漆樹液汁變硬可能和某種活性物質相關,1938年Keilin D.和Mann
植物體內過氧化物酶活性的測定實驗
實驗方法原理在過氧化氫存在下,過氧化物酶能使愈創木酚氧化,生成茶竭色4-鄰甲氧基苯酚,在470nm波長處測定生成物的吸光度(A)值,即可求出該酶活性。實驗材料植物葉片試劑、試劑盒磷酸緩沖液愈創木酚儀器、耗材分光光度計離心機離心管研缽移液管移液管架試管試管架洗耳球實驗步驟一、材料、儀器設備及試劑1.
植物體內過氧化物酶活性的測定實驗
實驗方法原理?在過氧化氫存在下,過氧化物酶能使愈創木酚氧化,生成茶竭色4-鄰甲氧基苯酚,在470nm波長處測定生成物的吸光度(A)值,即可求出該酶活性。實驗材料?植物葉片試劑、試劑盒?磷酸緩沖液愈創木酚儀器、耗材?分光光度計離心機離心管研缽移液管移液管架試管試管架洗耳球實驗步驟 一、材料、儀器設備及
植物體內過氧化物酶活性的測定實驗
實驗方法原理在過氧化氫存在下,過氧化物酶能使愈創木酚氧化,生成茶竭色4-鄰甲氧基苯酚,在470nm波長處測定生成物的吸光度(A)值,即可求出該酶活性。實驗材料植物葉片 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒磷酸緩
植物體內可溶性的測定(福林-酚法)
實驗概要本文介紹了福林-酚法測定植物體內可溶性蛋白質含量的原理及操作步驟等。實驗原理該方法是雙縮脲法的發展,包括兩步反應:1. 在堿性條件下,蛋白質與銅作用生成蛋白質—銅絡合物。2. ? 此絡合物將試劑磷鉬酸—磷鎢酸(FolIn試劑)還原,混合物深藍色(磷鉬藍和磷鎢藍混合物),顏色深淺與蛋白質含量成
多酚氧化酶(PPO)的分離提取
一、原理與目的多酚氧化酶是植物組織內廣泛存在的一種含銅氧化酶,植物受到機械損傷和病菌侵染后,PPO催化酚與O2氧化形成醌,是組織形成褐變,以便損傷恢復,防止或減少感染,提高抗病能力。醌類物質對微生物有毒害作用,所以傷口醌類物質出現是植物防止傷口感染的愈傷反應,因而受傷組織一般這種酶的活性就會提高。多
多酚氧化酶的理化性質
酶蛋白具有一般蛋白質的特性,在高溫或低溫條件下有易變性失活的特點。各類酶均有其活性的最適溫度范圍,一般在30C~50℃范圍內酶活性最強。酶若失活、變性,則就喪失了催化能力。酶的催化作用具有專一性,如多酚氧化酶,只能使茶多酚物質氧化,聚合成茶多酚的氧化產物茶黃素、茶紅素和茶褐素等;蛋白酶只能促使蛋白質
多酚氧化酶的理化性質
酶蛋白具有一般蛋白質的特性,在高溫或低溫條件下有易變性失活的特點。各類酶均有其活性的最適溫度范圍,一般在30C~50℃范圍內酶活性最強。酶若失活、變性,則就喪失了催化能力。酶的催化作用具有專一性,如多酚氧化酶,只能使茶多酚物質氧化,聚合成茶多酚的氧化產物茶黃素、茶紅素和茶褐素等;蛋白酶只能促使蛋白質