DNAladder法檢測細胞凋亡
實驗概要發生細胞凋亡時，內源性核酸酶被激活，染色體DNA鏈在核小體之間被切割，形成180～200個堿基或其整數倍的DNA片段，將這些DNA片段抽提出來進行電泳，可得到DNA梯狀條帶（DNA ladder）。主要試劑蛋白酶K（500μg/ml）8mol/L 醋酸鉀白細胞裂解液：pH8.0，10mmol/L Tris-HCl，10mmol/L NaCl，10mmol/L EDTA，1% SDS氯仿無水乙醇，70%乙醇2%瓊脂糖凝膠實驗材料凋亡細胞 實驗步驟1. 收集凋亡細胞：取1～2×106 個細胞，離心后，立即用70%酒精（-20℃）固定2h；2. 洗滌：取出酒精固定的細胞，1000r/min離心5min ，去掉上清液，PBS洗二次；3. 裂解細胞：加400μl細胞裂解液，充分混勻再加蛋白酶K100μl，置65℃水浴消化2小時或過夜；4. 蛋白處理：加75μl 8mol/L的醋酸鉀......閱讀全文
簡述TUNEL檢測的原理
細胞在發生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發現180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transfe
TUNEL檢測的基本原理介紹
細胞在發生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發現180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transfe
TUNEL檢測的原理
細胞在發生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發現180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transfera
TUNEL檢測的實驗原理
細胞在發生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發現180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transfera
Engineering－BioBrick－vectors－from－BioBrick－parts/Colony－PCR
MaterialsPCR SuperMix High FidelityVF2 primer (5''-TGCCACCTGACGTCTAAGAA-3'')VR primer (5''-ATTACCGCCTTTGAGTGAGC-3'')De
請問PCR電泳分析是內參和marker有什么區別么
不太一樣。內參是相對定量用的，marker是定大小的。內參一般是RT-PCR用的，當底物是cDNA文庫這種混合物時，除了擴增目的片段，往往還要擴增一個內參。內參一般選擇細胞內的管家基因，表達量不會隨著細胞狀態而變化的，如U6，GAPDH等。由于PCR定量結果受底物影響較大，槍不準或者操作不當帶來的很
An－Integrative－Procedure－for－Apoptosis－Identification－and－Measurement
IntroductionApoptosis is a normal physiological phenomenon put forward by Kerr [1]. It plays an important role in embryonic development, maintenance o
細胞凋亡小體和梯狀DNA的觀察(1)
一、實驗目的 1 掌握誘導細胞凋亡和觀察細胞凋亡小體的方法 2 掌握DNA電泳檢測方法，證明凋亡細胞DNA Ladder的存在。 細胞死亡作為生物體的一種常見現象，一般可分為兩種類型：細胞壞死（necrosis）和細胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）。后者也
內切酶的特性、酶解與瓊脂糖凝膠電泳
學習和掌握限制性內切酶的特性、酶解和瓊脂糖凝膠電泳的操作方法，理解限制性內切酶是DNA重組技術的關鍵工具，瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定DNA片段的有效方法。限制性核酸內切酶：是一類能識別雙鏈DNA分子特異性核酸序列的DNA水解酶。是體外剪切基因片段的重要工具，所以常常與核酸聚合酶、連接酶以及末端修飾酶等
Top－10－Fun－Facts－for－DNA－Electrophoresis
Did you know:When preparing agarose for electrophoresis, it is best to sprinkle the agarose into room-temperature buffer, swirl, and let sit at least
細胞凋亡途徑
凋亡信號通路當細胞接受凋亡信號分子(Fas,TNF等)后，凋亡細胞表面信號分子受體相互聚集并與細胞內的銜接蛋白(Adaptor protein)結合，這些銜接蛋白又募集Procaspases聚集在受體部位，Procaspase相互活化并產生級聯反應，使細胞凋亡。·下游Caspases活化后，作用底物
hoechst－和tunel法檢測細胞凋亡的區別
hoechst法看凋亡，主要是看sub-G1期的細胞數量。原理就是凋亡的細胞，由于DNA正在降解，所以含量比正常細胞要少。在以PI熒光強度（代表DNA量）為橫坐標的柱狀圖上，一般會有2個峰，G1和G2，G1就是正常細胞，G2是正在分裂的2倍體。2者間是S期細胞。如果有凋亡的細胞，在G1前會有細胞出現
實時熒光定量PCR具體實驗步驟（二）
5 制備用于繪制梯度稀釋標準曲線的DNA模板①針對每一需要測量的基因，選擇一確定表達該基因的cDNA模板進行PCR反應。反應體系：序號? 反應物? 劑量1? 10× PCR緩沖液? 2.5 ul2? MgCl2 溶液? 1.5 ul3? 上游引物F? 0.5 ul4? 下游引物R? 0.5 ul5?
Gene－splicing－and－mutagenesis－by－PCRdriven－overlap－extension
實驗概要? ? ? ? Extension of overlapping gene segments by PCR is a simple, versatile technique for site-directed mutagenesis and gene splicing.Initial
用ReadyMixTM－PCR－Reaction－Mix進行擬南芥SSLP
用ReadyMix TM?PCR?Reaction Mix 進行擬南芥SSLP （32 個樣品+3 個對照）一、PCR采用SIGMA REDTaq? ReadyMixTM PCR Reaction Mix提供的 試劑 （包括20 mM Tris-HCl, pH 8.3, 100 mM KCl, 3
Guide－to－Cell－Proliferation－and－Apoptosis－Methods
Chapter 1: Cell Death - Apoptosis and Necrosis 1.1 Introduction 2 1.1.1 Terminology of cell death 2 1.1.2 Differences between necros
不接觸染料也能進行DNA電泳的分析
?問：您是否為EB有毒，安全染料貴的問題而煩惱？答：試試李記生物的DNA電泳套裝吧 !圖1：I、Hela細胞與EB,李記套裝的上樣buffer及李記GelRed在室溫下孵育一小時，用Olympus熒光顯微鏡觀察并拍照，與EB孵育的細胞顯示出綠色熒光，表明染料已透過細胞膜進入細胞并與核酸結合。李記套裝
細胞凋亡與壞死的區別
壞死形態學特征-膜完整性喪失,胞漿和線粒體膨脹 ,全細胞裂解生化特征-離子內環境失調,非能量依賴性的（被動過程，在4°C也可以發生）,隨機消化DNA（電泳顯示為DNA彌散狀態）,Postlytic DNA斷裂生理學特征-影響群組細胞 由非生理學因素引起（如補體攻擊、代謝中毒、缺氧等）,被巨噬細胞吞噬
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA序列測定2
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法（雙脫氧鏈終止法）和Maxam（1977）提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都同樣生成相互獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸，每組核苷酸都有共同的起點，卻隨機終止于一種（或多種）特定的殘基，形成一系列以某一特定核苷酸
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA序列測定3
2．利用末端轉移酶和α-32P-ddNTP標記DNA的3ˊ-末端 在二價陽離子存在下，末端轉移酶催化dNTP加入DNA分子的3ˊ-羥基末端，如果作為底物的核苷酸經過修飾（如ddNTP），則可以在DNA的3ˊ-OH上僅加入一個核苷酸。對于雙鏈DNA片段，亦存在DNA的兩側均被標記問題，可通過上述同
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA序列測定1
㈣ DNA聚合酶 如前所述，選用合適的DNA聚合酶進行測序反應也是保證測序質量的重要因素之一。常用于雙脫氧末端終止法測序的有幾種不同的酶： 1．大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow片段） 此酶是最早用于建立Sanger測序的酶。但通常會有兩個問題：①Klenow片段的持續合成能力較
Cloning－of－small－RNAs－with－5’－phosphate－and－3’－OH－ends3
Load your precipitated PCR samples into 2 consecutive lanes so as not to overload the lanes. For each different sample, I would run a separate ladder
DNA重組技術(DNA－Recombination)
一、DNA 的酶切與連接（1）酶切反應：同質粒DNA 的鑒定，只不過是質粒DNA 換為載體DNA 。若大量酶切，則成比例增加。（2）加2倍體積的預冷無水乙醇和1/10體積的3mol/l NaAc混勻，-20℃2h以上。（3）15000rpm離心15min，棄上清。（4）加入75%乙醇洗滌2次，離心棄
檢測細胞凋亡的實驗方法比較3
◆ 細胞壞死與細胞凋亡細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞凋亡形式，根據死亡細胞在形態學、生物化學和分子生物學上的差別，可以將二者區別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多，下面介紹幾種常用的測定方法。?一、細胞凋亡的形態學檢測? 根據凋亡細胞固有的形態特征，人們已經設計了許多不同的細胞凋亡形態學檢測方法。
概述細胞凋亡的生物化學變化
1)DNA的片段化 細胞凋亡的一個顯著特點是細胞染色體的DNA降解，這是一個較普遍的現象。這種降解非常特異并有規律，所產生的不同長度的DNA片段約為180-200bp的整倍數，而這正好是纏繞組蛋白寡聚體的長度，提示染色體DNA恰好是在核小體與核小體的連接部位被切斷，產生不同長度的寡聚核小體
細胞凋亡的生物化學變化
1)DNA的片段化細胞凋亡的一個顯著特點是細胞染色體的DNA降解，這是一個較普遍的現象。這種降解非常特異并有規律，所產生的不同長度的DNA片段約為180-200bp的整倍數，而這正好是纏繞組蛋白寡聚體的長度，提示染色體DNA恰好是在核小體與核小體的連接部位被切斷，產生不同長度的寡聚核小體片段，實驗證
細胞凋亡的生物化學變化
1)DNA的片段化細胞凋亡的一個顯著特點是細胞染色體的DNA降解，這是一個較普遍的現象。這種降解非常特異并有規律，所產生的不同長度的DNA片段約為180-200bp的整倍數，而這正好是纏繞組蛋白寡聚體的長度，提示染色體DNA恰好是在核小體與核小體的連接部位被切斷，產生不同長度的寡聚核小體片段，實驗證
細胞凋亡的生物化學變化
1)DNA的片段化細胞凋亡細胞凋亡的一個顯著特點是細胞染色體的DNA降解，這是一個較普遍的現象。這種降解非常特異并有規律，所產生的不同長度的DNA片段約為180-200bp的整倍數，而這正好是纏繞組蛋白寡聚體的長度，提示染色體DNA恰好是在核小體與核小體的連接部位被切斷，產生不同長度的寡聚核小體片段
Electrophoresis－of－PCR－products－with－Sunrise－gel－apparatus
Electrophoresis of PCR products with Life Technologies Sunrise gel apparatusGel:?In a 500 ml Pyrex? glass bottle, add:Agarose:3 gH2O270 mls10X TA30 ml
細胞凋亡檢測(AnnexinVFITC－單染法)2
2 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡一般以細胞核染色質的形態學改變為指標來評判細胞凋亡的進展情況。常用的DNA 特異性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種染料與 DNA 的結合是非嵌入式的，主要結合在DNA 的A