DNAladder法檢測細胞凋亡
實驗概要發生細胞凋亡時，內源性核酸酶被激活，染色體DNA鏈在核小體之間被切割，形成180～200個堿基或其整數倍的DNA片段，將這些DNA片段抽提出來進行電泳，可得到DNA梯狀條帶（DNA ladder）。主要試劑蛋白酶K（500μg/ml）8mol/L 醋酸鉀白細胞裂解液：pH8.0，10mmol/L Tris-HCl，10mmol/L NaCl，10mmol/L EDTA，1% SDS氯仿無水乙醇，70%乙醇2%瓊脂糖凝膠實驗材料凋亡細胞 實驗步驟1. 收集凋亡細胞：取1～2×106 個細胞，離心后，立即用70%酒精（-20℃）固定2h；2. 洗滌：取出酒精固定的細胞，1000r/min離心5min ，去掉上清液，PBS洗二次；3. 裂解細胞：加400μl細胞裂解液，充分混勻再加蛋白酶K100μl，置65℃水浴消化2小時或過夜；4. 蛋白處理：加75μl 8mol/L的醋酸鉀......閱讀全文
DNA－Ladder的概念
DNA Ladder是指細胞凋亡時DNA在核小體間斷裂 (DNA fragmentation ) 形成一些DNA片斷， 經過提取和純化后在凝膠電泳上產生n條帶，由于這些DNA條帶經染色并成像之后的整體類似于梯子上的一個個踩踏板。
DNA－Ladder的概念
DNA Ladder是指細胞凋亡時DNA在核小體間斷裂 (DNA fragmentation ) 形成一些DNA片斷， 經過提取和純化后在凝膠電泳上產生n條帶，由于這些DNA條帶經染色并成像之后的整體類似于梯子上的一個個踩踏板。
DNA－Ladder的功能介紹
DNAladder的形成與細胞調亡密不可分 同時也是判斷細胞凋亡的重要標準DNA ladder的形成是連接核小體間的DNA被切割，形成質量不同的片段，由于切割是隨機的，各片段的質量不同，但都是一個核小體所含DNA的倍數，形成梯度，經過電泳，從而使分子量不同的部分形成梯度。DNA Ladder是一種即
DNA－ladder法檢測細胞凋亡
實驗概要發生細胞凋亡時，內源性核酸酶被激活，染色體DNA鏈在核小體之間被切割，形成180～200個堿基或其整數倍的DNA片段，將這些DNA片段抽提出來進行電泳，可得到DNA梯狀條帶（DNA ladder）。主要試劑蛋白酶K（500μg/ml）8mol/L?醋酸鉀白細胞裂解液：pH8.0，10mmol
DNA－ladder法檢測細胞凋亡
發生細胞凋亡時，內源性核酸酶被激活，染色體DNA鏈在核小體之間被切割，形成180～200個堿基或其整數倍的DNA片段，將這些DNA片段抽提出來進行電泳，可得到DNA梯狀條帶（DNA ladder）。一、材料與試劑凋亡細胞；蛋白酶K（500μg/ml）8mol/L 醋酸鉀白細胞裂解液：pH8.0，10
DNA－ladder法檢測細胞凋亡
發生細胞凋亡時，內源性核酸酶被激活，染色體DNA鏈在核小體之間被切割，形成180～200個堿基或其整數倍的DNA片段，將這些DNA片段抽提出來進行電泳，可得到DNA梯狀條帶（DNA ladder）。一、材料與試劑凋亡細胞；蛋白酶K（500μg/ml）8mol/L 醋酸鉀白細胞裂解液：pH8.0，10
細胞凋亡檢測實驗——DNA－ladder法
實驗方法原理發生細胞凋亡時，內源性核酸酶被激活，染色體DNA鏈在核小體之間被切割，形成180～200個堿基或其整數倍的DNA片段，將這些DNA片段抽提出來進行電泳，可得到DNA梯狀條帶（DNA ladder）。?實驗材料凋亡細胞試劑、試劑盒蛋白酶K醋酸鉀白細胞裂解液Tris-HClNaClEDTAS
DNA－Ladder的測定方法是怎么一回事？
不同細胞不同狀態是有不同死法的，具體是細胞凋亡、壞死、還是程序性壞死，需要進一步排查分析來確定。而細胞凋亡是個復雜的過程，針對凋亡時期不同，檢測的方法有所不同。那如何去確定哪條途徑被觸發，在哪個步驟被阻斷，以及抑制劑是否能夠抑制呢？下面介紹幾種常用的測定方法。 一：細胞凋亡的形態學檢測 發生
電泳時的DNA分子量Marker和Agarose濃度的選擇
電泳時的DNA分子量Marker和Agarose濃度的選擇DNA片段長度Agarose濃度? 使用Marker種類200 bp以下3%以上 фX174-Hae Ⅲ digest DNA Marker фX174-Hinc Ⅱ digest DNA Marker DL500?DNA Marker
細胞凋亡檢測實驗——DNA－片斷化檢測
實驗方法原理細胞凋亡時主要的生化特征是其染色質發生濃縮, 染色質DNA 在核小體單位之間的連接處斷裂, 形成50~300 kbp 長的DNA 大片段, 或180~200 bp 整數倍的寡核苷酸片段, 在凝膠電泳上表現為梯形電泳圖譜（DNA ladder）。細胞經處理后，采用常規方法分離提純DNA，進
常用細胞凋亡檢測方法（三）
三、線粒體膜勢能的檢測? 線粒體在細胞凋亡的過程中起著樞紐作用，多種細胞凋亡刺激因子均可誘導不同的細胞發生凋亡，而線粒體跨膜電位DYmt的下降，被認為是細胞凋亡級聯反應過程中最早發生的事件，它發生在細胞核凋亡特征（染色質濃縮、DNA斷裂）出現之前，一旦線粒體DYmt崩潰，則細胞凋亡不可逆轉。 線
DNA－isolation－extraction
CTAB TECHNIQUE / Method / Schedule / Protocol FOR DNA ISOLATION / DNA EXTRACTION FROM PLANT LEAF / LEAVES SAMPLES (see also DNA RNA double isolation
DNA片斷化檢測細胞凋亡
細胞凋亡時主要的生化特征是其染色質發生濃縮， 染色質DNA在核小體單位之間的連接處斷裂， 形成50~300kbp長的DNA大片段， 或180~200bp整數倍的寡核苷酸片段， 在凝膠電泳上表現為梯形電泳圖譜（DNA ladder）。細胞經處理后，采用常規方法分離提純DNA,進行瓊脂糖凝膠和溴
足跡法(Footprinting)
Footprinting Procedures·?????????DNase I Footprinting?(Mike A. Dyer)·?????????DNase I footprintingDetermining the site of binding for a protein on a D
動物細胞培養及外源基因導入的原理和操作步驟（一）
實驗原理細胞培養是現代生物學研究中應用最為廣泛的技術之一。它的突出優點，一是研究對象是活的細胞，可長時期地監控、檢測甚至定量評估其形態、結構和生命活動等；二是可以人為地嚴格控制研究條件，便于研究各種物理、化學、生物等外界因素對細胞生長、發育和分化等的影響，有利于單因子分析；三是研究的樣本可以達到比較
Cloning－of－small－RNAs－with－5’－phosphate－and－3’－OH－ends2
3’ Adaptor Ligation and PurificationHeat shock the RNA by putting at 90°C for 30 seconds. Snap cool on ice.Set up the 3’Adaptor ligation reaction in a
動物細胞培養及外源基因導入的原理和方法
細胞培養是現代生物學研究中應用最為廣泛的技術之一。它的突出優點，一是研究對象是活的細胞，可長時期地監控、檢測甚至定量評估其形態、結構和生命活動等；二是可以人為地嚴格控制研究條件，便于研究各種物理、化學、生物等外界因素對細胞生長、發育和分化等的影響，有利于單因子分析；三是研究的樣本可以達到比較均一性。
Bioanalyzer
Protocol for Bioanalyzer RNA nano chippreparation of material12 samples per chipquantitative range 25–500 ng/μlquantitation accuracy 20%CV (for ladder
常用的幾種細胞凋亡檢測方法詳細步驟（二）
第三種 線粒體膜勢能的檢測?線粒體在細胞凋亡的過程中起著樞紐作用，多種細胞凋亡刺激因子均可誘導不同的細胞發生凋亡，而線粒體跨膜電位DYmt的下降，被認為是細胞凋亡級聯反應過程中最早發生的事件，它發生在細胞核凋亡特征（染色質濃縮、DNA斷裂）出現之前，一旦線粒體DYmt崩潰，則細胞凋亡不可逆轉。線粒體
關于細胞凋亡的晚期檢測介紹
細胞凋亡晚期中，核酸內切酶（某些Caspase的底物）在核小體之間剪切核DNA，產生大量長度在180-200 bp 的DNA片段。對于這一現象的檢測通常有以下兩種方法： 1) TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP n
瓊脂糖電泳protocol
試劑:? 試樣20μl??? DNA ladder??? 瓊脂糖?? TAE緩沖液?? 上樣緩沖液含0.5μg/ml EB的電泳緩沖液50×TAE貯存液:?? Tris??????????????????? 242g冰乙酸????????????????? 57.1ml0.5mol/LEDTA(pH
Quantitating－RNA
RNA quantitation is an important and necessary step prior to most RNA analysis methods. Here we discuss three common methods used to quantitate RNA an
DNA梯狀標志的概念和用途
中文名稱DNA梯狀標志英文名稱DNA ladder marker定 義由一系列含堿基對數目不同的DNA片段組成，凝膠電泳后DNA條帶呈階梯狀分布，可作為樣本DNA分子大小的標志物。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
細胞凋亡的晚期檢測
晚期檢測細胞凋亡晚期中，核酸內切酶（某些Caspase的底物）在核小體之間剪切核DNA，產生大量長度在180-200 bp 的DNA片段。對于這一現象的檢測通常有以下兩種方法：1)?TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP n
關于細胞凋亡的晚期檢測的介紹
細胞凋亡晚期中，核酸內切酶（某些Caspase的底物）在核小體之間剪切核DNA，產生大量長度在180-200 bp 的DNA片段。對于這一現象的檢測通常有以下兩種方法： 1) TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP n
細胞凋亡的晚期檢測方法介紹
細胞凋亡晚期中，核酸內切酶（某些Caspase的底物）在核小體之間剪切核DNA，產生大量長度在180-200 bp 的DNA片段。對于這一現象的檢測通常有以下兩種方法：1)?TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-
動物細胞培養及外源基因導入的原理和操作步驟
實驗概要通過本實驗掌握傳代細胞培養的基本方法，了解無菌操作的基本原則。掌握磷酸鈣介導的貼壁細胞的通用轉染方法。了解細胞凋亡的形態特征，掌握細胞凋亡DNA梯度（“DNA Ladder”）電泳檢測法。實驗原理細胞培養是現代生物學研究中應用最為廣泛的技術之一。它的突出優點，一是研究對象是活的細胞，可長時期
細胞凋亡晚期檢測技術
??晚期檢測：? ? 細胞凋亡晚期中，核酸內切酶（某些Caspase的底物）在核小體之間剪切核DNA，產生大量長度在180-200 bp 。對于這一現象的檢測通常有以下兩種方法：?? ??1.TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d
瓊脂糖凝膠電泳MARKER就是跑不開的原因
DNA電泳一定要使用DNA Marker或已知大小的正對照DNA來估計DNA片段大小。Marker應該選擇在目標片段大小附近ladder較密的，這樣對目標片段大小的估計才比較準確。需要注意的是Marker的電泳同樣也要符合DNA電泳的操作標準。如果選擇λDNA/HindIII或者λDNA/EcoRI
細胞凋亡檢測方法總覽（早期檢測、晚期檢測和mRNA水平）
細胞凋亡的檢測方法，從大類上還可以分為早期檢測、晚期檢測和mRNA水平的檢測。一、早期檢測1、PS（磷脂酰絲氨酸）在細胞外膜上的檢測2、細胞內氧化還原狀態改變的檢測3、細胞色素C的定位檢測4、線粒體膜電位變化的檢測二、 晚期檢測1、TUNEL2、LM-PCR Ladder （連接介導的PCR檢測）當