顯微操作技術（micromanipulationtechnique）
顯微操作技術（micromanipulation technique）是指在高倍復式顯微鏡下，利用顯微操作器（micromanipulator）進行細胞或早期胚胎操作的一種方法。顯微操作器是用以控制顯微注射針在顯微鏡視野內移動的機械裝置。顯微操作的基礎平臺--倒置研究級顯微鏡（例如OLYMPUS的IX71/81）各種活細胞應用實驗，如顯微操作、細胞培養，IVF，ICSI等. 顯微鏡的觀察方式一定要選擇---浮雕相襯觀察方式(簡稱RC觀察方式).絕對不能選擇相差觀察方式，因為相差觀察在顯微鏡觀察下只能看到平面效果，根本沒有3D效果，這樣在做顯微操作時很難進行注射，因為都是平面效果，下針比較困難，所以顯微鏡的觀察方式一定要選擇---浮雕相襯觀察方式， 顯微操作的最佳選擇:浮雕相襯觀察方式(簡稱RC).原因在于浮雕相襯系統能夠產生高反差的3D 圖像，可用于塑料器皿中的樣品。浮雕相襯用于細胞受精，使細胞核膜可以更容易看到和穿刺......閱讀全文
顯微操作技術（micromanipulation－technique）
顯微操作技術（micromanipulation technique）是指在高倍復式顯微鏡下，利用顯微操作器（micromanipulator）進行細胞或早期胚胎操作的一種方法。顯微操作器是用以控制顯微注射針在顯微鏡視野內移動的機械裝置。顯微操作的基礎平臺--倒置研究級顯微鏡（例如OLYMPUS的I
微載體培養技術（microcarrier－culture－technique）原理操作2
5. 微載體培養操作要點 ●培養初期：保證培養基與微球體處于穩定的PH與溫度水平，接種細胞（對數生長期，而非穩定期）至終體積1/3的培養液中，以增加細胞與微載體接觸的機會。不同的微載體所用濃度及接種細胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微載體含量，更高的微載體濃度需要控制環境或經常換液。 ●
微載體培養技術（microcarrier－culture－technique）原理操作1
一、微載體培養應用此技術于1967年被用于動物細胞大規模培養。經過三十余年的發展，該技術目前已漸日趨完善和成熟，并廣泛應用于生產疫苗、基因工程產品等。微載體培養是目前公認的最有發展前途的一種動物細胞大規模培養技術，其兼具懸浮培養和貼壁培養的優點，放大容易。目前微載體培養廣泛用于培養各種類型細胞，生產
Embryo－Dissection－and－Micromanipulation－Tools
Embryo Dissection and Micromanipulation ToolsHazel L. Sive,?Robert M. Grainger, and?Richard M. HarlandAdapted from "Equipment for Embryo Experiments,"
掃描隧道顯微鏡
掃描隧道顯微鏡（scanning tunneling microscope，STM） 由Binnig等1981年發明，根據量子力學原理中的隧道效應而設計。當原子尺度的針尖在不到一個納米的高度上掃描樣品時，此處電子云重疊，外加一電壓（2mV~2V），針尖與樣品之間產生隧道效應而有電子逸出，形成隧
免疫印跡技術(Immunoblotting－technique)
免疫印跡技術又稱蛋白質印跡(Western blotting)是一種借助抗原鑒定特異性抗體的有效方法，該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。本實驗以檢測可提取性核抗原(ENA)抗體為例。【實驗原理】先將ENA混合抗原經SDS-PAGE電泳，使各種抗原成分根據分子量不
沉淀反應技術(Precipitation－reaction－technique)
一、???? 概述?可溶性抗原（如細菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他來源的蛋白質、多糖質、類脂體等）與其相應的抗體相遇后，在電解質參與下，抗原抗體結合形成白色絮狀沉淀，出現白色沉淀線，此種現象稱為沉淀反應。沉淀反應中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,與沉淀原發生反應的抗體稱為沉淀
細胞研究用的顯微鏡分類和工作原理（六）
目前掃描電鏡的分辨力為6～10nm，人眼能夠區別熒光屏上兩個相距0.2mm的光點，則掃描電鏡的最大有效放大倍率為0.2mm/10nm=20000X。圖2-18 光學顯微鏡、TEM、SEM成像原理比較圖2-19 人類血細胞SEM照片（三）、掃描隧道顯微鏡掃描隧道顯微鏡（scanning tunne
免疫熒光技術(immunofluorescent－technique)簡介
1、熒光免疫測定技術的概念將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進行標記，試劑與標本中相應的抗體或抗原反應后，測定復合物中的熒光素，這種免疫技術，稱為免疫熒光素技術。2、技術分類（1）熒光抗體技術（熒光顯微鏡技術）：抗原抗體反應后，利用熒光顯微鏡判定結果的檢測方法。（2）免疫熒光測定技術：抗原抗體反應后，利用
免疫熒光技術(immunofluorescence－technique)2
實驗材料 1. 40 孔酶標板 ? 2. 1:300 乙肝表面抗原溶液 ? 3. 1:10 待測血清 ? 4. 健康人血清 ? 5. HBsAg 診斷血清 ? 6. 辣根過氧化物酶標記羊抗人 IgG 抗體（酶標二抗） ? 7. 抗原稀釋液（ pH9
免疫熒光技術(immunofluorescence－technique)3
思考題 1. 酶聯免疫吸附實驗的基本原理是什么？常用方法有那些？ ? 2. 間接法和直接法相比各有什么優缺點？ ? 放射免疫測定法—— 125 I 標記技術 放射免疫測定 (radioimmunoassay, RIA) 是將同位分析的高靈敏度與抗原抗體反應的特異性相結合，
沉淀反應技術(Precipitation－reaction－technique)（2）
2．取試管5支（5mm×50mm）置于試管架上，編號。第1、2試管內加炭疽沉淀血清，第3、4試管內加正常血清，第5管內加待檢抗原，分別用毛細滴管加至4mm～5mm。3．第1、4、5試管輕輕疊加等量緩沖液，第2、3試管輕輕疊加等量待檢抗原。為防止上下兩界面破壞，可將小試管從試管架取出，微傾斜，沿試管壁
層析技術(Layeranalise－technique)
離子交換層析技術是以離子交換纖維素或以離子交換葡聚糖凝膠為固定相，以蛋白質等樣品為移動相，分離和提純蛋白質、核酸、酶、激素和多糖等的一項技術。（一）原理在纖維素與葡聚糖分子上結合有一定的離子基團，當結合陽離子基團時，可換出陰離子，則稱為陰離子交換劑。如二乙氨乙基（Dicthylaminoethyl，
免疫熒光技術(immunofluorescence－technique)1
免疫熒光技術(immunofluorescence technique)是一種以熒光物作為標記物的免疫分析技術，熒光物質分子在特定條件下吸收激發光的能量后，分子呈激發態而極不穩定，其迅速回到基態時，可以電磁輻射形式釋放出所有的光能，發射出波長較照射光長的熒光。用熒光素與已知的抗體（或抗原，較少用
沉淀反應技術(Precipitation－reaction－technique)（1）
一、 概述可溶性抗原（如細菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他來源的蛋白質、多糖質、類脂體等）與其相應的抗體相遇后，在電解質參與下，抗原抗體結合形成白色絮狀沉淀，出現白色沉淀線，此種現象稱為沉淀反應。沉淀反應中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,與沉淀原發生反應的抗體稱為沉淀素（pre
Immunofluroescence－Technique
Fix cells in 2% formaldehyde in PBS/pH 7.4 for 15 min. at 20oC. 2% formaldehyde is made up fresh prior to use by dissolving the appropriate amount of
Sterile－Technique
Good sterile technique is the first and most important step in insuring consistent results when employing recombinant DNA and protein expression techn
層析技術(Layeranalise－technique)(3)
3．平衡 將DEAE―纖維素放入0.0lMol/L pH 7.4 PB液中（即起始緩沖液），靜止1h，不時攪拌，待纖維素下沉后，傾去上清液或抽濾除去洗液，如此反復幾次至傾出液體的pH值與加入的PB液的pH值相近時為止。4．裝柱 層析柱的選擇要大小、長度適當。一般而言，柱長和柱直徑之比為10：1～20
層析技術(Layeranalise－technique)(2)
離子交換纖維素的優點為：①離子交換纖維素為開放性長鏈，具有較大的表面積，吸附容量最大；②離子基團少，排列稀疏，與蛋白質結合不太牢固，易于洗脫；③具有良好的穩定性，洗脫劑的選擇范圍廣。 2．離子交換交聯葡聚糖 離子交換交聯葡聚糖也是廣泛使用的離子交換劑，它與離子交換纖維素不同點是載體不同，常用交聯葡聚
層析技術(Layeranalise－technique)(1)
離子交換層析技術是以離子交換纖維素或以離子交換葡聚糖凝膠為固定相，以蛋白質等樣品為移動相，分離和提純蛋白質、核酸、酶、激素和多糖等的一項技術。 （一）原理 在纖維素與葡聚糖分子上結合有一定的離子基團，當結合陽離子基團時，可換出陰離子，則稱為陰離子交換劑。如二乙氨乙基（Dicthy
顯微操作的技術特點
采用顯微操作已取得許多實驗成果，如分離出微生物或孢子或培養細胞，進行單細胞培養；對生長點等施以顯微手術，對其進行功能的研究；插入微電極，進行細胞·細胞間的電位差測量；將細胞核等細胞器進行摘除或移入而進行的生理學或遺傳學的實驗等。顯微操作的特點是直觀、定位準確并可進行穩定的三維操作。它使各類手術操作的
Principles－of－Aseptic－Technique
INTRODUCTIONThe regulations promulgated to implement the amended Animal Welfare Act require that all survival surgery be performed using aseptic proce
免疫球蛋白提取技術(Immunoglobulin－isolation－technique)
免疫球蛋白（Immunoglobulin?Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。?隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多
免疫膠體金技術(Immune－colloidal－gold－technique)
（一）??原理?免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電
顯微注射技術的操作方法
以細胞內微注射和微灌注技術為基礎的玻璃針頭(GlassNeedle，精細的玻璃微量毛細移液管)的使用，已經在越來越多的實驗生物學研究領域中成為一項非常普遍的操作方法，比如在體外受精、轉基因中等等。描述這些技術最恰當的話應當稱其為---顯微操作，因為這些操作是通過單個的或多個的筒狀玻璃微量移液管、精確
免疫球蛋白提取技術(Immunoglobulin－isolation－technique)2
九、蛋白定量技術???（一）雙縮脲測定法?1．原理??蛋白質中的肽鍵有雙縮脲反應，在堿性溶液中與二價銅離子形成藍紫色的絡合物，在一定的范圍內，顏色的深淺與蛋白質的含量成正比。此法特異性強，游離的氨基酸、小肽和核酸均不產生這種反應，但此法不夠敏感，僅能測出毫克水平。?2．試劑配制?硫酸銅（CuSO4·
離心技術（centrifugation－technique）與離心機類型(1)
最大速度方法(1)移動界面超速離心法含幾個組分的樣品在足夠高的離心場中離心時，每種顆粒都達到其最大沉降速度，這時樣品開始分離。離心管的上層逐漸形成透明的上清液，并形成對應于樣品各組分的一系列濃度界面，界面的移動相對于每種組分來說是特征的。雖然利用這種方法不一定能實現組分的純化分離，但可以通過監測界面
蛋白質印記技術(Westernblotting－technique)
一、 概 述 原理 Western-blotting印記是將蛋白質經分離后從凝膠轉移到固相支持物上，然后用特異性的抗體進行檢測。 二、 材料和方法 (一) 材料 1． 質粒 pW425t+SO7 2. 宿主菌菌株 E.coli X51，-86℃保存 3. 培養基 LB基本
免疫膠體金技術(Immune－colloidal－gold－technique)概述
（一）? 原理? 免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正
離心技術（centrifugation－technique）與離心機類型(2)
離心機類型通常所使用的離心機根據轉子轉速大小的不同可分為普通離心機、高速離心機和超速離心機三類。(1)普通離心機一般來說，最大轉速不超過6000r/min 者屬普通離心機；如國產的80—1型，LXJ—Ⅱ型等。離心機轉速與相對離心力的測算，如圖2—37。普通離心機轉子在室溫下運轉，轉子室內的溫度一般無