蛋白濃度測定及常用方法
蛋白質溶液濃度測定方法有多種,下述幾種方法可供選用。蛋白質濃度的測定,往往用于計算純化方法的回收率的重要方法。一、蛋白濃度的直接測定(UV法)這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg 公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白 質。從而顯得結果很不穩定。蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受 到平行物質的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。二、比色法蛋白濃度測定蛋白質通常是多種蛋白質的化合物,比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。一、雙縮脲法雙縮脲法是第一個用比色法測定蛋白質濃度的......閱讀全文
蛋白濃度測定及常用方法
蛋白質溶液濃度測定方法有多種,下述幾種方法可供選用。蛋白質濃度的測定,往往用于計算純化方法的回收率的重要方法。一、蛋白濃度的直接測定(UV法)這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg 公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測
常用蛋白質濃度測定方法匯總
蛋白質是細胞中最重要的含氮生物大分子之一,承擔著各種生物功能。蛋白質的定量分析是蛋白質構造分析的基礎。目前常用的蛋白測量的方法主要有BCA法、考馬斯亮藍法(Bradford)和Lowry法等。BCA法??原理在堿性環境下蛋白質與Cu2+絡合并將Cu2+還原成Cu1+(biuret reaction)
4種常用蛋白濃度測定方法的比較
蛋白濃度測定方法有很多種,各種蛋白質含量測定的研究也屢見報道。每種方法都有其優點和局限性,在蛋白質樣品中往往會含有一些化學試劑,有些化學試劑會干 擾蛋白濃度測定。因此,尋找合適的實驗方法以避免干擾對蛋白濃度測定的準確性至關重要。基于Lowry法在測定PEG_IL_6樣品時出現大量黃綠色沉 淀,尿素對
蛋白濃度測定方法
微量凱氏定氮法:由于蛋白質中存在著含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸,因此蛋白質溶液在280nm處具有紫外吸收高峰。在一定濃度范圍內,蛋白質溶液在此波長處的吸光度與其濃度呈正比關系,因此利用這一性質可進行蛋白質定量測定。微量凱氏定氮法迅速、簡便、不消耗樣品、低濃度鹽類不干擾測定,可測定0.1~1.0m
蛋白質濃度測定常用的三種方法
測定蛋白質濃度的方法有很多,科研工作者廣泛使用的方法比如紫外吸收法,雙縮脲法,BCA方法,Lowry法,考馬斯亮藍法,凱氏定氮法等等 ,今天小編以UV法,BCA法,考馬斯亮藍法,其中的三種方法的測定蛋白質濃度的原理、優缺點、操作以及注意事項做詳細介紹。UV法這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。
請教Bradford法測定蛋白濃度原理及方法
解:是利用蛋白質-染料結合的原理,定量地測定微量蛋白質濃度的快速靈敏的方法。試劑和儀器一、試劑試劑盒自備:G250染色液、BSA標準蛋白。BSA標準蛋白濃度已稀釋至500μg/ml,-20℃保存。二、測試樣品待測樣品蛋白濃度稀釋在50-500μg/ml范圍內為宜。三、儀器96孔酶標、酶標儀。操作方法
藥物濃度測定常用技術
(一)光譜法 多數藥物或代謝物本身在紫外光區即存在吸收峰,一些藥物或代謝物受激發后,本身即可發射熒光;而另外一些藥物還可通過特異的顯色反應用分光法檢測。但無論可見光分光光度法、紫外光度法還是熒光光度法,用于體液中藥物檢測時,都存在靈敏度低、特異性差的缺點,特別是易受代謝物干擾。雖然采用提取、雙
藥物濃度測定常用技術
藥物濃度測定常用技術是臨床醫學檢驗技士/技師/主管技師考試復習需要了解的生化檢驗知識,醫學|教育網搜集整理了相關內容與考生分享,希望給予大家幫助!(一)光譜法多數藥物或代謝物本身在紫外光區即存在吸收峰,一些藥物或代謝物受激發后,本身即可發射熒光;而另外一些藥物還可通過特異的顯色反應用分光法檢測。但無
蛋白濃度測定的方法具體有哪些
蛋白濃度測定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,不需要任何試劑,操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收,這是由于蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的,所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核
蛋白濃度測定的方法具體有哪些
蛋白濃度測定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,不需要任何試劑,操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收,這是由于蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的,所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核
蛋白濃度測定的方法具體有哪些
蛋白濃度測定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,不需要任何試劑,操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收,這是由于蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的,所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核
蛋白濃度測定的方法具體有哪些
蛋白濃度測定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,不需要任何試劑,操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收,這是由于蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的,所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核
蛋白濃度測定的方法具體有哪些
蛋白濃度測定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,不需要任何試劑,操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收,這是由于蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的,所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核
蛋白濃度測定的方法具體有哪些
蛋白濃度測定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質含量是講蛋白質溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,不需要任何試劑,操作簡單且易回收。蛋白質溶液在280nm附近有強烈的吸收,這是由于蛋白質中酪氨酸、色氨酸殘基而引起的,所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核
幾種蛋白質濃度測定方法
一、Bradford法蛋白質與考馬斯亮蘭染料結合生成藍色物質,藍色物質的量與蛋白質濃度的高低成正比。生成的藍色物質在595nm處有最大光吸收,通過測定595nm的光吸收,來測定蛋白質濃度。實驗中一般利用牛血清白蛋白(BSA)來作標準曲線,此法的靈敏度為25~200ug/ml。甘油、吐溫(tween)
常用灰分測定原理及方法
一、糧食灰分的測定 糧食中除含有大量有機物質外,還含有較豐富的無機成分。經高溫灼燒遺留的無機物質稱為灰分。各種糧食的灰分因品種、土壤、氣候、肥料及灌溉等條件的不同而有差異。禾谷類糧食中的灰分質量分數一般在1.5~3.0%。 灰分在糧粒中的分布極不均勻,胚乳灰分含量最低,胚部次之,皮層
常用蛋白質測定方法的原理
1、凱氏定氮法準備4個50mL凱氏燒瓶并標號,想1、2號燒瓶中加入定量的蛋白質樣品,另外兩個燒瓶作為對照,在每個燒瓶中加入硫酸鉀-硫酸銅混合物,再加入濃硫酸,將4個燒瓶放到消化架上進行消化。消化完畢后進行蒸餾,全部蒸餾完畢后用標準鹽酸滴定各燒瓶中收集的氨量,直至指示劑混合液由綠色變回淡紫紅色,即為滴
常用蛋白質測定方法的原理
1、凱氏定氮法準備4個50mL凱氏燒瓶并標號,想1、2號燒瓶中加入定量的蛋白質樣品,另外兩個燒瓶作為對照,在每個燒瓶中加入硫酸鉀-硫酸銅混合物,再加入濃硫酸,將4個燒瓶放到消化架上進行消化。消化完畢后進行蒸餾,全部蒸餾完畢后用標準鹽酸滴定各燒瓶中收集的氨量,直至指示劑混合液由綠色變回淡紫紅色,即為滴
測定蛋白濃度三種常見方法
酪安酸差色光譜法:1.? 打開分光光度劑,預熱30分鐘,是紫外燈處于穩定發光狀態2.? 在2容積為1mlde 微量石英比色杯中分別加入900ulPH7.4,PH12.0的0.1mol/l磷酸緩沖液,把盛有PH12.0緩沖液的比色杯放入樣品杯中放入支架上,把盛有PH7.4緩沖液的比色杯放入到參比杯的支
測定蛋白質濃度的方法有哪些?
蛋白質是細胞中最重要的含氮生物大分子之一,承擔著各種生物功能。蛋白質的定量分析是蛋白質構造分析的基礎。 下面小編給大家匯總一下有哪些常用的蛋白測量的方法。 BCA法 原理 在堿性環境下蛋白質與Cu2+絡合并將Cu2+還原成Cu1+(biuret reaction)。BCA
OpenSPR快速測定α乳清蛋白濃度方法詳解
什么是濃度分析?? 一般在濃度分析中,需加入不同濃度的目標分析物做測定,并根據測量的結果對每個樣本的濃度創建一個標準曲線。隨著分析物濃度的增加,與固定的結合配偶體的結合速率也增加。然后通過標準曲線確定未知的樣品中分析物的濃度。 為什么我們要測量蛋白濃度? 蛋白對研究很重要,因為它們構成了植物和動物細
蛋白質紫外吸收與濃度測定方法
[原理]由于蛋白質中存在著含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸,因此蛋白質溶液在280nm處具有紫外吸收高峰。在一定濃度范圍內,蛋白質溶液在此波長處的吸光度與其濃度呈正比關系,因此利用這一性質可進行蛋白質定量測定。該法迅速、簡便、不消耗樣品、低濃度鹽類不干擾測定,可測定0.1~1.0mg/mL的蛋白質溶液。
常用脂肪測定原理及方法匯總
一、糕點、糖果中脂肪的測定 脂肪是食品的主要成分之一,常用的測定方法有:索氏提取法、酸水解法、三氯甲烷冷浸法、羅茲-哥特里法、蓋勃法、巴布科氏法和尼霍夫氏堿法等。糕點及糖果食品主要用索氏提取法和酸水解法。 1、索氏提取法 本法適用于各類食品中脂肪含量的測定,操作簡便,準確度高,但提取時間長
蛋白質水解程度測定的常用方法
水解程度測定的常用方法是茚三酮法,利用待測蛋白樣品完全水解液做為茚三酮比色的標準樣品測定蛋白質的水解度。?水解度( Degree of hydrolysis,DH)代表水解過程中蛋白質肽鍵被裂解的程度,常用百分數來表示:DH =h/htot× 100%式中,h是水解后每克蛋白質被裂解的肽鍵數,毫摩爾
溶菌酶分離純化及酶活力、蛋白濃度測定3
同時,為了監測分離純化的效果,我們必須對相應的結果進行檢測。對于酶而言,主要通過其催化特異的反應進行監測。溶菌酶對革蘭氏陽性菌的細胞壁有明顯的破壞作用,可利用這一特性進行溶菌酶活性的監測,以便我們區分在純化過程中,含有溶菌酶的組分。類似的采用 DEAE- 纖維素對抗體進行精制,特別是經過初步純化后的
溶菌酶分離純化及酶活力、蛋白濃度測定1
一、實驗目的和內容目的:1. 通過本次實驗的學習和操作,要求學生掌握離子層析的原理以及離子交換層析的操作方法;2. 掌握離子交換樹脂的再生和保存;3.掌握比色法測定溶菌酶的酶活。內容:采用離子交換層析對實驗二獲得的初提液,進行進一步的分離純化以得到較高純度的溶菌酶。具體來說包括:1.離子交換層析分離
溶菌酶分離純化及酶活力、蛋白濃度測定2
2.加樣蛋白濃度低于20 mg/mL,上樣體積小于柱體積的1/3。3. 在整個實驗過程中,流速必須得到一定的控制。過大,會使填料壓縮緊密,導致流速過低,層析柱有可能堵塞而實驗失敗,流速過小,實驗時間過長,引起酶的活性變化。對于CM Sepharose FF填料,最適流速在100cm/h以下。
臨床化學檢查方法介紹蛋白質濃度測定
蛋白質濃度測定介紹: 蛋白質濃度測定是利用化學或物理方法測定蛋白質的濃度,是往往用于計算純化方法的回收率的重要方法。蛋白質濃度測定正常值: 人體正常值一般是 60 - 80 g/L。蛋白質濃度測定臨床意義: 異常結果: (1) 雙縮脲法:雙縮脲法是第一個用比色法測定蛋白質濃度的方法,硫銨不干
BCA蛋白濃度測定方法和操作注意事項
BCA 蛋白定量法是一種快速靈敏、穩定可靠的蛋白定量測定方法,其測定范圍是10-2000ug/ml,是比Lowry 法更優越的專用于檢測總蛋白質含量的產品。 BCA 蛋白定量測定方法:(96孔板) 1、配制BCA 工作液: 根據標準品和樣品數量,按50 體積試劑A,1 體積試劑B 配制
Bradford蛋白濃度測定試劑盒使用方法
Bradford蛋白濃度測定試劑盒使用方法:? ? ? ? 1、 取1ml蛋白標準配置液加入到25mgBSA的蛋白標準管中,完全溶解蛋白標準品,即為25mg/ml的蛋白標準溶液。配制成的蛋白標準溶液? ? ? ? ? ? ? ? 可-20℃長期保存。? ? ? ? 2、 取適量25mg/ml蛋白標準